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Consejo Regional XXII - Callao
CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUASCOLIFORMES TOTALES FERMENTACIN DE TUBOS
MLTIPLES
[email protected],[email protected],
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CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUAS
COLEGIODE BIOLOGOS DEL PERUConsejo Regional XXII- Callao
CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUAS
GRUPO COLIFORMES
MTODO: FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES
FTM
Dr.CsarLazcanoCarreo
Blga.EstherLazcanoCarreo
Blga.RosaAmeliaReteguiEla
PRINCIPALESBACTERIASINDICADORASENDICESYSUSMETODOSDEANLISIS
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CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUAS
Componentes de unanlisis microbiolgico
Muestreo: Se debe realizar deforma adecuada siguiendoprotocolos establecidos.
Obteniendo muestrasestadsticamente significativas.
Mtodo analtico: Se puedenemplear diversos mtodosanalticos, eligiendo el ms
sensible para detectar lo que sequiere.
Interpretacin de resultados:Para ello se debe saber el
significado de losmicroorganismos.
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CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUAS
PRINCIPALES BACTERIAS INDICADORAS ENDICES Y SUS METODOS DE ANLISIS
BacteriasHeterotrficas
Grupocoliformes
Coliformestermotolerantes yE.coli
Pseudomonas aeruginosa
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Recuento de BacteriasHeterotrficas
Tienecomoobjetivodeterminar ladensidadde
bacteriasviables
aerobias
existentes
en
muestrasdeaguas,suelosylodos.
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Bacterias Heterotrficas:
Sonbacteriasaerobias,cosmopolitas,seencuentranentodoslosambientesysenutrenyreproducenapartirdesustanciasorgnicas.
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UFC(Unidades Formadoras de Colon ia):
Son el resultado del crecimiento de unao ms clulas bacterianas que se
visualizan en forma de colonia, cuandose usa como sustrato de crecimiento unmedio de cultivo solidificado con agar,gelatina, etc.
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MTODOS
Recuento de BacteriasHeterotrficas
Mtododerecuentola
placavertida
Mtododerecuento
diseminacinensuperficie
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PREPARACIN DE DILUCIONES
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MTODO DE SIEMBRA POREXTENSIN
AgarPlate CountoR2A
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MTODO DE SIEMBRA PORVERTIDO EN PLACA
AgarPlate CountoR2A
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RESULTADOS
100ufc 16ufc+de600ufc
104 105 106
Inculo= 0,1mL100x10x105 = 1x108 ufc /mL demuestraoriginal
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COLIFORMES
Caractersticas
Aerobias o anaerobias facultativas
Bacilos Gram negativos
Oxidasa negativos
No ser esporgenas
Fermentar la lactosa a 35 C en 48 horas
Produciendo cido gas y aldehdo
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GRUPO COLIFORMES
COMPRENDEN LOSGNEROS:
Escherichia: E. coli K lebsiella: K. pneumoniae
K. rhinoescleromatisK. oxytoca
K. ozaenae
Enterobacter: E. aerogenes
E. agglomerans
E. cloacae
Citrobacter: C. freundii
C. diversus
Serratia: S. marsescens
Hafnia: H. alvei
Coliformestermotolerantes
Coliformestotales
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COLIFORMES TOTALES
COLIFORMES
TERMOTOLERANTES
Escherichia
coli
RELACIN ENTRE COLIFORMES TOTALES,TERMOTOLERANTES Y E. coli
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COLIFORMES TOTALES
Incluye bacilos Gram (-) aerobios y anaerobiosfacultativos, fermentan la lactosa con produccin degas, cido o aldehdo en 24 h a 35-37oC.
Adems producen la enzima -galactosidasa.
Pertenecen a los gneros: Escherichia, Citrobacter,Klebsiella y Enterobactery los ambientales:Serratia yHafnia
KlebsiellaCitrobacterCitrobacter SerratiaSerratia
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MUESTRA
CaldoL.T. Incubara35C0,5C/2448h
Gasalas24h(coloramarillo)
Pruebapresuntiva(+)
s/gasalas24h(violeta)incubar
Gasalas48h(coloramarillo)
s/gasalas48h(colorvioleta)
Coliformesausentes()
CLVBB2%
Gasalas24h
Pruebaconfirmativa(+)
s/gasalas24hincubar
Gasalas48h s/gasalas48h
Incubara35C0,5C/2448h
DIAGRAMA PARA LA DETECCIN DE COLIFORMES TOTALES EN MUESTRAS DEAGUA
Coliformespresentes(+)
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PREPARACIN DE DILUCIONES 1/10AGUAS NO POTABLES
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PREPARACIN DE DILUCIONES 1/10AGUA POTABLE
Sedebepreparar10tubosconcaldolauril triptosa 2Xentubos20mL
Sembra 10mLdemuestraencadatubo
Incubar2448ha35.5+0.5oC
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MTODO DE LOS TUBOS MLTIPLES
MUESTRA
PREPARACION DE DILUCIONES
90 mL de agua dedilucin
10 mL demuestra
Agitar la dilucin10 mL de la dilucin
10--5 . . .Siembra de 1mL de la dilucin en 9mL
del caldo de cultivo
10--1
Agitar lamuestra
Incubar atemperatura y
tiempo adecuado
10--2 10--3 10--4
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GasenCLVBB2%
Agar EndoLes Incubara35C/24h
Coloniastpicas3oms
CaldoLT. Incubara35C/2448h
Gasalas24h s/gasalas24h
Incubara35C/2448h
Gasalas48h s/gasalas48h
Coliformesv er if ic ad o C ol ifo rm esausente
DIAGRAMA PARA VERIFICAR LA PRESENCIA DE COLIFORMES TOTALESFERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES
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FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES FTM
Observamos elCrecimiento bacteriano por lafermentacin de la lactosa con
produccin de cido y gas
La turbiedad nos indica que haycrecimiento
El gas la presencia del gas (CO2)coliformes
SinCrecimiento
mediotransparente
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FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES FTM
La turbiedad nos indicaque hay crecimiento y el
gas la presencia decoliformes (CO2) tubo
(+)
Sin Crecimientomedio transparente
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CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUAS
FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES NMP conindicador
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FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES FTM
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FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES FTM
Presencia de Gas en la Campana Durham
Turbiedad crecimiento
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CURSO TALLER ANLISIS MICROBIOLGICO DE AGUASCRECIMIENTO MICROBIANO
28
FERMENTACIN DE TUBOS MLTIPLES NmeroMs Probable NMP
Caldo EC (+)Indol(+)
(24 2hs a 44.5 0.2 C)
Caldo Lauril Triptosa (+)produccin de gas (+)(48 3hs a 35 0.5C)
Caldo Verde Brillante Bilis 2 % (+)produccin de gas (+)
(48 3hs a 35 0.5C)
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Basadoenelprincipioqueunaclulapuedesercapazdeproduciruncultivoturbioencaldosapropiados.
CLCULO:FACTOR DE DILUCIN (PRIMERO) X NMP
TABLA: 1000 X 11,0 = 11 000 cel./ml
NMEROMS
PROBABLE
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Escherichia coli
y COLIFORMES TERMOTOLERANTES
Ambos fermentan lalactosa a 44-45oC
Generalmente
predomina el gneroEscherichia, peroalgunos tipos deCitrobacter, Klebsiella y
Enterobacter, tambinson termotolerantes. Ecoli, es propia del tractointestinal del hombre yvertebrados.
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Escherichia col i
y COLIFORMES TERMOTOLERANTES
VALOR COMO
INDICADORE. coli , es el ndice decontaminacin fecal masadecuado. Coliformestermotolerantes es un grupomenos real pero es un ndiceaceptable de contaminacinfecal. Cualquiera de ellos puedeser escogido en los programasde verificacin y vigilancia deagua potable.
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SIGNIFICADO EN AGUA POTABLE
La presencia de E. coli ocoliformes termotolerantesen agua potable proveeevidencia de contaminacinfecal reciente; su deteccin,debe incluir muestrasfuturas e investigacin defuentes de contaminacinpotenciales, tales como untratamiento inadecuado oroturas en el sistema dedistribucin.
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Pruebapresuntiva(+)
MedioECMUG
Incubar/24h44,5C0,2C
MedioEC
Gas24h
Coliformes
termotolerantes
presentes
S/Gas24h
Coliformes
termotolerantes
ausentes
Gas24h+
fluorescencia
S/Gas24h
E.Colipresente E.coliausente
Diagrama para la deteccin de colif ormestermotorerantes y E. coli-Tubos mltiples
Incubar/24h44,5C0,2C
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Pseudomonas aeruginosa
Bacilos G(-), aerbicos, flagelados,generalmente origina infecciones en personas
predispuestas, especialmente en quemados ynadadores, en piel, mucosas, ojos y tractogenitourinario pudiendo originar septicemia ymeningitis. Es resistente al cloro y a una granvariedad de antibiticos
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Pseudomonas aeruginosa
Fuente: comn en aguas naturales,suelos y medio ambiente en general,especialmente en piscinas.
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Significado en agua potable: su presencia enagua potable y agua embotellada se asocia a oloresy sabores desagradables. Se deben tomar accionespara minimizar la biopelcula tuberas y reservorios,
lo que evita la proliferacin de Pseudomonasaeruginosa
Pseudomonas aeruginosa
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Pseudomonas aeruginosa por elmtodo de los tubos mltip les
MUESTRA
CALDOASPARAGINA Incubara35C/2448h
FluorescenciaverdeconluzUVencuartooscuro24h
Pruebapresuntiva(+)
S/fluorescenciaverde24h Incubar
Fluorescenciaverde48h S/fluorescenciaverde48h
P.aeruginosa()Agar ocaldoacetamida Incubara35C/2436h
Pruebaconfirmativa(+) P.aeruginosa(+)
Colorprpura
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MUCHAS GRACIAS
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