Diseños de investigación II:

Estudios Experimentales pre- clínicos

CURSO NACIONAL DE METODOLOGÍA DE INVESTIGACIÓN EN MTAC

CURSO NACIONAL DE METODOLOGÍA DE INVESTIGACIÓN EN MTAC

Dr. José Luis Aguilar OlanoInmuno-Reumatólogo. Investigador en Productos NaturalesJefe Sección Inmunología. Facultad de Ciencias. UPCH Médico Asistente Servicio Reumatología. HNCHPast-Presidente Asociación LatinoAmericana de Inmunología (ALAI)

No basta con llevar No basta con llevar un curso de un curso de

Metodología de la Metodología de la Investigación. Investigación.

Hay que hacerla.Hay que hacerla.

TRADICIONAL INFORMACIÓN

ACEPTACIÓN GLOBAL & FORMAL

CIENTÍFICA

INVESTIGACIÓN

INVESTIGACIÓN EN PRODUCTOS NATURALESINVESTIGACIÓN EN PRODUCTOS NATURALES Primero: ESTANDARIZACIÓNPrimero: ESTANDARIZACIÓN Segundo: ESTUDIOS PRE-CLÍNICOS:Segundo: ESTUDIOS PRE-CLÍNICOS:• EVALUACIÓN DE TOXICIDAD• ENSAYOS BIOLÓGICOSTercero: ENSAYOS CLÍNICOS (humanos):Tercero: ENSAYOS CLÍNICOS (humanos):

– FASE I: SEGURIDAD Y TOLERANCIA– FASE II: TOLERANCIA Y EFICACIA – FASE III: ENSAYO CLÍNICO– FASE IV: ESTUDIOS POST-MARKETING

8 a 12 años

x años

Estanda Estanda rizaciónrización

Acute Toxicity (LD50)

0

10

20

30

40

50

60

70

80

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

DOSES g/Kg

% L

D 5

0

LD50: 14,26 mg/Kg

Busca evidencia de toxicidad Busca evidencia de toxicidad in-vivoin-vivo en en animales experimentalesanimales experimentales

Toxicidad Aguda

Toxicidad Sub-crónica

Toxicidad Crónica

Evaluación de toxicidad potencial

Qué investigar ?

Información previa: Tradicional, referencias bibliográficas, costumbres de uso, raciocinio lógico

Disponibilidad de materiales y agentes biológicos: cultivos celulares, animales de experimentación, especies diferentes

Disponibilidad de equipos (convenios, estudios colaborativos)

Disponibilidad de personal entrenado (rotaciones, colaboraciones)

Participación de estadista

Qué investigar ?

Seleccionar modelo apropiado

Referencias de la literatura

Modelos animales: Comité de Ética de Investigación en animales (Ley- 27265). Buscar el modelo animal adecuado Seguridad de animales

Cultivos celulares: Evaluación de toxicidad, condiciones del cultivo celular, disponibilidad de líneas celulares adecuadas

PROFUNDIZAR PROFUNDIZAR CONOCIMIENTO BIOLÓGICO: CONOCIMIENTO BIOLÓGICO: POR QUÉ Y CÓMO FUNCIONA POR QUÉ Y CÓMO FUNCIONA EL PRODUCTO O TÉCNICA ? EL PRODUCTO O TÉCNICA ?

skin muscle tissue

lining layer

sub-lining layer

Esquema de la Cavidad Artificial Subcutánea

artificial cavity

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

3500

4000

PBS Carrageenan UG (100) UG (250) Pentoxifylline UG (100) -Pentoxifylline

+ carrageenan

TN

F -

(

pg/

ml )

*

* *

*

*

* * % inh

74

96

48

54

Asociación investigador básico y clínicoAsociación investigador básico y clínico

GESTIÓN Y ASEGURAMIENTO DE LA

CALIDAD EN EL LABORATORIO

Buenas Prácticas de Laboratorio Seguridad (Plan de Seguridad)

Equipamiento Organización Personal Procedimientos estándares de operación (SOPs) Registros Control de calidad Garantía de calidad Calibraciones Rangos Referenciales

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

• Deben de mantenerse todas las medidas de bioseguridad para: – Evitar contaminación del operador– Evitar contaminación de personal próximo– Evitar contaminación de muestras– Evitar contaminación del ambiente

• Leer Normas Prácticas de Bioseguridad del Laboratorio de Inmunología

• Deben de leer su MSDS (material security data sheet)

PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS OPERATIVOS

ESTANDARIZADOS ESTANDARIZADOS (SOPs)(SOPs)

CONTROLAR NO ES CUESTIONAR O DUDAR,

ES ASEGURAR LA CALIDAD

NO ES PERSONAL,

ES INSTITUCIONAL

Todo debe estar documentado

En cada ensayo, el esquema de colocación de muestras debe estar dibujada y debe

conservársela.

Todo debe estar

documentado

Resultado de lecturas de equipos o mediciones debe ser guardada en original, como documento fuente.

No transcripción

Todo debe Todo debe estar estar

documentado y documentado y conservarseconservarse

Una investigación Una investigación sólo termina sólo termina

cuando se publica cuando se publica en un medio en un medio

científicamente científicamente válidoválido