Pontificia Universidad Catlica de Chile

Postgrado en Ciencias de la Agricultura

Magister en Ciencias Animales

Dietas suplementadas con nucletidos, su efecto en el

sistema inmune innato de peces.

Seminario de Postgrado

Alumno: Luis Molina Abarza - lamolina@uc.cl

Profesor: Antonio Hargreaves

Santiago-Chile

****

1

Resumen

Los peces de cultivo estn sometidos a condiciones de estrs que generan un detrimento en sus

defensas y los hacen susceptibles a enfermedades. Estas enfermedades a veces no tienen

vacunas, existe resistencia a los antibiticos y adems existen prohibiciones a sus usos, la

gentica no ayuda en el corto plazo generando peces resistentes y al mismo tiempo todos estos

factores son de alto costo. De este modo, se estimul la bsqueda de alternativas ms econmicas

y beneficiosas. As surgi un grupo de sustancias denominadas Inmunoestimulantes (IE). El

objetivo de los IE es el fortalecimiento de la inmunidad del pez mediante suplementos nutritivos.

Los Nucletidos (NT) han sido propuestos como efectivos IE, adems de econmicos, inocuos y de

fcil obtencin. La adicin de NT a las dietas de peces tendra un efecto potenciador de su

respuesta inmune, especficamente la innata. Esto es importante debido a que la defensa de los

peces contra diversos patgenos est mediada en un c.a.80% por mecanismos innatos. Pese a

que los procesos fisiolgicos por los cuales este beneficio ocurre no estn muy claros, la

investigacin ha demostrado que al suplementar dietas con nucletidos se potencian diversos

mecanismos de la inmunidad del pez como: variadas citoquinas, aumenta la actividad de

macrfagos y especies reactivas del oxgeno, los que actuarn contra virus, bacterias y parsitos.

Abstract

Due to farming, fishes are under stress conditions. This makes them more susceptible to disease.

Some diseases has no vaccines, additionally antibiotics has resistance problems and bans to their

use, genetics does not help generating resistant fish, moreover all these factors has high cost. The

industry must to seek cheaper and more beneficial alternatives. Thus emerges a group of chemicals

known as Immunostimulants (IE). The goal of IE is to strengthen the immunity of the fish through

nutritive supplementation components. Nucleotides (NT) have been proposed as effective IE, as

well as economic, safe and readily available. The supplementation of NT into the diets of farming

fishes would have a powered immune response, specifically the innate. This is very important

because its represents the a.c.80% of the defenses against fish pathogens. Although the

physiological processes by which this benefit occurs are not clear, however research has shown

that dietary nucleotides enhanced the immunity of fish by: cytokines production, macrophage

activity and reactive oxygen species, which act against viruses, bacteria and parasites.

Keywords: Supplementation Nucleotides - Immunostimulants

2

ndice

Contenido Pgina

I. Introduccin.....3

II. Objetivos...5

III. Metodologa.............5

IV. Resultados.......6

a) Bioqumica y metabolismo de los nucletidos....6

b) Sistema inmune innato de los peces.......8

c) Interaccin suplementacin de nucletidos y respuesta inmune......12

V. Discusin ...18

VI. Conclusiones.....20

VII. Bibliografa.....21

Figuras:

1. Estructura de bases nitrogenadas, nuclesidos y nucletidos.6

2. Comparacin de la respuesta inmune en peces y mamferos..9

3. Posible efecto de la suplementacin de nucletidos como modulador

de la expresin gnica...15

4. Mortalidad acumulada debido al desafo con ISAv...16

5. Mortalidad acumulada debido al desafo con SRS...17

3

Introduccin

La Acuicultura ltimamente se ha caracterizado por incrementar su productividad,

sin embargo esto se traduce en peces cultivados a altas densidades, tendiendo a afectar

negativamente su salud y predisponindolos a sufrir enfermedades infecciosas (Galindo-

Villegas y Hosokawa, 2004). Adems, los distintos manejos realizados en los sistemas

productivos a menudo generan estrs sobre los animales, lo que puede resultar en

inmunosupresin, derivando en menores tasas de crecimiento y un incremento en la

susceptibilidad para contraer cuadros infecciosos (Anderson, 1996), incluso eventos

naturales como cambios medioambientales y conflictos sociales por jerarquas pueden

repercutir en disminucin de las defensas (Burrel et al. 2001b).

En el caso chileno, el auge que ha experimentado la industria se ve amenazado

por la fuerte penetracin de enfermedades, las que se traducen en prdidas por cerca

US$ 150.000.000 al ao (Biodinmica S.A. 2005) y que representaran 12% de prdida

en produccin (Sthephen Gunther 2009, comunicacin personal). Otro punto, es que los

resultados de las terapias con antibiticos va oral o inyectable son variables, pudiendo

controlar las mortalidades, aunque en general no han sido capaces de controlar la

enfermedad de forma definitiva (Biodinmica 2005 S.A.). Esto nos lleva a pensar y buscar

mecanismos que generen aumentos en la inmunidad del pez.

La inmunidad est definida como la capacidad de resistir una infeccin (Sakai

1999). A su vez, la inmunidad de los peces est mediada principalmente por mecanismos

innatos o inespecficos, representando cerca de un 80% del total de inmunidad (Anderson

1992). Se han descrito distintas sustancias capaces de estimular al sistema inmune

innato, tanto humoral como celular. Entre ellos destacan: agentes qumicos, componentes

de bacterias, polisacridos, extractos animales y vegetales, factores nutricionales y

citoquinas, entre otros (Sakai 1999, Gil 2002, Galindo-Villegas y Hosokawa, 2004).

Adems de estimular el sistema inmune innato, los Inmunoestimulantes no presentaran

efectos colaterales, tampoco problemas de residuos en carne, no contaminaran, seran

fciles de administrar y no tendran perodo de carencia (Galindo-Villegas y Hosokawa,

2004).

A su vez, los inmunoestimulantes (IE) pueden actuar sinrgicamente con

antibiticos y por lo tanto mejorar los efectos de este tipo de medicacin. Sin embargo, los

4

IE corresponderan principalmente agentes profilcticos que deberan ser usados para

elevar las barreras generales, no como elementos curativos (Raa 2000).

Se ha descrito que los IE generan beneficios en acuicultura al reducir mortalidades

debido a patgenos oportunistas, prevenir enfermedades virales, disminuir mortalidad en

los primeros estados de peces, mejorar la resistencia a parsitos e incrementar la

eficacia de vacunacin, entre otros (Raa 2000).

En este sentido, los Nucletidos (NT) y su suplementacin en la dieta surgen como

una opcin para mejorar el sistema inmune del pez. NT han sido estudiados en

mamferos, obtenindose mayor actividad de fagocitos (Kulkarni et al., 1986a),

mejoramiento en la produccin de Interleuquina 2 (Carver 1994), aumento de Neutrfilos

(Matsumoto et al. 1995) y positivo efecto en el tracto y flora gastrointestinal (Bueno et al.

1994, Bustamante et al. 1994 y Grimble 1994). Se ha descrito que los NT pueden ser

sintetizados directamente por la mayora de las clulas desde pirunas y pirimidinas o bien,

recogidos por la vas de salvataje o Salvage pathway (VS), sin embargo Sanderson y He

(1994) propusieron que la sntesis de novo (SN) de nucletidos y las VS tendran un costo

metablico alto y por lo tanto para optimizar recursos el aporte exgeno sera lo que se

utiliza principalmente (Uauy, 1994). Adems, las clulas encargadas de la inmunidad y

clulas intestinales no podran sintetizar nucletidos y por lo tanto dependen desde otras

fuentes sintetizadoras (Quan, 1992). Tambin se ha descrito que durante periodos de

intenso desarrollo celular, la disponibilidad de nucletidos podra limitar la maduracin de

los tejidos que tienen una alta tasa de divisin. Esto se suma a que poseeran una

capacitad baja de biosintetizarlos (Van Buren y Rudolph, 1997). As, los Nucletidos

dietarios podran reducir el costo metablico de la SN de nucletidos (Fegan 2006).

Hiptesis

Se presentar la importancia del sistema inmune innato de peces, el metabolismo

de los NT en organismos marinos y su interaccin, para as demostrar que la

suplementacin dietaria de nucletidos y ejerce un efecto positivo sobre la inmunidad

innata en peces.

5

Objetivo General

Identificar los efectos a nivel inmune de la suplementacin dietaria de nucletidos

en peces.

Objetivos Especficos

- Describir sistema inmune innato del pez

- Exponer fuente, bioqumica y metabolismo de nucletidos en el pez

- Relacionar la suplementacin de nucletidos con la respuesta inmune innata de

peces.

-

- Presentar efectos de la suplementacin de nucletidos

- Exponer efectos de los nucletidos sobre inmunidad de peces

Metodologa

La presente revisin bibliogrfica se realiz mediante la recoleccin y anlisis de

diversos artculos de literatura cientfica obtenidos desde Journals disponibles en internet,

destacando: Aquaculture Research Aquaculture Nutrition, Aquaculture, Fish and Fisheries,

y Journal of Fish Diseases. Tambin se contact a profesionales que se desempean en

tanto en el mbito investigacin y/o produccin de peces.

6

Resultados

a) Bioqumica y metabolismo de nucletidos

Los NT estn presentes naturalmente en todos los alimentos animales y vegetales

como nucletidos libres y cidos nucleicos (Gil 2002), por lo tanto son muy abundantes en

el mundo. Son componentes biolgicos de bajo peso molecular, que consisten en una

base nitrogenada (Purina o Pirimidina) unida a una pentosa, que a su vez debe tener

enlazada al menos un grupo fosfato (ver Fig 1). Si el grupo fosfato estuviese ausente se

hablara de un nuclesido. Bases prinas corresponden Adenina, Guanina e Hipoxantina

y las bases pirimdinas son Uracilo, Citosina,y Timina.

Figura 1. Estructura de bases nitrogenadas, nuclesidos y nucletidos. (Fuente: Mateo y Stein, 2004)

Los Nucletidos juegan un rol determinante como cidos nucleicos, ya que forman

parte de la estructura del ADN y ARN. De este modo, suministran informacin para la

sntesis proteica. Otros roles en que destacan los nucletidos son: almacenamiento de

energa como ATP (adenosin-tri-fosfato), componente de coenzimas NAD, NADP y FAD

involucradas en el metabolismo de carbohidratos (Mateo, 2005), mediadores en procesos

celulares a travs de AMPc y GMPc y sirven como intermediarios en reacciones de

sntesis de glicgeno, glicoprotenas y cidos grasos poli-insaturados (Gil et al., 1985).

Funciones determinantes para la reparacin de tejidos y recambio celular (Grimble y

Westwood 2000b).

7

Las purinas pueden ser sintetizadas directamente por las sntesis de novo (SN) a

travs de aminocidos. Pirimidinas son sintetizadas desde NH3 y CO2 y aspartato y

tambin sintetizadas desde glutamina en los linfocitos. Sin embargo, ambas pueden ser

rescatadas desde degradaciones intracelulares o dietarias por las vas de salvataje (VS)

(Grimble y Westwood 2000b). A pesar de esto, el aporte dietario aparece como la fuente

preferencialmente utilizada (Uauy, 1994). Tambin se ha descrito que existen algunos

tejidos incapaces de sintetizar sus propios NT y por lo tanto dependeran del aporte desde

otros tejidos-fuente (Quan, 1992). Adems, las vas SN y VS seran metablicamente

costosas y el aporte dietario podra reducir tal costo, de este modo, fomentando

nucletidos para nucletidos. En el estudio de Grimble y Westwood (2000b) se afirma que

la SN es la principal fuente de nucletidos cuando existe un adecuado aporte de

aminocidos, pero esta va puede ser inactivada o disminuida mediante la suplementacin

dietaria con pirimidinas y purinas. La cantidad para que se genere esta respuesta

depender del tejido en cuestin. Adems describieron que los tejidos que sintetizan

nucletidos tienen mejores mecanismos de trasportes que tejidos que no lo hacen.

Pese a esto, tambin se ha descrito que los requerimientos metablicos de NT pueden

ser suplidos por la dieta o bien por la sntesis de novo (SN). Adems, la posibilidad de

rescatar nucletidos desde fuentes internas del cuerpo minimizara en cierta medida el

requerimiento nutricional de NT, as las bases pricas y pirimidinas no seran requeridas

en la dieta y las vas de salvataje de nucletidos seran la principal fuente de nucletidos

para la sntesis de ADN, ARN y enzimas cofactores (Gil 2002), sin embargo todo esto en

condiciones ideales, cosa que no ocurre en produccin.

Luego de ingerir los alimentos, se produce la hidrolisis extracelular de cidos

nucleicos, esto ocurre a travs la accin de endonucleasas, fosfodiesterasas y

nuecleosido-fosforilasas pancreticas. Las endonucleasas degradan en ADN y ARN hacia

la produccin, en relaciones variables, de mono, di, tri y oligonucletidos. Esta accin se

complementa con la digestin de fosfodiesterasas y/o polinucleotidasas intestinales que

generarn finalmente mononucletidos. Luego, en el borde de cepillo los NT libres son

hidrolizados hasta nuclesidos (NS) por la accin de fosfatasas alcalinas y nucleosidasas.

Posterior a esto, los NS son convertidos a bases purinas y pirmidinas por la accin de

nucleosidasas. Segn Carver (1999), los NS son la forma principalmente absorbida y el

90% ocurre en los enterocitos. El transporte hacia esta clula presentara 2 vas: una por

difusin facilitada y otra por transportadores sodio dependientes. Una vez absorbidos

8

sern degradados y los productos del catabolismo sern excretados va orina e intestino

(Carver 1999 y Grimble y Westwood 2000b). Si los nuclesidos y/o las bases no son

reutilizadas, las pricas sern degradas a cido rico y las pirimdicas a -

aminoisobutirato, NH3 y CO2 (Grimble y Westwood 2000a).

En peces se ha descrito la presencia de nucleosidasas y otras enzimas en el sistema

digestivo (Roald 1978), por lo tanto estos animales podran digerir NT y ahorrar energa

mediante la utilizacin dietaria..

En cuanto a las fuentes de NT, entre las marinas, anchovetas y sardinas tienen altos

niveles de guanina. Levaduras y extractos de stas tambin se han propuesto como

fuentes de NT. Sin embargo, la disponibilidad y digestibilidad son importantes, una

levadura completa presenta menor digestibilidad que su extracto, presumiblemente debido

a la necesidad de digerir la pared celular (Devresse, 2000).

Desde una perspectiva de la nutrogenmica, los nutrientes seran seales dietarias

que son detectadas por un sistema sensor celular que influencia una expresin proteica y

gnica y consecuentemente una produccin de metabolitos especficos. Por lo tanto, los

patrones de expresin gnica, expresin proteica y produccin de metabolitos responden

a nutrientes especficos que son vistos como seales dietarias (Muller y Kersten 2003).

En este sentido, los nucletidos se comportaran de una forma similar y fomentaran una

expresin gnica de la respuesta inmune innata. (ver Fig 3) .

Adems, los NT han sido propuestos como nutrientes condicionalmente esenciales,

ya que proveen un aporte adecuado de bases nitrogenadas para la sntesis de cidos

nucleicos en organismos estresados (Grimble y Westwood 2000b). Tambin se han

descrito como mejoradores o potenciadores del sabor en alimentacin de peces

cultivados (Diehl, 2004). Esto potenciara el consumo y mejorara la ganancia de peso,

que a su vez potenciara la inmunidad innata de los peces. Sin embargo, la respuesta

pareciera ser altamente especie-especfica (Polat y Beklevik, 1999).

b) Sistema inmune innato de peces telesteos

Los peces mantienen contacto directo con el medio ambiente y por eso se exponen

directamente a variados patgenos y microbios. Existen 2 sistemas inmunes: uno Innato y

9

otro Adquirido. El primero es de respuesta rpida frente a la entrada de patgenos y

adems es inespecfico. Asimismo, no se afectara por la temperatura y corresponde al de

mayor importancia en peces (ver Fig 2). En condiciones normales el pez puede

defenderse efectivamente, pero el estrs generado en los sistemas productivos afectara

sus barreras de defensa.

Figura 2. Comparacin de la respuesta inmune en peces y mamferos (Fuente: Adaptado de Seminario

inmune y desarrollo de antivirales en la salmonicultura nacional, Biodinmica S.A. 2009.)

Los rganos relacionados con la inmunidad innata en peces corresponden a rin,

timo, intestino, bazo e hgado. En el rin est relacionado con la hematopoyesis y

tambin da lugar a la diferenciacin de clulas sanguneas. En el rin anterior cumple la

funcin inmune, mientras que la posterior principalmente filtra sangre y trabaja en

mecanismos urinarios (Galindo-Villegas y Hosokawa, 2004). Los linfocitos maduros estn

presentes primero en el timo y luego, secuencialmente aparecen en el rin y bazo

(Zapata et al. 1990) por lo cual se considera que el timo es el primer rgano linfoide donde

se desarrollan los linfocitos. A su vez, el SII est dividido en mecanismos celulares y

humorales.

El epitelio y su secrecin forman la barrera de defensa primaria entre el pez y su

ambiente. El recambio celular constante del tejido epitelial, precipitinas presentes en el

mucus, las aglutininas, protena C-reactiva (CRP), transferrina, lisozimas, la quitinasa,

citoquinas, Interleuquinas (IL), Interfern (IFN), el factor de activacin de los macrfagos

(MAF) constituyen algunas de las defensas humorales (Fletcher 1981, Secombes et al.

1996 y Olabuenaga 2000).

Respuesta inmune (%)

10

La CRP en peces tiende a presentar una concentracin uniforme y constante a lo

largo de toda la vida. Se ha demostrado que aglutina bacterias y tambin presenta

especificidad por pequeas molculas orgnicas como la fosforilcolina (Volanakis et al.

1990) e interacta con el complemento. Se producira en respuesta al estrs y a

exposicin antignica (Olabuenaga 2000).

La lisozima es una enzima mucoltica con propiedades antimicrobianas. Ha sido

detectada en el suero, el mucus y en otros tejidos ricos en leucocitos, como el rin, el

bazo y el intestino, tanto en peces de agua de mar como de agua dulce (Grinde et al.

1988; Lie et al. 1989). Degrada mucopolisacridos de la pared celular de bacterias,

particularmente las Gram positivas, causando la lisis (Ellis 1990). Se encuentra tambin

en neutrfilos, monocitos y en menor cantidad en macrfagos.

Los IFNs, son citoquinas, constituyen una serie de molculas importantes como

agentes antivirales (Graham y Secombes 1990b), son glicoprotenas producidas por

macrfagos, linfocitos, fibroblastos y clulas natural killer (NK) en respuesta a una

infeccin viral o una estimulacin inmune. Se han descrito 2 tipos, el tipo I destaca

porque inhibe la replicacin del cido nucleico dentro de la clula infectada y degrada los

componentes virales y el tipo II presenta actividad estimuladora de macrfagos y

aumento del estallido respiratorio en macrfagos (Peridico acuicultura 2006) . Adems,

los estudios sugieren que el IFN es especie especfico pero no virus especfico (Johnson

et al. 1994). Los IFN tambin modularan la respuesta inmune mediante la induccin de

protena Mx (Peridico acuicultura 2006).

El sistema del complemento (C) participa en la inmunidad humoral y celular contra

diferentes patgenos y en el proceso inflamatorio (Ingram 1990; Yano 1992). Est

constituido por al menos veinte protenas plasmticas que funcionan como enzimas o

como protenas que se van uniendo cuando son activadas por la introduccin y/o

presencia de ciertas sustancias en el plasma de sangre normal. Muchas de estas

protenas son sintetizadas en el hgado y en el epitelio intestinal, mientras que otras se

originan en los macrfagos (Tyzard 1992). Actan ocasionando la lisis de una clula

blanco, participando en la muerte y eliminacin de antgenos celulares, usualmente

bacterias.

En cuanto a los mecanismos celulares, destacan: clulas fagocticas; macrfagos y

neutrfilos y clulas citotxicas o NK (natural killer).

11

Las clulas NK en peces presentan un rol similar al de los vertebrados superiores, es

decir ejercen una citotoxicidad inespecfica de diferentes clulas blanco sin un previo

reconocimiento. En los peces telesteos se han encontrado clulas NK en la cabeza de

rin, bazo, sangre perifrica y el timo. Se ha descrito su presencia en distintas especies

(Greenlee et al. 1991). La citotoxicidad la efectan mediante contacto clula a clula,

representan menos del 1% de los leucocitos de sangre perifrica. En los peces seos o

telesteos, las clulas linfoides agranulares o fagocitos mononucleares seran sus

efectoras (Moody et al. 1985).

Los macrfagos se han descrito como el mecanismo ms importante debido a su

accin de reconocimiento de patgenos, actividad fagocitaria y produccin de citoquinas

(Shoemaker et al. 1997; Galindo-Villegas y Hosokawa, 2004). La fagocitosis corresponde

a un mecanismo celular de ingestin y digestin de material extrao y probablemente es

la reaccin de defensa ms distribuida tanto en vertebrados como en invertebrados. (Mac

Arthur y Fletcher 1985).

Los neutrfilos tambin son fagocticos y producen sustancias reactivas de oxgeno,

ROS (Galindo-Villegas y Hosokawa, 2004) que generaran severos daos tisulares en las

clulas blanco (Tyzard 1992).

Sin embargo, existen diversos factores que han sido estudiados y tendran un efecto

negativo sobre la capacidad inmune innata del pez, entre estos encontramos: variabilidad

individual, edad, estado fisiolgico, estrs, niveles hormonales, nutricin y factores

extrnsecos, entre otros (Revista AquaTIC, Ao 2003 n 19, pp. 1-7.)

Actualmente, uno de los factores con mayor importancia corresponde al manejo del

estrs. Correspondera a un estado del organismo y los factores que lo desencadenaran

pueden ser procesos biolgicos propios de la especie, o factores externos. Entre los

procesos biolgicos, la esmoltificacin, la migracin durante la poca reproductiva, o la

reproduccin misma, en el caso de los salmnidos son causas de estrs. As mismo,

puede desencadenarse por el transporte, manejo, temperatura excesivamente alta o

cambios bruscos de la misma, alta densidad de poblacin, inadecuados niveles de

oxgeno, niveles sub-letales de materiales txicos, mala calidad del agua, entre otros.

(Zapata et al., 1992; Maule et al., 1996).

12

Dichos procesos modulan una respuesta hormonal, dominada principalmente por los

corticosteroides, siendo crucial el cortisol. Actuaran mediante una capacidad citoltica y

de alteracin de los patrones de distribucin de los leucocitos. Adems, generaran

marcada linfopenia, monocitopenia y neutrofilia, as como deplecin celular en rganos

linfoides y retraso en la respuesta inmune primaria (Ellis, 1981a; Bly y Clem, 1992, Zapata

et al., 1992). Por otra parte, inhiben la actividad microbicida intracelular de los fagocitos,

disminuyen la respuesta humoral e inhiben la proliferacin linfoide estimulada por

mitgenos. No obstante, al igual que en mamferos, la accin de los corticoides

depender de la concentracin, estado fisiolgico del animal y tiempo de exposicin

(Zapata et al., 1992; Maule et al., 1996). Por lo tanto, si estos procesos son agudos o

prolongados en el tiempo conllevar la supresin de la respuesta inmune o un desarrollo

desmesurado de la misma, lo que puede desequilibrar al resto de sistemas fisiolgicos y

desencadenar el desarrollo de enfermedad (Ellis, 1981a).

En el sistema inmune innato de los peces se han descrito 24 receptores (Toll Like),

para los inmunoestimulantes, comparados con slo 12 en los mamferos, lo que dara

cuenta de un SII bien desarrollado en peces (Peridico acuicultura 2006).

c) Interaccin entre nucletidos y sistema inmune innato de telesteos

Si bien a la fecha no existen estudios sobre cmo los nucletidos influencian la

respuesta inmune innata en peces, en mamferos se han descrito posibles hiptesis que

podran extrapolarse a organismos marinos. Sin embargo los mecanismos moleculares

por los cuales la suplementacin de NT modula el sistema inmune innato son

prcticamente desconocidos (Gil 2002).

Se ha sugerido que el intestino delgado, llamado porcin anterior en peces, debera

jugar un rol clave en la regulacin de los efectos sobre la respuesta inmune. El intestino y

su tejido linfoide asociado pueden iniciar y regular el desarrollo de clulas defensoras

como lo hace el timo (Walker, 1996). La suplementacin con NT ha mostrado aumento en

la produccin y expresin gentica de interleuquinas en el intestino delgado fetal, las que

son conocidas por sus agentes antipatognicos. Tambin se ha visto que los NT pueden

influenciar la biosntesis proteica mediante regulacin del pool de NT intracelular, por lo

tanto podran estar involucrados en la regulacin de protenas de defensa del

13

Complemento. Adems, existiran seales de transduccin mediadas por la interaccin de

NS exgenos y sus receptores, contribuyendo as a modular la expresin de variados

genes, entre ellos los relacionados con la produccin citoquinas intestinales y leucocitos.

Ver Fig 3 (Leleiko et al 1983; Gil 2002.). Leleiko et al 1983, tambin reportaron que la

expresin gentica y consiguiente produccin de enzimas intestinales se afectara la

suplementar NT. A su vez, se ha propuesto que la suplementacin de NT tiene un rol en

la inmunohematopoyesis (Grimble y Westwood 2000b).

Fig.3. Posible efecto de la suplementacin de nucletidos como modulador de la expresin gnica.

(Fuente: Gil 2002)

Segn Carver y Walker 1995, la suplementacin de nucletidos podra beneficiar

rpidamente a distintos tejidos, como aquellos encargados del sistema inmune,

especialmente cuando estn bajo desafo. Adems, segn Stein y Mateo 2005, la

suplementacin de NT dietarios mejorara tanto la inmunidad innata humoral y celular. Sin

embargo es importante destacar que las respuestas a la dosis dietaria de nucletidos en

peces son poco estudiadas y como se dijo, pobremente entendidas (Li y Gatlin 2006).

Una suplementacin con Nucletidos podra ser especialmente importante durante

periodos de rpido crecimiento o replicacin celular, tales como temprano desarrollo

larvario, reproduccin o en pocas de estrs o enfermedad cuando la produccin de

leucocitos se requiera incrementar rpidamente. En este sentido, se ha expuesto que los

requerimientos de NT exgenos en mamferos pueden incrementar durante periodos de

rpido crecimiento o estrs fisiolgico (Carver y Walker, 1995). La activacin de linfocitos

14

por ejemplo, generara un rpido incremento en la sntesis de NT, los cuales se requerirn

para el incremento en energa metablica y ms tarde como precursores para la sntesis

de cidos nucleicos (Carver y Walker, 1995).

La rpida proliferacin de tejidos tales como los del sistema inmune o del intestino no

seran capaces de satisfacer su requerimiento de NT por la va de sntesis de novo y, por

lo tanto utilizaran preferentemente las vas de salvataje, recuperando as nuclesidos y

nucleobases desde la sangre y dieta. Por lo tanto, Uauy et al 1996 y Gil 2001 proponen

que una suplementacin exgena a travs de la dieta debiese ser esencial para mantener

un crecimiento y funcionalidad de los tejidos.

Sin embargo, el efecto modulador de los NT sobre el intestino y tejidos con actividad

inmune han sido tradicionalmente considerados como temas separados. Hoy se conoce

que ambos estn relacionados, no solo porque un parte significante de las clulas del

intestino tienen un origen inmune, sino tambin porque el epitelio intestinal puede producir

molculas inmunomoduladoras, como las citoquinas que son relevantes en regular la

respuesta inmune (Walker, 1996).

Beneficios asociados indirectamente con la inmunidad del pez se reflejan en estudios

como el de Burrells et al., 2001b, ya que segn ellos los NT mejoraran la capacidad de

osmoregulacin y esto repercutira en generar peces smolts mejor adaptados para la

transferencia al mar. Tambin afirma que la suplementacin de NT ayudara recuperar la

tasa de crecimiento en peces sometidos a situaciones estresantes. A su vez, en el estudio

de Li et al 2007 evidenciaron que la suplementacin de nucletidos dietarios mejorara

adems el crecimiento y la utilizacin del alimento, por lo tanto menor susceptibilidad al

estrs y en definitiva menores mortalidades (Li and Gatlin 2006).

En cuando a estudios y ensayos experimentales y productivos , la suplementacin

con nucletidos ha resultado en mejoramiento de la morfologa y funcionalidad intestinal

en diversos mamferos, tambin mejoran el consumo de alimento, incrementndolo en un

46% (Kubitza et al., 1997), generaran rpida reparacin del intestino (Bueno et al., 1994),

mejoraran la microflora intestinal (Gil et al., 1986; Uauy, 1994), aceleraran el crecimiento

y diferenciacin del intestino e incrementaran la actividad enzimtica del borde de cepillo

(Uauy et al., 1990) y tambin aumentaran el metabolismo lipdico (De Lucchi et al., 1987).

Todos estos son algunos de los procesos optimizados y mejorados por la suplementacin

de NT en mamferos, que se piensa tendran el mismo o similar efecto en peces.

15

A la fecha, existen algunos reportes de la efectividad de los NT dietarios en peces.

Generalmente, muchos de los beneficios de la suplementacin con NT en peces se daran

por adicin de: 5'AMP, 5'CMP, 5'GMP, 5'IMP y 5'UMP al 0.02-0.03 % en la racin,

equivalentes a 300g por tonelada de alimento (Mateo, 2005).

Sakai et al. 2001 reportaron que positivamente existiran dosis que estimulan la

actividad fagoctica de Macrfagos en carpa comn (Cyprinus carpio), ya que el grupo

suplementado con NT present mayor actividad que el control, por lo tanto los peces con

mayor actividad fagoctica estaran mejor protegidos frente a un evento infeccioso. La

actividad de las lisozimas y del sistema Complemento tambin fueron significativamente

mayores en los grupos suplementados con NT. Sin embargo, tambin sugieren que dosis

de nucletidos excesivas podran tener un efecto inhibitorio de la respuesta inmune,

debido a que en su experimento las dietas con altas concentraciones de NT presentaban

una disminucin de la accin inmune. Segn ellos no existe informacin acerca de la

estimulacin de lisozimas y complemento en mamferos, pero si se ha reportado

disminucin de la actividad fagocitaria de Macrfagos en ratones al alimentarlos con una

dieta Sin NT. Kubitza et al., 1997 describieron que se mejoraba significativamente el

consumo de alimento en turbot (Micropterus salmoides) cuando las dietas eran

suplementadas con NT e incrementos en las tasas de crecimiento de truchas

(Oncorhynchus mykiss) (Adamek et al., 1996), esto podra deberse al efecto palatable que

generan los nucletidos al ser olfateados. Ramadan et al., 1994 evidenciaron el grupo de

tilapias (Oreochromis spp) que recibi una dieta suplementada con nucletidos, tuvo un

aumento de la respuesta inmune en cuando fueron desafiadas contra Aeromonas

hydrophila.

Low et al 2003 encontraron que una dieta suplementada con cistena-5-

monofosfto (CMP), disodio uridina5monofostato (UMP), adenosina 5-monofosfato

(AMP), disodio inosina 5-monofostato (IMP), disodio guanidina-5monofostto (GMP) y

ARN entregados en una inclusin combinada al 0.03%, significativamente incrementaba la

expresin de genes en branquias y bazo relacionados con la inmunidad, y tambin

incrementara la expresin de interleuquina 1h en el rin de Scopthalmus maximus, sin

embargo la expresin de lisozimas fue significativamente menor en rin y bazo.

Segn Burrel et al 2001a para Oncorhynchus mykiss, Oncorhynchus kisutch y

Salmo Salar, el grupo suplementado con nucletidos disminuye significativamente la

mortalidad al desafiar los peces contra Vibrio anguillarum (Vibriosis) versus el grupo

16

control y el grupo suplementado con glucanos. En este mismo estudio se afirma que un

grupo de peces suplementado con NT versus uno control sin NT, tuvo mejor

sobrevivencia al ser desafiados contra Anemia Infecciosa Salmn (ISAv) (ver Fig 4). El

delta de menor mortalidad implica millones de dlares en beneficio. Tambin evalu la

sobrevivencia contra Piscirickettsia salmonis (SRS), obteniendo significativamente menor

mortalidad en el grupo suplementado con nucletidos. Y al evaluar la infestacin de

Lepeophtheirus salmonis (Caligidosis), significativamente hubo menor cantidad de

parsitos en peces suplementados con NT versus el control. Asumen la menor mortalidad

a un aumento en la velocidad de respuesta de los mecanismos innatos, sin embargo no

pudieron demostrar un aumento en la actividad fagoctica ni mayor produccin de

especies reactivas del oxgeno (ERO) de stos. La menor infestacin de parsitos la

asumen a la posible reduccin de cortisol y prostaglandinas a nivel plasmtico. No

obstante, tambin se ha reportado que Morone chrysops suplementados con

oligonucletidos presentaron mayores niveles de neutrfilos y mayor produccin de ERO

que el control (Li et al. 2004a).

En el estudio de Burrells et al. 2001a, los NT dietarios parecieran ser ms efectivos

que otras sustancias IE, como los -glucanos. Debido a que estos ltimos principalmente

mejoraran slo el sistema inmune no especfico (o innato) y los NT podran ejercer sus

beneficios a travs del mejoramiento del sistema inmune especfico hacia mayores y ms

rpidas respuestas, adems de mejorar ampliamente el sistema inmune innato. Esto es

apoyado por Gil 2002 y Grimble y Westwood 2000, debido a que la suplementacin de NT

tambin increment la produccin y funcionalidad de linfocitos B y T.

17

En otros ensayos productivos realizados por Wadsworth et al 2006 y 2007 de

Ewos Innovation Chile, se disearon dietas nucletidos y otros compuestos. Luego,

desafiaron los peces contra SRS y obtuvieron menores tasas de mortalidad en los grupos

que recibieron este preparado versus el control. En otros ensayos, los peces que

recibieron la dieta con NT mostraron menor grado de caligidosis versus el control sin NT.

AquaChile S.A. realiz un ensayo productivo en el 2006 donde prob dietas con

distintas concentraciones de nucletidos y de distintos proveedores versus un control. Lo

que rescato de este ensayo es que los nucletidos efectivamente aumentan la

sobrevivencia de los peces contra desafo SRS (P.salmonis). (ver Fig.5). Por lo tanto,

menores mortalidades se traducen en ms peces cosechados y ms dlares vendidos.

Se debe nombrar el estudio de Leonardi et al. 2003, en el cual evidenciaron que la

suplementacin de NT redujo los niveles de cortisol plasmtico en truchas (Oncorhynchus

mykiss) sanas y en truchas infectadas con necrosis pancretica viral (IPNv).

Es importante destacar que se ha descrito que mediante el metabolismo o

interaccin de algunos frmacos, se generaran antimetabolitos que bloquearan a su vez

el metabolismo de los NT, especialmente de purinas y pirimidinas. Esto ocurrira por

competencia de enzimas especficas o por una accin abortiva en la produccin de cidos

nucleicos (Grimble y Westwood 2000).

Fig. 5. Evaluacin de la mortalidad Acumulada (%) al desafiar peces contra SRS y que

recibieron 4 distintas dietas con 4 niveles de nucletidos. Ensayo AquaChile 2006.

18

Discusin

Si bien las fuentes de nucletidos pueden ser muchas y muy variadas, su

disponibilidad para ser aprovechadas, esto es su digestibilidad de ser ptima. En este

sentido, es vital incluir en la formulacin de dietas nucletidos libres o extractos y no

aadir por ejemplo una levadura completa debido a que contiene una pared celular de

baja digestibilidad y por lo tanto los NT presentes en ella no sern eficientemente

aprovechados.

Si se propone que las mejores fuentes de NT provienen desde origen marino, no

se estara solucionando la dependencia existente por harina de pescado y sera un

retroceso. Al mismo tiempo, las fuentes de origen vegetal podran incurrir en problemas

similares a los actuales debido al reemplazo de la protena animal.

Adems del origen, es importante hacer notar que la mayora de los estudios han

sido realizados en mamferos, los cuales no presentan una fisiologa similar a la de un

pez. El metabolismo de los NT puede cambiar, la caracterizacin de la respuesta inmune

tambin podra presentar variacin. Sin embargo, la existencia de algunas enzimas

relacionadas con la digestin de estos se ha descrito. La presencia de enzimas

endonucleasas en peces existe, por lo tanto se pueden extrapolar conclusiones, pero que

no seran tan confiables. Adems, en muchos casos la presencia de alguna enzima es

especie-especfica. De este modo, aun no se tiene claro que mecanismos especficos

enzimticos estn envueltos en la digestin de NT. Sin embargo el hecho de que se haya

descrito la presencia de endonucleasas en el intestino de peces, podran repercutir en que

el pez utiliza los nucletidos libres suplementados y vas de salvataje para evitar la SN y

as ahorrar energa. Mediante la suplementacin podra mejorarse las tasas de

crecimiento al disponer de ms energa para otros procesos metablicos.

Al suplementarse nucletidos debera entregarse un set de estos y no solo uno o

algunos, ya que si se agregan slo algunos se podra caer en el efecto limitante del que

se encuentre ausente.

La suplementacin de NT y su efecto en el sistema inmune innato ha sido probada

mediante el desafo de los peces con variadas enfermedades tanto virales, bacterianas y

parasitarias. No obstante, estas pueden corresponder a diferentes cepas, variando mucho

en cuanto a su patogenicidad y virulencia. Por lo tanto, al realizar aseveraciones se debe

19

tener precaucin debido a que dentro de un mismo agente infeccioso pueden existir cepas

con ms o menos virulencia, afectando de este modo el resultado del ensayo.

Las dosis de NT suministradas a los peces pareciesen carecer de un estudio

cientfico riguroso y lucen casi arbitrarias, la concentracin ptima a suplementar no ha

sido bien detectada y se vio que altas dosis tienen efecto inhibitorio de otras sustancias.

Podran estar siendo extrapoladas desde investigaciones en mamferos. Para poder

determinar una dosis especfica a suplementar se debera acompaar con datos de

variabilidad existente por especie, variabilidad propia de cada individuo, distintos hbitos

alimenticios, diferentes hbitat, etc.

Adems, la cantidad de especies estudiadas es pequea, sin embargo, se estn

estudiando las especies econmicamente ms relevantes. Los tamaos muestreados

generalmente no son grandes, incluso las tcnicas de muestreo y herramientas

estadsticas utilizadas no son justificadas y carecen de rigurosidad.

Un punto importante es que los NT como inmunoestimulantes, son inocuos,

seguros, naturales y otorgaran un buen nivel de proteccin frente a diversos patgenos,

adems se podran complementar en el uso de vacunas.

Si bien esta revisin de ha centrado en el SII de peces, tambin se ha descrito que

la capacidad de los nucletidos repercute hacia mayores y ms rpidas respuestas del

sistema inmune especfico o adquirido. En este sentido, NT comparados con -glucanos,

ejercen una respuesta ms amplia, a diferencia de los otros que slo mejoraran la

fagocitosis. Sin embargo, en un estudio que suplemento peces con NT y que mostraron

mayores tasas de sobrevivencia no se debi a un mejoramiento en la actividad de ERO

de macrfagos como se esperaba.

Un punto no menor es que el intestino e hgado poseen poderosos mecanismos

homeostticos los cuales degradan las purinas y pirimidinas ingeridas por la dieta y

podran reemplazarlas va SN. Sin embargo es posible que tejidos perifricos reciban solo

pequeas cantidades de NT de origen dietario. Se ha sealado tambin, que si un tejido

transporta mal los nucletidos implicara en que no sintetiza nucletidos o lo hace en una

baja tasa. Esto podra ser cierto para algunas especies de peces o quizs no. Adems, la

rpida proliferacin de tejidos tales como los del sistema inmune o el intestino no seran

capaces de satisfacer su requerimiento de NT por la sntesis de novo y por lo tanto

20

deberan utilizaran preferentemente las vas de salvataje, sin embargo estas 2 vas son

metablicamente costosas y se preferir el aporte dietario de nucletidos. Por lo dems,

existiran otros beneficios en la produccin de peces, debido a que los NT tambin

aumentan el sabor del alimento, por lo tanto incrementaran el consumo y ganancia de

peso, y mejorara la eficiencia de conversin al tener un epitelio intestinal en ptimas

condiciones.

Sin embargo, cuando se propone a los NT como una forma de fortalecer las

defensas de los peces se est pensando en condiciones ideales, pero muchas veces los

animales ya se encuentran bajo un proceso de estrs. Por lo tanto, el consumo de

alimento sera menor y/o su aprovechamiento puede verse seriamente disminuido, por

consiguiente los NT podran no ser aprovechados o el consumo de ellos podra no ser es

suficiente para estimular una respuesta inmune. Esto hace ver que el manejo del estrs

es un punto no menor, pero que en el proceso productivo no se trata.

Si bien la informacin cientfica disponible hasta ahora va en una direccin, la

explicacin de porqu y cmo los nucletidos ejercen estas respuestas en los peces, aun

no es muy clara. Sin embargo, la estimulacin de la expresin gnica y vas metablicas

relacionadas con la inmunidad parecieran ser la clave del mecanismo de accin de los

nucletidos.

Conclusines

Los peces estn posibilitados para digerir y metabolizar nucletidos exgenos

debido a la presencia de enzimas que actan sobre stos. La suplementacin de

nucletidos efectivamente tiene un efecto potenciador del sistema inmune innato de

peces. Existe mayor actividad de macrfagos, neutrfilos y clulas NK. La suplementacin

de NT repercuti en mayor produccin de citoquinas: Interleuquinas e IFN, tambin

aument las EROs, Los NT dietarios son capaces de disminuir el cortisol plasmtico.

Suplementacin de NT aumenta el consumo, mejora el epitelio intestinal e incrementa el

pool celular de NT. Nucletidos tienen un efecto sinrgico con las vitaminas. Los

nucletidos disminuyen significativamente la mortalidad contra SRS e ISAv. Por lo tanto,

se propone que la suplementacin de NT puede modular una respuesta inmune contra

Bacterias, Parsitos y Virus. Sin embargo, se plantea el estudio de la suplementacin de

NT sobre cortisol, debido a que los mecanismos por los cuales se relacionan en los peces

son desconocidos.

21

Bibliografa

Adamek, Z., Hamackova, J., Kouril, J., Vachta, y R., Stibranyiova, I.,1996. Effect of Ascogen probiotics supplementation on farming success in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and wels (Silurus glais) under conditions of intensive culture. Krmiva (Zagreb) 38, 11 20.

Anderson,D.P., 1992. Immunostimulants, adjuvants, and vaccine carriers in fish: applications to aquaculture. Annual Rev. of Fish Diseases 289-310.

Anderson, D.P., 1996. Environmental factors in fish health: immunological aspects. In: Iwama, G., Nakanishi,. T. Eds. , The Fish Immune System. Organism, Pathogen and Environment, Academic Press, San Diego, pp. 289337.

Biodinmica S.A 2005. Informe de ensayos de campo Trucha Arcoris. Disponible en Revisado 27 Mayo 2009.

Biodinmica S.A. 2009. Seminario organizado por el Nodo Biotecnologa Acucola y Biodinmica S.A Respuesta inmune y desarrollo de antivirales en la salmonicultura nacional. Pto Montt-Chile..

Bly, J.E. y L.W. Clem 1992. Temperature and teleost immune functions. Fish Shellfish Immunol., 2:159-171

Bueno, J., Torres, M., Almendros, A., Carmona, R., Nunez, M.C., Rios, A., y Gil, A., 1994. Effects of dietary nucleotides on small intestinal repair after diarrhoea. Histological and ultrastructural changes. Gut 35, 926933.

Burrells, C., Williams, P.D., y Forno, P., 2001a. Dietary nucleotides: a novel supplement in fish feeds: 1. Effects on resistance to disease in salmonids. Aquaculture, in press.

Burrells, C., P.D. Williams, P.J. Southgate y S.L. Wadsworth. 2001b. Dietary nucleotides: a novel supplement in fish feeds: 2. Effects on vaccination, salt water transfer, growth rates and physiology of atlantic salmon (Salmo salar L.). Aquaculture 199:171-184.

Bustamante, S.A., Sanches, N., Crosier, J., Miranda, D., Colombo, G., y Miller, M.J.S., 1994. Dietary nucleotides: effects on the gastrointestinal system in swine. J. Nutr. 124 Suppl. 1S , 149S156S.

Carver, J.D., 1994. Dietary nucleotides: cellular immune, intestinal and hepatic system effects. J. Nutr. 124 Suppl. 1S , 144S148S.

Carver JD. 1999. Dietary nucleotides: effects on the immune and gastrointestinal systems. Acta Paediatr 88:8388.

Carver, J.D. y W.A. Walker. 1995. The role of nucleotides in human nutrition. Nutr.Biochem. 6:58-72.

De Lucchi, C., Pita, M., Faus, M.J., Molina, J.A., Uauy, R.,y Gil, A., 1987. Effects of dietary nucleotides on the fatty acid composition of erythrocyte membrane lipids in term infants. J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 6, 568574.

Devresse, B., 2000. Nucleotides: a key nutrient for shrimp immune system. Feed Mix 8, 2022.

Diehl, J. 2004. All in good taste: creating natural savoury flavorings from yeast. En: Nutritional Biotechnology in the Feed and Food Industries. Proceedings of Alltechs 20

th Annual Symposium (T.P.

Lyons and K.A. Jacques, eds). Nottingham University Press, UK, pp. 258-263

Ellis, A.E. 1981a. Stress and the modulation of defence mechanisms in fish. En: Pickering, A.D. (Ed.). Stress & Fish, Acad Press, London. 147-169.

Ellis, A.E. 1990. Lysozyme assays. En: Stolen, J.S., T.C. Fletcher, D.P. Anderson, B.S. Roberson & W.B. van Muiswinkel (Eds.). Techniques in Fish Immunol. SOS Public N. J. USA. 101-103.

Fegan, D. F. 2006. Functional foods for aquaculture: benefits of NuPro and dietary nucleotides in aquaculture feeds. Nutritional biotechnology in the feed and food industries: Proceedings of Alltech's 22nd

22

Annual Symposium, Lexington, Kentucky, USA, 23-26 April 2006. Disponible en Revisado 27 Mayo 2009.

Fletcher, T.C. 1981. Non-antibody molecules and the defence mechanisms of fish. En: Pickering, A.D. (Ed.). Stress and Fish, Acad Press. 171-183.

Galindo-Villegas, J y H. Hosokawa 2004. Immunostimulants: Towards Temporary Prevention of Diseases in Marine Fish. Kochi University, Faculty of Agriculture, Lab. of Fish Nutrition Japan. Expuesto en el VII International Symposium on Aquaculture Nutrition Noviembre 2004, Centro de las Artes, Universidad de Sonora Hermosillo, Sonora, Mexico. Disponible en Revisado 27 Mayo 2009.

Gil, A., 2002. Modulation of the immune response mediated by dietary nucleotides. Eur. J. Clin. Nutr. 56 (Suppl. 3), S1S4.

Gil, A., Pita, M., Martinez, J., Molina, J.A., y Sanchez-Medina, R., 1985. Effect of dietary nucleotides on the plasma fatty acids in at-term neonates. Hum. Nutr. Clin. Nutr. 40, 185195.

Gil, A., Corral, E., Martinez, A., y Molina, J.A., 1986. Effects of the addition of nucleotides to an adapted milk. formula on the microbial pattern of faeces sic in at term newborn infants. J. Clin. Nutr. Gastroenterol. 1,127132.

Graham, S. y C.J. Secombes. 1990b. Cellular requirements for limphokine secretion by rainbow trout, Salmo gairdnerii, leukocytes. Dev. Comp. Immunol. 5:75-83.

Greenlee, A.R., R.A. Brown y S.S. Ristow. 1991. Nonspecific cytotoxic cells of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) kill YAC-1 targets by both necrotic and apoptotic mechanisms. Dev. Comp. Immunol. 15:153-164.

Grimble, G.K., 1996. Why are dietary nucleotides essential nutrients? Br. J. Nutr. 76, 475 478.

Grimble, G.K., y Westwood, O.M.R., 2000a. Nucleotides. En: German, J.B., Keen, C.L. (Eds.), Nutrition and Immunology:Principles and Practice. Humana Press Inc., Totowa, NJ, USA, pp. 135 144.

Grimble, G.K., y Westwood, O.M.R., 2000b. Nucleotides as immunomodulators in clinical nutrition. Curr. Opin. Clin. Nutr.4, 57 64

Grinde, B., O. Lie, T. Poppe y R. Salte. 1988. Species and individual variation inn lysozyme activity in fish of interest in aquaculture. Aquaculture. 18:299-304.

Ingram, G.A. 1990. Complement fixation test. In: Stolen, J.S., T.C. Fletcher, D.P. Anderson, B.S. Roberson y W.B. van Muiswinkel (Eds.). Techniques in Fish Immunol. SOS Publications N.J. USA. 1:25-44.

Kubitza, F., Lovshin, L.L., y Lovell, R.T., 1997. Identification of feed enhancers for largemouth bass Micropterus salmoides. Aquaculture 148, 191 200.

Kulkarni, A.D., Fanslow, W.C., Drath, D.B., Rudolph, F.B., y Van Buren, C.T., 1986a. Influence of dietary nucleotide restriction on bacterial sepsis and phagocytic cell function in mice. Arch. Surg. 121, 169172.

Leleiko, N. S., Bronstein, A. D., Baliga, B. S. y Munro, H. N. (1983). De novo purine nucleotide synthesis in the rat small and large intestine: effect of dietary protein and purines. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nufrition 2, 313-319.

Leonardi, M., Sandino, A.M., y Klempau, A., 2003. Effect of a nucleotide-enriched diet on the immune system, plasma cortisol levels and resistance to infectious pancreatic necrosis (IPN) in juvenile rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Bull. Eur. Assoc. Fish Pathol. 23, 5259.Lie, O., O. Evensen, A. Sorensen & E. Frogsadal. 1989. Study on lysozyme activity in some fish species. Diseases of Aquatic Organisms. 6:1-5.

Li, P., Lewis, D.H.,y Gatlin III, D.M., 2004a. Dietary oligonucleotide from yeast RNA influences immune responses and resistance of hybrid striped bass (Morone chrysops M. saxatilis) to Streptococcus iniae infection. Fish Shellfish Immunol. 16, 561 569.

23

Li P. y Gatlin D. M. III. (2006) Nucleotide nutrition in fish: current knowledge and future applications. Aquaculture 251: 141-152

Li P., Neill W. H. y Gatlin D. M. 2007 Dietary supplementation of a mixture of purified nucleotides transiently enhance growth and feed utilization of juvenile red drum (Sciaenops ocellatus). Journal of the World Aquaculture Society 38:281-286.

Li P., Wang X. y Gatlin D. M. III. (2006) Evaluation of levamisole as a feed additive for growth and health management of hybrid striped bass (Morone chrysops M. saxatilis). Aquaculture 251: 201-209.

Low, C., Wadsworth, S., Burrells, C.,y Secombes, C.J., 2003.Expression of immune genes in turbot (Scophthalmus maximus) fed a nucleotide-supplemented diet. Aquaculture 221, 23 40.

Mac Arthur, J.I. y T.C. Fletcher. 1985. Phagocytosis in fish In: Manning, M.J. (Ed.). Fish Immunology. Acad Press NY/London. 29-46.

Mateo, C.D. 2005. Aspects of nucleotide nutrition in pigs. Ph.D dissertation, Depart of Animal and Range Sciences, South Dakota State University, USA, pp. 171. Disponible en Revisado 27 mayo 2009

Mateo, C.D. y H.H. Stein. 2004. Nucleotides and young animal health: can we enhance intestinal tract development and immune function? En: Nutritional Biotechnology in the Feed and Food Industries: Proceedings of Alltechs 20

th Annual Symposium (T.P.Lyons and K.A. Jacques, eds). Nottingham University Press, UK, pp. 159-168.

Matsumoto, Y., Adje, A.A., Yamauchi, K., Kise, M., Nakasone, Y., Shinegawa, Y., Yokoyama, H.y ,Yamamoto, S., 1995. Mixture of nucleosides and nucleotides increases bone marrow cell and peripheral neutrophil number in mice infected with methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Biochemical and molecular roles of nutrients. J. Nutr. 125, 815822.

Maule, A.G., R.Schrock, C. Slater, M.S. Fitzpatrick y C.B. Schreck 1996. Immune and endocrine responses of adult chinook salmon during freshwater immigration and sexual maduration. Fish Shellfish Immunol., 6:221-233

Moody, C.E., D.V. Serreze y P.W. Reno. 1985. Nonspecific cytotoxic activity of teleost leukocytes. Dev. Comp. Immunol. 9:51-64.

Mller, M. y S. Kersten 2003. Wageningen University, Bomenweg 2, 6703 HD Wageningen, Netherlands. Disponible en< http://www.genosolutions.com/items/Muller_Nutrigenomics.pdf. Revisado 27 Mayo 2009>

Olabuenaga, S. E. Fish Immune system Gayana (Concepc.) Concepcin, v. 64, n. 2, 2000 . Disponible en: http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-65382000000200010&lng=es&nrm=iso Revisado 28 Mayo 2009.

Peridico de Acuicultura 2006. Nmero 25 vol. 3. Disponible en< http://www.biodinamica.cl/per_acuicultura.pdf>

Polat, A. y G. Beklevik. 1999. The importance of betaine and some attractive substances as fish feed additives. En: Feed Manufacturing in the Mediterranean Region: Recent Advances in Research and Technology (J. Brufau and A. Tacon, eds). CIHEAMIAMZ, pp. 217-220.

Quan, R., 1992. Dietary nucleotides: potential for immune enhancement. En: Paubert-Braquet, M., Dupont,. Ch., Poaoletti, R. Eds. , Foods, Nutrition and Immunity Dyn. Nutr. Res., vol. 1, Karger, Basel, pp. 1321.

Raa, J., 2000. The use of immune-stimulants in fish and shellfish feeds. University of Troms Norway. Biotec ASA, Arbinsgt. 4, N-0253 Oslo, Norway. Disponible en http://w3.dsi.uanl.mx/publicaciones/maricultura/acuiculturaV/raa.pdf. Revisado 27 Mayo 2009.

Ramadan, A., Afifi, N.A., Moustafa, M.,y Samy, A.M., 1994. The effect of ascogen on the immune response of tilapia fish to Aeromonas hydrophila vaccine. Fish Shellfish Immunol. 5, 159 165.

24

Revista AquaTIC, Ao 2003 n 19, pp. 1-7. Disponible en < http://www.revistaaquatic.com/aquatic/art.asp?t=p&c=166> Revisado 27 Mayo 2009.

Roald, S.O., 1978. Effects of sublethal concentrations of lingo-sulphonates on growth, intestinal flora and some digestive enzymes of rainbow trout (Salmo gairdneri). Aquaculture 12, 327 335

Sakai, M.1999. Current research status of fish Immunostimulants Aquaculture 172: 63-92.

Sakai, M., Taniguchi, K., Mamoto, K., Ogawa, H., y Tabata, M., 2001. Immunostimulant effects of nucleotide isolated from yeast RNA on carp, Cyprinus carpio L. J. Fish Dis. 24, 433 438.

Sanderson, I.R., He, Y., 1994. Nucleotide uptake and metabolism by intestinal epithelial cells. J. Nutr. 124. 1S , 131S137S.

Secombes, C.J., L.J. Hardie y G. Daniels. 1996. Cytokines in fish: an up date. Fish Shellfish Immunol. 6:291-304.

Stephen Gunther MSc, Phd (c) Universidad de Guelph, Canad 2009. Comunicacin personal

Shoemaker C.A., Klesius P.H.,y Plumb J.A. 1997. Killing if Edwardsiella ictaluri by macrophages form channel catfish immune and susceptible to enteric septicemia of catfish. Vet Immunol. Immunopathol. 58:181-190

Stein, H.H. y C.D. Mateo. 2005. Nucleotides in nutrition: importance in infant and childhood diets. En: Nutritional Biotechnology in the Feed and Food Industries. Proceedings of Alltechs 21

st Annual Symposium (T.P. Lyons and K.A. Jacques, eds). Nottingham University Press, UK, pp. 147-150

Tyzard, I. 1992. The phylogeny of the immune system. En:Veterinary Immunology an introduction. W.B. Saunders Company (Ed.). Harcourt Brace Jovanovich, Inc. USA. 457-469.

Uauy, R., 1994. Nonimmune system responses to dietary nucleotides. J. Nutr. 124 1S , 157S159S.

Uauy, R., Stringel, G., Thomas, R.,y Quan, R., 1990. Effect of dietary nucleosides on growth and maturation of the developing gut in the rat. J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 10, 497503.

Van Buren, C.T., Kulkarni, A., y Rudolph, F.B., 1994. The role of nucleotides in adult nutrition. J. Nutr. 124 1S , 160S164S.

Volanakis, E., X. Yuanyuan y K.J. Macon. 1990. En: Defense Molecules. Marchalonis, J.J. & C.L. Reinisch (Eds.). Wiley-Liss. New York. 161-175

Wadsworth S., Vecino J. y Gonzlez J., 2006; IV Conferencia Internacional Aqua Sur 2008. Puerto Varas Chile. R&D Report 05-06. Ewos Innovation Chile. Disponible en < http://www.aqua-surconference.cl/pdf/descarga/manana_sesion/3_JAVIER_GONZALEZ.pdf> Revisado 27 Mayo 2009.

Wadsworth S., Vecino J. y Gonzlez J., 2007; EI R&D Report 0-07. Ewos Innovation Chile. IV Conferencia Internacional Aqua Sur 2008. Puerto Varas Chile. R&D Report 05-06. Ewos Innovation Chile. Disponible en < http://www.aqua-surconference.cl/pdf/descarga/manana_sesion/3_JAVIER_GONZALEZ.pdf> Revisado 27 Mayo 2009.

Walker WA 1996. Exogenous nucleotides and gastrointestinal immunity. Transplant. Proc. 28, 2438 2441.

Yano, T. 1992. Assays of hemolytic complement activity. En: Techniques in fish Immunol. Stolen, J.S., T.C. Fletcher, D.P. Anderson, S.L. Kaatari & A.F. Rowley (Eds.). SOS Publications USA. 2:131-141.

Zapata, A., A. Chiba y A. Varas. 1990. Cells and tissues of the immune system of fish. En: Iwama, Q. & T. Nakanishiet (Eds.). The Fish Immune System: Organism, Pathogen and Environment. Acad Press, San Diego. 1- 62

Zapata, A.G., A. Varas y M. Torroba 1992. Seasonal variations in the immune system of lower vertebrates. Immunol. Today, 12:142-14