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Diego Fernando Lopez Muñoz
Fundamentos de microscopía óptica
Aplicación de la microscopía en el
diagnóstico clínico
Curso 2013
13/02/2013
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Contenidos1. Introducción2. Objetivo de inmersión3. Microbiología
3.1. Coloración de Gram3.2. Coloración de Zielh-Neelsen3.3. Microscopía de fluorescencia3.4. Microscopía de campo oscuro
4. Hematología 4.1. Coloración de Wright4.2. Coloración de gota gruesa
Fundamentos de microscopía óptica
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[3]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Microscopía óptica
• Menos costosa• Límite resolución (200nm)• Luz visible• Células vivas, fijadas y teñidas• Objetivos 4x, 10x, 40x, 100x
Campo luminoso
Campo oscuro
Fluorescencia
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[4]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Hace pleno uso de la apertura numérica consiguiendo mayor resolución
Objetivo de inmersión 100x
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[5]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Objetivo de inmersión 100x
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[6]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Coloración de GramPermite conocer la morfología celular bacteriana
Bacterias Gram Negativas Bacterias Gram Positivas
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[7]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Coloración de GramEn función del color podemos conocer:
Forma
Agrupación
Tamaño
Diagnóstico
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[8]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Coloración de Zielh-Neelsen
Pared celular de las micobacterias
1 Lípidos externos2 Ácido micólico3 Polisacáridos (arabinogalactano)4 Peptidoglicano 5 Membrana plasmática6 Lipoarabinomanano (LAM)7 Fosfatidilinositol manosido.
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[9]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Coloración de Zielh-Neelsen Observación de
mycobacterium a 100x
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[10]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Microscopía de fluorescencia
Fluorocromo
Muestra
Epifluorescencia
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[11]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Microscopía de fluorescenciaEpifluorescencia
Diagnóstico de micobacterias Tinción con auramina
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[12]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Microscopía de campo oscuro
Detección de espiroquetas (Treponema pallidium o
leptospira)
Bloquea los rayos centrales que alcanza al condensador logrando que el fondo aparezca negro y los especímenes brillantes.
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[13]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Microscopía de campo oscuro
Treponema pallidumCausante de sífilis
LeptospiraCausante de Leptospirosis
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[14]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Coloración de Wright
Tipo de tinción usada en histología para facilitar la diferenciación de los tipos de células de la sangre
Muy sensible a las variaciones de pH
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[15]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Coloración de WrightTinción tipo
Romanowsky(Eosina y azul de
metileno)
Núcleos de leucocitos y neutrófilos
Eritrocitos
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[16]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Coloración de gota gruesa Utilizada para diagnóstico
de malaria
Pueden parasitar al hombre: Plasmodium falciparum,
vivax, ovale y malarie.
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[17]Fundamentos de microscopía óptica y electrónica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Coloración de gota gruesaTinción GIEMSA
Gameto de plasmodium vivax Formas anulares de plasmodium falciparum
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[18]Fundamentos de microscopía óptica
Introducción Objetivo de inmersión Microbiología Hematología
Coloración de WrightDiagnóstico de anemias
Anemia megaloblástica Anemia drepanocítica
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[19]Fundamentos de microscopía óptica
Gracias por su atención