DETERMINACION CUANTITATIVA Y CUALITATIVA DE COLESTEROL{} UNIVERSIDAD PEDAGGICA EXPERIMENTAL LIBERTADOR. INSTITUTO PEDAGGICO DE CARACAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGA Y QUMICA LICENCIADO EN EDUCACION MENCION BIOLOGIA Y QUIMICA DE LA UNIVERSIDAD CATOLICA ANDRES BELLO (UCAB.) FREDDY CASANOVA N. Evento / Objeto Extraccin e identificacin cuantitativa del colesterol presente en un producto comercial (yogurt) utilizando la reaccin de Lambert y Beer y el mtodo espectrofotometrico. Preguntas centrales 1.- Cmo influir la metodologa de extraccin del colesterol en cuanto a las precauciones para no contaminar la muestra y realizar una extraccin completa y ptima, evitando su desnaturalizacin y permitiendo mantener un buen rendimiento de la muestra.? 2.- Qu resultados se obtendrn al aplicar las prueba de identificacin de colesterol a la muestra problema? 3.- Cul ser la longitud de onda mxima de absorcin de un producto comercial (yogurt) mediante la aplicacin del barrido espectrofotomtrico? 4- Cul es la tendencia de la curva de calibracin del colesterol.? 5.- Cul ser el rendimiento de la concentracin obtenido experimentalmente con el reportado en el producto.? 6.- Cul es la concentracin de colesterol presente en la muestra de yogurt? Marco terico Visin del Mundo: La investigacin experimental nos permite establecer comparaciones entre los valores reportados por los productos comerciales y los obtenidos experimentalmente. Permitiendo concientizar sobre los productos que se consumen. Filosofas: Materialista: Ya que se basa en las observaciones, anlisis y razonamientos obtenidos en las experiencias de laboratorio y permite conocer el comportamiento qumico y fsico de los lpidos presentes en productos comerciales con propsito de consumo masivo. Teoras: 1.- Teora celular: Parte de la concepcin de que el colesterol que se estudia, es producido y sintetizado a nivel celular y en los diferentes tejidos animales. 2.- Teora molecular: Los lpidos son un tipo de biomolculas que se distinguen por su solubilidad en disolventes no polares como una de sus caractersticas. 3.- Teora corpuscular: explica el comportamiento que pueda tener una molcula como partcula. 4.- Teora electromagntica: al incidir las radiaciones electromagnticas de un espectro continuo sobre una sustancia determinada tiene lugar la absorcin ms o menos intensa de ciertas radiaciones al pasar las molculas a niveles superiores de energa. Leyes: Ley de Lambert y Beer: Se utiliza el mtodo espectrofotomtrico donde se utiliza la concentracin y la absorbancia, a su vez se establece la relacin entre la concentracin de las disoluciones diluidas para poder ser medidas en longitud de onda determinadas. Ley de conservacin de la masa: Durante las reacciones se mantienen una relacin igual entre la cantidad de masa de los productos y los reaccionantes. Ley de las proporciones mltiples: Si dos elementos pueden combinarse para formar ms de un compuesto, las masas de uno de los elementos que se combinan con una masa fija del otro. Principios: - La reactividad del colesterol se fundamenta en la reactividad del doble enlace frente a reactivos permitiendo su identificacin. El colesterol presenta un espectro de absorcin determinado en el rango visible infrarrojo que permite determinar su concentracin. El tiempo de reaccin es un factor determinante para diferencial el colesterol del esteroles. La prueba de Salkowski la reaccin de colesterol con este reactivo produce una condensacin de biesteroles. La formacin de un anillos de color indica la presencia de colesterol. Mapa de conceptos:VER IMAGEN NRO. 1 Marco metodolgico Procedimiento: Extraccin del colesterol del yogurt liquido. 1.-Agregar 5 ml. De la muestra problema en un tubo de centrifuga. 2.-Agregar 6 ml. De una mezcla de cloroformometanol. 3.-Agregar 1 ml. De agua destilada 4.-Agitar fuertemente el contenido por 5 minutos. 5.-Centrifugar a 3000 r.p.m. Durante 10 minutos. 6.-Observar la existencia de dos fases 7.-Separar la fase inferior 8.-Determinar su volumen 9.-Registrar lo observado. Preparacin y aplicacin de reactivo Liebermann Burchard. 1.-Mezclar lentamente cido actico glacial, anhdrido actico H2SO4Concentrado al 30%,60%,10%, enfriando el contenido en un bao de agua fra. 2.-Disolver sulfato de sodio anhidro (Na2SO4) de modo que la solucin quede al 20% m/v. Evitar el contacto directo. 3.-Agregar 15 gotas de anhdrido actico a 2 ml. De la muestra a analizar. 4.-Agregar 2ml. De H2SO4 concentrado. 4.-Agitar y esperar el desarrollo de un color verde esmeralda. 5.-Aplicar el mismo procedimiento a una muestra de cloroformo para control. Prueba de salkwski:1.-Colocar en un tubo de ensayo 1ml de colesterol. 2.- Dejar caer por las paredes del tubo de ensayo igual volumen de H2SO4 concentrado. 3.- Observar formacin de anillo de color. Cuantificacin de colesterol: Preparar un volumen de 5ml de las disoluciones segn especificaciones en tabla.(ver anexo). 2.- Mezclar suavemente la mezcla cloroformica con reactivo de Lieberman-Burchard.3.- Medir la absorbancia en el espectronic 20, previamente calentado 20minutos. INTERPRETACIONES: Durante la realizacin de la prctica se puso de manifiesto que la aplicacin adecuada de la tcnica de extraccin de colesterol es de gran importancia para que el rendimiento de la muestra sea ptima ya que esto permite obtener resultados prximos a la realidad evitando as errores que puedan influir en los resultados. Segn Mathews (2000) el colesterol puede sufrir hidrolizacin debido a la ruptura de los enlaces que los componen. Esto se debe a que el colesterol es una sustancia dbilmente anfiptica, debido al grupo hidroxilo de un extremo de la molcula. Los resultados aplicados a la muestra de yogurt fueron positivos para la prueba de Salkowski, ya que esta presenta la formacin de un anillo de color caracterstico debido a que este al reaccionar con el colesterol forma dobles enlaces adicionales como consecuencia de la condensacin de dos molculas de colesterol. as mismo sucedi con la prueba de Liebermann Burchard desarrollndose un color verde esmeralda en un tiempo corto lo que indica la presencia de colesterol. La longitud mxima de adsorcin de la muestra conocida de colesterol arroj que esta era de 595 . Bajo las condiciones de temperatura y humedad que se encontraban al momento de realizar la prctica. Mientras que el valor terico era de 540 . Esto se debe a la presencia de dos picos ptimos en la curva por lo que la diferencia del valor terico y el experimental son irrelevantes ya que posiblemente las condiciones del valor terico eran otras. La tendencia de la curva de colesterol result ser la esperada por nosotros en funcin de los datos tericos y prcticas, podemos decir que fue positiva, ya que se obtuvo un valor de 1.1798. La concentracin de la muestra de colesterol en la curva de calibracin fue de 1,12 mg/ml y la obtenida a partir de los clculos fue de 0,151 mg/ml. Esto nos permite establecer la comparacin de los valores reportados en el yogurt 11,8mg/100g. y los reportados por el INN 121,4mg/100g nos indica que estos difieren en gran medida con los obtenidos en el experimento ya que las concentraciones del yogurt a partir de los datos experimentales fueron mucho menores. Podemos afirmar adems que el colesterol es una sustancia soluble en solventes orgnicos tales como el cloroformo metanol (Horton, 1993), el colesterol se encuentra en todos los mamferos y su ingesta es innecesaria y acarrea problemas al organismo cuando se consume en exceso. Ya que como la plantea Raws 1989 el exceso de colesterol en el organismo causa problemas para la salud tales como clculos biliares y endurecimiento de las arterias debido a su solidificacin. Adems de general una alteracin en el sistema hormonal. Aunque el colesterol no es esencial para el organismo ya que este lo produce, podemos notar que se encuentra en la gran mayora de los productos comerciales de origen animal. Es por esto que la ingesta de colesterol puede ocasionar daos en el organismo. El colesterol presenta las siguiente formula molecular: El colesterol se encuentra en la clula eucariota especficamente en la membrana plasmtica de los todos los mamferos, pero se encuentra rara vez en las plantas (Horton, 1995) segn el valor durante la prctica de laboratorio para la concentracin de colesterol presente en la muestra de yogurt 1,12mg/ml se encontr que la concentracin es de aproximadamente 0,151 mg/ml podemos deducir que este se encuentra dentro de los valores aceptables para el organismo ya que esta muy por debajo de la concentracin reportada por el producto. Afirmacin de conocimientos:1.-la metodologa de extraccin del colesterol es importante influye mucho en la confiabilidad de los resultados puesto que el colesterol se puede hidrolizar lo que no sucedi en este caso ya que de los resultados se puede deducir que existe cierta similitud entre el valor reportado en el producto y el experimental. 2.- En cuanto a los resultados de la prueba de Salkowski se observo la formacin de un anillo de color violeta casi de forma inmediata, pudiendo afirmar que el resultado fue positivo indicando la presencia de colesterol en la muestra. 3.- La longitud de honda optima de la muestra de colesterol contenido en la muestra de yogurt, obtenida mediante un barrido espectrofotometrico fue 595. 4.- la tendencia de la curva de calibracin del colesterol fue positiva dando unos valores de 1,1798. 5.- el rendimiento de la concentracin de la muestra de colesterol fue optimo ya que cuando se compara la grfica en relacin con el valor de la grfica se observa similitud entre los valores. 6.- La concentracin de colesterol presente en la muestra problema fue de 1, 12mg/ml mediante la extrapolacin grfica y 0.151mg/ml. Juicio de valor: Los conocimientos tericos y prcticos sobre los lpidos nos permiten conocer la importancia bioqumica de estas sustancias orgnicas que componen los tejidos y membranas esenciales para los seres vivos. Marco afectivo La experiencia de laboratorio fue fructfera ya que trabajamos ordenadamente y seguimos todas las normas y pautas que nos planteamos para resolver nuestras interrogantes. Nos sentimos satisfechos porque creemos que nos desempeamos bien, adems reforzamos nuestros conocimientos.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. HERRERA, E.(1994). Bioqumica. Editorial McGraw-Hill, Madrid-Espaa. LEHNINGER, A.(1982).Bioqumica. Editorial Omega. Barcelona- Espaa. RAWN J.(1989) Bioqumica. Editorial McGraw-Hill, Madrid-Espaa. MATHEWS, R.(1999). Bioqumica. Editorial McGraw-Hill, Madrid-Espaa.

http://bioquimica.obolog.es/determinacion-cuantitativa-cualitativa-colesterol-1290017