SEPDGETISEMS

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de servicios N° 107

TUXTEPEC OAXACA.

NOMBRE DEL ALUMNO: ÁUREA AÍDA AGUILAR FELIPE

CATEDRÁTICO:I.B.Q. MARIA DE JESUS ROBLES ORTEGA

SUBMÓDULO PROFESIONAL: APLICAR TECNICAS DE VALORACIONMETABOLICAS

PRACTICA:

DETERMINACION CUANTITATIVA-ENZIMATICO-COLORIMETRICA

DE COLESTROL TOTAL EN SUERO

SEMESTRE: 6° GRUPO: “AL”

FECHA DE ENTREGA: ____ DE __________________ DEL 201_

CALIFICACIÓN Y OBSERVACIONES: _____________________________________

INTRODUCCION

El método enzimático para colesterol fue introducido en 1973 por Flegg1 y Richmond2,

utilizando colesterol oxidasa de origen bacteriano seguida de saponificación química de los

ésteres del colesterol. Roeschlau3 modificó ésta técnica y Allain y Col4 publicó los primeros

ensayos enzimáticos completos combinando el colesterol oxidasa y el colesterol estearasa.

Este método se basa en el de Allain y utiliza estas enzimas en combinación con el reactivo

peroxidasa/fenol-4-antipirina, de Trinder5.

La colesterol estearasa (CE) hidroliza a los ésteres del colesterol para dar colesterol libre y

ácidos grasos. El colesterol libre así producido más el colesterol preformado se oxida en

presencia del colesterol oxidasa (COx) para dar colesten-4-3-cetona y peróxido de

hidrógeno. Un cromógeno quinonaimina, con absorción máxima a 500 nm, se produce

cuando el fenol se acopla oxidativamente con 4-aminofenazona en presencia de

peroxidasa (POD) con peróxido de hidrógeno. La intensidad final del color rojo

esproporcional a la concentración total del colesterol. El Factor Aclarador Lipemico (LCF) es

una mezcla de aditivos especialmente diseñados porStanbio integrados dentro del reactivo

de colesterol para ayudar a minimizarlas interferencias debidas ala Lipemia.

Esteres del colesterol CE Colesterol + Ácidos Grasos

Colesterol +O2COxColesten-4-3-cetona +H2O2

H2O2 + 4-Aminofenazona + fenol PODH2O+ O-Quinonaimina colorante

OBJETIVO

En el laboratorio clínico, la aplicación más importante de la electroforesis es la separación

de proteínas presentes en el suero, orina y otros fluidos biológicos como el líquido

cefalorraquídeo y el líquido sinovial. El objetivo principal de la práctica estará dirigido a la

comprensión e identificación de conceptos físicos teóricos relacionados con este tipo de

técnicas, así como la descripción de las mismas y su uso.

PROCEDIMIENTO

1. Extraer 5ml de sangre sin anticoagulante

2. centrifugar a 2500 r.p.m. durante 5 min.

3. Separar el suero en un nuevo tubo debidamente rotulado y llevar a centrifugar a 2500

r.p.m. por 3 minutos.

4. Observar si hay un botón eritrocitario, si lo hay, vaciar el suero a otro tubo ya

rotulado, sin desprender el botón, y obtenernos suero libre de células.

5. Continuamos agregando 2.0ml de reactivo a un tubo rotulado con la letra “M” de

muestra.

6. Al tubo “M” le agregamos 20µl de suero problema, mezclar y llevar a …

7. Incubar a 37°C por 5 minutos.

8. Procedemos a leer en el espectrofotómetro a 500nm

9. Realizar cálculos.

Blanco (B) Estándar (S) Muestra(U)

Reactivo 2.0ml 2.0ml 2.0ml

Estándar 20µl

Muestra 20µl

INTERPRETACION

Reactivos: Incoloro

Reactivo y suero: se torna color rosáceo/crema.

CALCULOS RESULTADOS

Los valores se derivan de los siguientes cálculos:

Colesterol total en suero (mg/dL) = AM x 200

AE

Donde AM y AE son los valores de absorbancias de la muestra y del estándar

respectivamente y 20 es la concentración del estándar (mg/dL).

SEP DGETISEMS

Tuxtepec, OAX.

APLICAR TÉCNICAS DE VALORACIÓN METABOLICAS

PRÁCTICA

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA-ENZIMATICO-

COLORIMETRICA DE COLESTEROL TOTAL

NOMBRE DEL PACIENTE:JUNCO GARCÍA PERLA RUBÍ

SEXO:F EDAD:18 AÑOS FECHA:22/03/11 HORA:9:40AM

REPORTE

RESULTADOS:

______________________

OBSERVACIONES:

__________________________________________________________________________________________________

________________________

ANALISTA:

AUREA AIDA AGUILAR FELIPE 6°“AL”

VALORES DE REFERENCIA

Colesterol Total mg/dL

Cordón 45-100

Recién Nacido 53-135

Infante 70-175

Niños 120-200

Adolescentes 120-210

Adultos 140-310

Ideal p/adultos 140-200

Raza Negra: Aproximadamente

10 mg/dL más altos.