Determinación cuantitativa del virus de la Hepatitis B

Es un inmunoensayo enzimático de fase sólida (EIA), basado en un principio de reconocimiento doble. La fase sólida es un Peine con 12 proyecciones ("dientes").

Cada diente está sensibilizado en dos áreas reactivas: punto superior — albúmina de suero bovino biotinilada (Control Interno) punto inferior — HBsAg recombinante.

La Bandeja de Desarrollo tiene 6 filas (A-F) de 12 pocillos. Cada fila contiene una solución reactiva lista para ser usada en

cada etapa del ensayo. La prueba es realizada en etapas, pasando el

Peine de una fila a otra, con un período de incubación en cada etapa. Para comenzar la prueba, las muestras de suero o plasma son agregadas al diluyente en los pocillos de la fila A de la Bandeja de Desarrollo. Luego se inserta el Peine en los pocillos de la fila A.

FUNDAMENTO

Los anticuerpos anti-HBs, en caso de estar presentes en las muestras, se unirán con el HBsAg en los puntos inferiores del diente del Peine (Figura 1). Los componentes no unidos son lavados en la fila B. En la fila C, los anticuerpos anti-HBs capturados en los puntos inferiores del diente reaccionarán con el HBsAg biotinilado. En la fila D el complejo antígeno biotinilado/anticuerpo en los puntos inferiores del diente, y la albúmina de suero bovino biotinilada de los puntos superiores (Control Interno) reaccionarán con estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina (FA). En la fila E, los componentes no ligados son eliminados mediante un lavado. En la fila F, la fosfatasa alcalina unida reaccionará con un sustrato cromogénico. Los resultados pueden verse como puntos azul grisáceos en la superficie del diente del Peine.

Equipo necesario:Pipetas de precisión.Tijerascronometro

Procedimiento de la prueba

Reacción Antígeno-Anticuerpo (Fila A de la bandeja de Desarrollo.

Instrucciones de la prueba

Primer lavado (Fila B)

Instrucciones de la prueba

Unión del HBsAg Biotinilado (Fila C)Unión de la Estreptavidina/Fosfatasa

alcalina (Fila D).Segundo lavado (Fila E).Reacción de color (Fila F).

Instrucciones de la prueba

Detención de la Reacción (Fila E).

Resultados.

Instrucciones de la prueba

Interpretación semicuantitativa por lectura visual.

Interpretación de la prueba

Lectura instrumental con el reflectómetro.

Tabla de conversiones de las lecturas de Absorbancia relativa a títulos.

Interpretación de la prueba

Absorbancia Relativa

Título (IU/L)*

<693 <10

693 – 1168 10

1169 – 1723 251724 – 2430Mayor/igual 2431

50Mayor/igual 100