del aceite esencial de lum
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1
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
FACULTAD DE ODONTOLOGIacuteA
EAP DE ODONTOLOGIacuteA
Determinacioacuten de la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo
del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
TESIS Para optar el Tiacutetulo Profesional de Cirujano Dentista
AUTOR
Jessica Flores Romero
Lima ndash Peruacute
2014
2
JURADO DE SUSTENTACIOacuteN
PRESIDENTE CD Jorge Eleodoro Villavicencio Gasteluacute
MIEMBRO Mg CD Martha Cecilia Rodriacuteguez Vargas
MIEMBRO ASESOR Mg CD Mariacutea Angeacutelica Alvarez Paacuteucar
3
DEDICATORIA
A Dios por ser la luz que guiacutea mi camino y por colocar
personas maravillosas en mi vida
A mis padres Maacuteximo y Nicolasa por darme la vida por
brindarme su gran amor diacutea a diacutea por su confianza y
apoyo constante en todas las metas que me propongo
4
AGRADECIMIENTOS
A mi asesora Mg CD Mariacutea Angeacutelica Alvarez Paacuteucar por su apoyo continuo y el
tiempo dedicado a la realizacioacuten de la tesis
A la Mg CD Martha Cecilia Rodriacuteguez Vargas y al CD Jorge Eleodoro
Villavicencio Gasteluacute por sus aportes y la ayuda brindada en la presente
investigacioacuten
A mi familia que con su apoyo desinteresado me ayudoacute a terminar la carrera y me
incentivan constantemente
A mis amigos por estar presentes en los buenos y malos momentos
A mi alma mater ldquoUniversidad Nacional Mayor de San Marcosrdquo a quien llevo en mi
corazoacuten en todo momento y lugar
5
RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue determinar la actividad antibacteriana del
aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo frente a
Streptococcus mutans Se empleoacute el meacutetodo de disco-difusioacuten en agar La cepa
fue reactivada en placa de Tripticasa Soya Agar (TSA) incubada a 37 ordmC por 24
horas en microaerofilia Se tomaron 5 colonias y se transfirieron a un tubo de
ensayo con 5 mL de caldo Muumlller-Hinton incubada a 37 ordmC por 6 horas en
microaerofilia hasta obtener una turbidez equivalente al 05 de la escala de Mc
Farland El sembrado se realizoacute en 14 placas con agar Muumlller-Hinton mediante la
teacutecnica de difusioacuten utilizando el aceite esencial en concentraciones de 10 50 y
100 y se procedioacute a la incubacioacuten en microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas El
anaacutelisis estadiacutestico se realizoacute con el programa STATA Versioacuten 12 Las
concentraciones al 10 50 y 100 presentaron un halo de inhibicioacuten promedio de
628 788 y 866 mm respectivamente la diferencia de promedios entre estas tres
concentraciones mostroacute diferencia estadiacutesticamente significativa (Plt005) Se
concluye que las tres concentraciones del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo presentan actividad antibacteriana frente a
Streptococcus mutans
Palabras claves Streptococcus mutans arrayan actividad antibacteriana
6
ABSTRACT
The aim of this study was to determine the antibacterial activity of the essential oil
of Luma chequen (Molina) A Gray myrtle against Streptococcus mutans The
disk-diffusion method in agar was used The strain was reactivated in Trypticase
Soy agar plate (TSA) incubated at 37 degC for 24 hours in microaerophilic 5
colonies were picked and transferred to a test tube with 5 mL of Mueller-Hinton
broth incubated at 37 degC for 6 hours under microaerophilic conditions until a
turbidity equivalent to 05 Mc Farland scale Seeding was performed on 14 plates
with Mueller-Hinton agar by diffusion technique using the essential oil in
concentrations of 10 50 and 100 and the incubation proceeded in
microaerophilic at 37 ordmC for 24 hours Statistical analysis was performed using
STATA Version 12 program Concentrations of 10 50 and 100 had a halo of
inhibition average of 628 788 and 866 mm respectively the mean difference
between these three concentrations showed statistically significant difference
(Plt005) We conclude that the three concentrations of the essential oil of Luma
chequen (Molina) A Gray myrtle exhibit antibacterial activity against
Streptococcus mutans
Keywords Streptococcus mutans myrtle antibacterial activity
7
CONTENIDO
Pag
I INTRODUCCIOacuteN 1
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOacuteN 3
21 Aacuterea problema 3
22 Delimitacioacuten del problema 3
23 Formulacioacuten del problema 4
24 Objetivos de la investigacioacuten 4
241 Objetivo general 4
242 Objetivos especiacuteficos 4
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten 5
26 Limitaciones de la investigacioacuten 5
III MARCO TEOacuteRICO 6
31 Antecedentes 6
32 Bases teoacutericas 11
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo 11
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero 11
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas 12
3213 Distribucioacuten y haacutebitat 15
3214 Usos y propiedades medicinales 15
3215 Aceite esencial y Luma chequen 16
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial 17
322 Clorhexidina 19
8
3221 Descripcioacuten 19
3222 Propiedades 20
3223 Mecanismo de accioacuten 22
3224 Presentaciones 25
323 Streptococcus mutans 27
3231 Clasificacioacuten 27
3232 S mutans y grupo mutans 27
3233 Descripcioacuten 28
3234 Estructura celular 29
3235 Factores de virulencia 30
3236 Haacutebitat 31
324 Fitoterapia 32
3241 Definicioacuten 32
3242 Usos de la fitoterapia 32
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos 33
34 Hipoacutetesis y variables 34
35 Operacionalizacioacuten de variables 35
IV METODOLOGIacuteA 36
41 Tipo de investigacioacuten 36
42 Poblacioacuten y muestra 36
43 Procedimientos y teacutecnicas 37
431 Obtencioacuten del aceite esencial 37
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro 38
44 Procesamiento de datos 45
45 Anaacutelisis de resultados 46
9
V RESULTADOS 47
VI DISCUSIOacuteN 58
VII CONCLUSIONES 60
VIII REFERENCIAS BIBILIOGRAacuteFICAS 61
IX ANEXOS 67
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
2
JURADO DE SUSTENTACIOacuteN
PRESIDENTE CD Jorge Eleodoro Villavicencio Gasteluacute
MIEMBRO Mg CD Martha Cecilia Rodriacuteguez Vargas
MIEMBRO ASESOR Mg CD Mariacutea Angeacutelica Alvarez Paacuteucar
3
DEDICATORIA
A Dios por ser la luz que guiacutea mi camino y por colocar
personas maravillosas en mi vida
A mis padres Maacuteximo y Nicolasa por darme la vida por
brindarme su gran amor diacutea a diacutea por su confianza y
apoyo constante en todas las metas que me propongo
4
AGRADECIMIENTOS
A mi asesora Mg CD Mariacutea Angeacutelica Alvarez Paacuteucar por su apoyo continuo y el
tiempo dedicado a la realizacioacuten de la tesis
A la Mg CD Martha Cecilia Rodriacuteguez Vargas y al CD Jorge Eleodoro
Villavicencio Gasteluacute por sus aportes y la ayuda brindada en la presente
investigacioacuten
A mi familia que con su apoyo desinteresado me ayudoacute a terminar la carrera y me
incentivan constantemente
A mis amigos por estar presentes en los buenos y malos momentos
A mi alma mater ldquoUniversidad Nacional Mayor de San Marcosrdquo a quien llevo en mi
corazoacuten en todo momento y lugar
5
RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue determinar la actividad antibacteriana del
aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo frente a
Streptococcus mutans Se empleoacute el meacutetodo de disco-difusioacuten en agar La cepa
fue reactivada en placa de Tripticasa Soya Agar (TSA) incubada a 37 ordmC por 24
horas en microaerofilia Se tomaron 5 colonias y se transfirieron a un tubo de
ensayo con 5 mL de caldo Muumlller-Hinton incubada a 37 ordmC por 6 horas en
microaerofilia hasta obtener una turbidez equivalente al 05 de la escala de Mc
Farland El sembrado se realizoacute en 14 placas con agar Muumlller-Hinton mediante la
teacutecnica de difusioacuten utilizando el aceite esencial en concentraciones de 10 50 y
100 y se procedioacute a la incubacioacuten en microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas El
anaacutelisis estadiacutestico se realizoacute con el programa STATA Versioacuten 12 Las
concentraciones al 10 50 y 100 presentaron un halo de inhibicioacuten promedio de
628 788 y 866 mm respectivamente la diferencia de promedios entre estas tres
concentraciones mostroacute diferencia estadiacutesticamente significativa (Plt005) Se
concluye que las tres concentraciones del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo presentan actividad antibacteriana frente a
Streptococcus mutans
Palabras claves Streptococcus mutans arrayan actividad antibacteriana
6
ABSTRACT
The aim of this study was to determine the antibacterial activity of the essential oil
of Luma chequen (Molina) A Gray myrtle against Streptococcus mutans The
disk-diffusion method in agar was used The strain was reactivated in Trypticase
Soy agar plate (TSA) incubated at 37 degC for 24 hours in microaerophilic 5
colonies were picked and transferred to a test tube with 5 mL of Mueller-Hinton
broth incubated at 37 degC for 6 hours under microaerophilic conditions until a
turbidity equivalent to 05 Mc Farland scale Seeding was performed on 14 plates
with Mueller-Hinton agar by diffusion technique using the essential oil in
concentrations of 10 50 and 100 and the incubation proceeded in
microaerophilic at 37 ordmC for 24 hours Statistical analysis was performed using
STATA Version 12 program Concentrations of 10 50 and 100 had a halo of
inhibition average of 628 788 and 866 mm respectively the mean difference
between these three concentrations showed statistically significant difference
(Plt005) We conclude that the three concentrations of the essential oil of Luma
chequen (Molina) A Gray myrtle exhibit antibacterial activity against
Streptococcus mutans
Keywords Streptococcus mutans myrtle antibacterial activity
7
CONTENIDO
Pag
I INTRODUCCIOacuteN 1
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOacuteN 3
21 Aacuterea problema 3
22 Delimitacioacuten del problema 3
23 Formulacioacuten del problema 4
24 Objetivos de la investigacioacuten 4
241 Objetivo general 4
242 Objetivos especiacuteficos 4
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten 5
26 Limitaciones de la investigacioacuten 5
III MARCO TEOacuteRICO 6
31 Antecedentes 6
32 Bases teoacutericas 11
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo 11
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero 11
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas 12
3213 Distribucioacuten y haacutebitat 15
3214 Usos y propiedades medicinales 15
3215 Aceite esencial y Luma chequen 16
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial 17
322 Clorhexidina 19
8
3221 Descripcioacuten 19
3222 Propiedades 20
3223 Mecanismo de accioacuten 22
3224 Presentaciones 25
323 Streptococcus mutans 27
3231 Clasificacioacuten 27
3232 S mutans y grupo mutans 27
3233 Descripcioacuten 28
3234 Estructura celular 29
3235 Factores de virulencia 30
3236 Haacutebitat 31
324 Fitoterapia 32
3241 Definicioacuten 32
3242 Usos de la fitoterapia 32
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos 33
34 Hipoacutetesis y variables 34
35 Operacionalizacioacuten de variables 35
IV METODOLOGIacuteA 36
41 Tipo de investigacioacuten 36
42 Poblacioacuten y muestra 36
43 Procedimientos y teacutecnicas 37
431 Obtencioacuten del aceite esencial 37
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro 38
44 Procesamiento de datos 45
45 Anaacutelisis de resultados 46
9
V RESULTADOS 47
VI DISCUSIOacuteN 58
VII CONCLUSIONES 60
VIII REFERENCIAS BIBILIOGRAacuteFICAS 61
IX ANEXOS 67
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
3
DEDICATORIA
A Dios por ser la luz que guiacutea mi camino y por colocar
personas maravillosas en mi vida
A mis padres Maacuteximo y Nicolasa por darme la vida por
brindarme su gran amor diacutea a diacutea por su confianza y
apoyo constante en todas las metas que me propongo
4
AGRADECIMIENTOS
A mi asesora Mg CD Mariacutea Angeacutelica Alvarez Paacuteucar por su apoyo continuo y el
tiempo dedicado a la realizacioacuten de la tesis
A la Mg CD Martha Cecilia Rodriacuteguez Vargas y al CD Jorge Eleodoro
Villavicencio Gasteluacute por sus aportes y la ayuda brindada en la presente
investigacioacuten
A mi familia que con su apoyo desinteresado me ayudoacute a terminar la carrera y me
incentivan constantemente
A mis amigos por estar presentes en los buenos y malos momentos
A mi alma mater ldquoUniversidad Nacional Mayor de San Marcosrdquo a quien llevo en mi
corazoacuten en todo momento y lugar
5
RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue determinar la actividad antibacteriana del
aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo frente a
Streptococcus mutans Se empleoacute el meacutetodo de disco-difusioacuten en agar La cepa
fue reactivada en placa de Tripticasa Soya Agar (TSA) incubada a 37 ordmC por 24
horas en microaerofilia Se tomaron 5 colonias y se transfirieron a un tubo de
ensayo con 5 mL de caldo Muumlller-Hinton incubada a 37 ordmC por 6 horas en
microaerofilia hasta obtener una turbidez equivalente al 05 de la escala de Mc
Farland El sembrado se realizoacute en 14 placas con agar Muumlller-Hinton mediante la
teacutecnica de difusioacuten utilizando el aceite esencial en concentraciones de 10 50 y
100 y se procedioacute a la incubacioacuten en microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas El
anaacutelisis estadiacutestico se realizoacute con el programa STATA Versioacuten 12 Las
concentraciones al 10 50 y 100 presentaron un halo de inhibicioacuten promedio de
628 788 y 866 mm respectivamente la diferencia de promedios entre estas tres
concentraciones mostroacute diferencia estadiacutesticamente significativa (Plt005) Se
concluye que las tres concentraciones del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo presentan actividad antibacteriana frente a
Streptococcus mutans
Palabras claves Streptococcus mutans arrayan actividad antibacteriana
6
ABSTRACT
The aim of this study was to determine the antibacterial activity of the essential oil
of Luma chequen (Molina) A Gray myrtle against Streptococcus mutans The
disk-diffusion method in agar was used The strain was reactivated in Trypticase
Soy agar plate (TSA) incubated at 37 degC for 24 hours in microaerophilic 5
colonies were picked and transferred to a test tube with 5 mL of Mueller-Hinton
broth incubated at 37 degC for 6 hours under microaerophilic conditions until a
turbidity equivalent to 05 Mc Farland scale Seeding was performed on 14 plates
with Mueller-Hinton agar by diffusion technique using the essential oil in
concentrations of 10 50 and 100 and the incubation proceeded in
microaerophilic at 37 ordmC for 24 hours Statistical analysis was performed using
STATA Version 12 program Concentrations of 10 50 and 100 had a halo of
inhibition average of 628 788 and 866 mm respectively the mean difference
between these three concentrations showed statistically significant difference
(Plt005) We conclude that the three concentrations of the essential oil of Luma
chequen (Molina) A Gray myrtle exhibit antibacterial activity against
Streptococcus mutans
Keywords Streptococcus mutans myrtle antibacterial activity
7
CONTENIDO
Pag
I INTRODUCCIOacuteN 1
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOacuteN 3
21 Aacuterea problema 3
22 Delimitacioacuten del problema 3
23 Formulacioacuten del problema 4
24 Objetivos de la investigacioacuten 4
241 Objetivo general 4
242 Objetivos especiacuteficos 4
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten 5
26 Limitaciones de la investigacioacuten 5
III MARCO TEOacuteRICO 6
31 Antecedentes 6
32 Bases teoacutericas 11
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo 11
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero 11
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas 12
3213 Distribucioacuten y haacutebitat 15
3214 Usos y propiedades medicinales 15
3215 Aceite esencial y Luma chequen 16
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial 17
322 Clorhexidina 19
8
3221 Descripcioacuten 19
3222 Propiedades 20
3223 Mecanismo de accioacuten 22
3224 Presentaciones 25
323 Streptococcus mutans 27
3231 Clasificacioacuten 27
3232 S mutans y grupo mutans 27
3233 Descripcioacuten 28
3234 Estructura celular 29
3235 Factores de virulencia 30
3236 Haacutebitat 31
324 Fitoterapia 32
3241 Definicioacuten 32
3242 Usos de la fitoterapia 32
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos 33
34 Hipoacutetesis y variables 34
35 Operacionalizacioacuten de variables 35
IV METODOLOGIacuteA 36
41 Tipo de investigacioacuten 36
42 Poblacioacuten y muestra 36
43 Procedimientos y teacutecnicas 37
431 Obtencioacuten del aceite esencial 37
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro 38
44 Procesamiento de datos 45
45 Anaacutelisis de resultados 46
9
V RESULTADOS 47
VI DISCUSIOacuteN 58
VII CONCLUSIONES 60
VIII REFERENCIAS BIBILIOGRAacuteFICAS 61
IX ANEXOS 67
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
4
AGRADECIMIENTOS
A mi asesora Mg CD Mariacutea Angeacutelica Alvarez Paacuteucar por su apoyo continuo y el
tiempo dedicado a la realizacioacuten de la tesis
A la Mg CD Martha Cecilia Rodriacuteguez Vargas y al CD Jorge Eleodoro
Villavicencio Gasteluacute por sus aportes y la ayuda brindada en la presente
investigacioacuten
A mi familia que con su apoyo desinteresado me ayudoacute a terminar la carrera y me
incentivan constantemente
A mis amigos por estar presentes en los buenos y malos momentos
A mi alma mater ldquoUniversidad Nacional Mayor de San Marcosrdquo a quien llevo en mi
corazoacuten en todo momento y lugar
5
RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue determinar la actividad antibacteriana del
aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo frente a
Streptococcus mutans Se empleoacute el meacutetodo de disco-difusioacuten en agar La cepa
fue reactivada en placa de Tripticasa Soya Agar (TSA) incubada a 37 ordmC por 24
horas en microaerofilia Se tomaron 5 colonias y se transfirieron a un tubo de
ensayo con 5 mL de caldo Muumlller-Hinton incubada a 37 ordmC por 6 horas en
microaerofilia hasta obtener una turbidez equivalente al 05 de la escala de Mc
Farland El sembrado se realizoacute en 14 placas con agar Muumlller-Hinton mediante la
teacutecnica de difusioacuten utilizando el aceite esencial en concentraciones de 10 50 y
100 y se procedioacute a la incubacioacuten en microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas El
anaacutelisis estadiacutestico se realizoacute con el programa STATA Versioacuten 12 Las
concentraciones al 10 50 y 100 presentaron un halo de inhibicioacuten promedio de
628 788 y 866 mm respectivamente la diferencia de promedios entre estas tres
concentraciones mostroacute diferencia estadiacutesticamente significativa (Plt005) Se
concluye que las tres concentraciones del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo presentan actividad antibacteriana frente a
Streptococcus mutans
Palabras claves Streptococcus mutans arrayan actividad antibacteriana
6
ABSTRACT
The aim of this study was to determine the antibacterial activity of the essential oil
of Luma chequen (Molina) A Gray myrtle against Streptococcus mutans The
disk-diffusion method in agar was used The strain was reactivated in Trypticase
Soy agar plate (TSA) incubated at 37 degC for 24 hours in microaerophilic 5
colonies were picked and transferred to a test tube with 5 mL of Mueller-Hinton
broth incubated at 37 degC for 6 hours under microaerophilic conditions until a
turbidity equivalent to 05 Mc Farland scale Seeding was performed on 14 plates
with Mueller-Hinton agar by diffusion technique using the essential oil in
concentrations of 10 50 and 100 and the incubation proceeded in
microaerophilic at 37 ordmC for 24 hours Statistical analysis was performed using
STATA Version 12 program Concentrations of 10 50 and 100 had a halo of
inhibition average of 628 788 and 866 mm respectively the mean difference
between these three concentrations showed statistically significant difference
(Plt005) We conclude that the three concentrations of the essential oil of Luma
chequen (Molina) A Gray myrtle exhibit antibacterial activity against
Streptococcus mutans
Keywords Streptococcus mutans myrtle antibacterial activity
7
CONTENIDO
Pag
I INTRODUCCIOacuteN 1
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOacuteN 3
21 Aacuterea problema 3
22 Delimitacioacuten del problema 3
23 Formulacioacuten del problema 4
24 Objetivos de la investigacioacuten 4
241 Objetivo general 4
242 Objetivos especiacuteficos 4
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten 5
26 Limitaciones de la investigacioacuten 5
III MARCO TEOacuteRICO 6
31 Antecedentes 6
32 Bases teoacutericas 11
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo 11
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero 11
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas 12
3213 Distribucioacuten y haacutebitat 15
3214 Usos y propiedades medicinales 15
3215 Aceite esencial y Luma chequen 16
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial 17
322 Clorhexidina 19
8
3221 Descripcioacuten 19
3222 Propiedades 20
3223 Mecanismo de accioacuten 22
3224 Presentaciones 25
323 Streptococcus mutans 27
3231 Clasificacioacuten 27
3232 S mutans y grupo mutans 27
3233 Descripcioacuten 28
3234 Estructura celular 29
3235 Factores de virulencia 30
3236 Haacutebitat 31
324 Fitoterapia 32
3241 Definicioacuten 32
3242 Usos de la fitoterapia 32
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos 33
34 Hipoacutetesis y variables 34
35 Operacionalizacioacuten de variables 35
IV METODOLOGIacuteA 36
41 Tipo de investigacioacuten 36
42 Poblacioacuten y muestra 36
43 Procedimientos y teacutecnicas 37
431 Obtencioacuten del aceite esencial 37
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro 38
44 Procesamiento de datos 45
45 Anaacutelisis de resultados 46
9
V RESULTADOS 47
VI DISCUSIOacuteN 58
VII CONCLUSIONES 60
VIII REFERENCIAS BIBILIOGRAacuteFICAS 61
IX ANEXOS 67
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
5
RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue determinar la actividad antibacteriana del
aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo frente a
Streptococcus mutans Se empleoacute el meacutetodo de disco-difusioacuten en agar La cepa
fue reactivada en placa de Tripticasa Soya Agar (TSA) incubada a 37 ordmC por 24
horas en microaerofilia Se tomaron 5 colonias y se transfirieron a un tubo de
ensayo con 5 mL de caldo Muumlller-Hinton incubada a 37 ordmC por 6 horas en
microaerofilia hasta obtener una turbidez equivalente al 05 de la escala de Mc
Farland El sembrado se realizoacute en 14 placas con agar Muumlller-Hinton mediante la
teacutecnica de difusioacuten utilizando el aceite esencial en concentraciones de 10 50 y
100 y se procedioacute a la incubacioacuten en microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas El
anaacutelisis estadiacutestico se realizoacute con el programa STATA Versioacuten 12 Las
concentraciones al 10 50 y 100 presentaron un halo de inhibicioacuten promedio de
628 788 y 866 mm respectivamente la diferencia de promedios entre estas tres
concentraciones mostroacute diferencia estadiacutesticamente significativa (Plt005) Se
concluye que las tres concentraciones del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo presentan actividad antibacteriana frente a
Streptococcus mutans
Palabras claves Streptococcus mutans arrayan actividad antibacteriana
6
ABSTRACT
The aim of this study was to determine the antibacterial activity of the essential oil
of Luma chequen (Molina) A Gray myrtle against Streptococcus mutans The
disk-diffusion method in agar was used The strain was reactivated in Trypticase
Soy agar plate (TSA) incubated at 37 degC for 24 hours in microaerophilic 5
colonies were picked and transferred to a test tube with 5 mL of Mueller-Hinton
broth incubated at 37 degC for 6 hours under microaerophilic conditions until a
turbidity equivalent to 05 Mc Farland scale Seeding was performed on 14 plates
with Mueller-Hinton agar by diffusion technique using the essential oil in
concentrations of 10 50 and 100 and the incubation proceeded in
microaerophilic at 37 ordmC for 24 hours Statistical analysis was performed using
STATA Version 12 program Concentrations of 10 50 and 100 had a halo of
inhibition average of 628 788 and 866 mm respectively the mean difference
between these three concentrations showed statistically significant difference
(Plt005) We conclude that the three concentrations of the essential oil of Luma
chequen (Molina) A Gray myrtle exhibit antibacterial activity against
Streptococcus mutans
Keywords Streptococcus mutans myrtle antibacterial activity
7
CONTENIDO
Pag
I INTRODUCCIOacuteN 1
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOacuteN 3
21 Aacuterea problema 3
22 Delimitacioacuten del problema 3
23 Formulacioacuten del problema 4
24 Objetivos de la investigacioacuten 4
241 Objetivo general 4
242 Objetivos especiacuteficos 4
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten 5
26 Limitaciones de la investigacioacuten 5
III MARCO TEOacuteRICO 6
31 Antecedentes 6
32 Bases teoacutericas 11
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo 11
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero 11
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas 12
3213 Distribucioacuten y haacutebitat 15
3214 Usos y propiedades medicinales 15
3215 Aceite esencial y Luma chequen 16
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial 17
322 Clorhexidina 19
8
3221 Descripcioacuten 19
3222 Propiedades 20
3223 Mecanismo de accioacuten 22
3224 Presentaciones 25
323 Streptococcus mutans 27
3231 Clasificacioacuten 27
3232 S mutans y grupo mutans 27
3233 Descripcioacuten 28
3234 Estructura celular 29
3235 Factores de virulencia 30
3236 Haacutebitat 31
324 Fitoterapia 32
3241 Definicioacuten 32
3242 Usos de la fitoterapia 32
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos 33
34 Hipoacutetesis y variables 34
35 Operacionalizacioacuten de variables 35
IV METODOLOGIacuteA 36
41 Tipo de investigacioacuten 36
42 Poblacioacuten y muestra 36
43 Procedimientos y teacutecnicas 37
431 Obtencioacuten del aceite esencial 37
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro 38
44 Procesamiento de datos 45
45 Anaacutelisis de resultados 46
9
V RESULTADOS 47
VI DISCUSIOacuteN 58
VII CONCLUSIONES 60
VIII REFERENCIAS BIBILIOGRAacuteFICAS 61
IX ANEXOS 67
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
6
ABSTRACT
The aim of this study was to determine the antibacterial activity of the essential oil
of Luma chequen (Molina) A Gray myrtle against Streptococcus mutans The
disk-diffusion method in agar was used The strain was reactivated in Trypticase
Soy agar plate (TSA) incubated at 37 degC for 24 hours in microaerophilic 5
colonies were picked and transferred to a test tube with 5 mL of Mueller-Hinton
broth incubated at 37 degC for 6 hours under microaerophilic conditions until a
turbidity equivalent to 05 Mc Farland scale Seeding was performed on 14 plates
with Mueller-Hinton agar by diffusion technique using the essential oil in
concentrations of 10 50 and 100 and the incubation proceeded in
microaerophilic at 37 ordmC for 24 hours Statistical analysis was performed using
STATA Version 12 program Concentrations of 10 50 and 100 had a halo of
inhibition average of 628 788 and 866 mm respectively the mean difference
between these three concentrations showed statistically significant difference
(Plt005) We conclude that the three concentrations of the essential oil of Luma
chequen (Molina) A Gray myrtle exhibit antibacterial activity against
Streptococcus mutans
Keywords Streptococcus mutans myrtle antibacterial activity
7
CONTENIDO
Pag
I INTRODUCCIOacuteN 1
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOacuteN 3
21 Aacuterea problema 3
22 Delimitacioacuten del problema 3
23 Formulacioacuten del problema 4
24 Objetivos de la investigacioacuten 4
241 Objetivo general 4
242 Objetivos especiacuteficos 4
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten 5
26 Limitaciones de la investigacioacuten 5
III MARCO TEOacuteRICO 6
31 Antecedentes 6
32 Bases teoacutericas 11
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo 11
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero 11
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas 12
3213 Distribucioacuten y haacutebitat 15
3214 Usos y propiedades medicinales 15
3215 Aceite esencial y Luma chequen 16
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial 17
322 Clorhexidina 19
8
3221 Descripcioacuten 19
3222 Propiedades 20
3223 Mecanismo de accioacuten 22
3224 Presentaciones 25
323 Streptococcus mutans 27
3231 Clasificacioacuten 27
3232 S mutans y grupo mutans 27
3233 Descripcioacuten 28
3234 Estructura celular 29
3235 Factores de virulencia 30
3236 Haacutebitat 31
324 Fitoterapia 32
3241 Definicioacuten 32
3242 Usos de la fitoterapia 32
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos 33
34 Hipoacutetesis y variables 34
35 Operacionalizacioacuten de variables 35
IV METODOLOGIacuteA 36
41 Tipo de investigacioacuten 36
42 Poblacioacuten y muestra 36
43 Procedimientos y teacutecnicas 37
431 Obtencioacuten del aceite esencial 37
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro 38
44 Procesamiento de datos 45
45 Anaacutelisis de resultados 46
9
V RESULTADOS 47
VI DISCUSIOacuteN 58
VII CONCLUSIONES 60
VIII REFERENCIAS BIBILIOGRAacuteFICAS 61
IX ANEXOS 67
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
7
CONTENIDO
Pag
I INTRODUCCIOacuteN 1
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOacuteN 3
21 Aacuterea problema 3
22 Delimitacioacuten del problema 3
23 Formulacioacuten del problema 4
24 Objetivos de la investigacioacuten 4
241 Objetivo general 4
242 Objetivos especiacuteficos 4
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten 5
26 Limitaciones de la investigacioacuten 5
III MARCO TEOacuteRICO 6
31 Antecedentes 6
32 Bases teoacutericas 11
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayanrdquo 11
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero 11
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas 12
3213 Distribucioacuten y haacutebitat 15
3214 Usos y propiedades medicinales 15
3215 Aceite esencial y Luma chequen 16
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial 17
322 Clorhexidina 19
8
3221 Descripcioacuten 19
3222 Propiedades 20
3223 Mecanismo de accioacuten 22
3224 Presentaciones 25
323 Streptococcus mutans 27
3231 Clasificacioacuten 27
3232 S mutans y grupo mutans 27
3233 Descripcioacuten 28
3234 Estructura celular 29
3235 Factores de virulencia 30
3236 Haacutebitat 31
324 Fitoterapia 32
3241 Definicioacuten 32
3242 Usos de la fitoterapia 32
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos 33
34 Hipoacutetesis y variables 34
35 Operacionalizacioacuten de variables 35
IV METODOLOGIacuteA 36
41 Tipo de investigacioacuten 36
42 Poblacioacuten y muestra 36
43 Procedimientos y teacutecnicas 37
431 Obtencioacuten del aceite esencial 37
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro 38
44 Procesamiento de datos 45
45 Anaacutelisis de resultados 46
9
V RESULTADOS 47
VI DISCUSIOacuteN 58
VII CONCLUSIONES 60
VIII REFERENCIAS BIBILIOGRAacuteFICAS 61
IX ANEXOS 67
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
2 Ramos M Dias R Dantas R Vieira M Nascimiento W Estudo
comparativo in vitro da actividade antibacteriana de productos
fitoteraacutepicos sobre bacterias cariogenicas Odontoped Clin Integr v 4
n 1 p 33-38 janabr 2004
3 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 1381288-1293
4 MINAM (Ministerio del Ambiente) Peruacute paiacutes megadiverso 2009
5 Rocha P Biotecnologiacutea en Plantas Medicinales y Aromaacuteticas En II
Segundo Congreso Internacional de Plantas Medicinales y Aromaacuteticas
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira 2006
6 Lazo W Accioacuten antimicrobiana de algunas plantas de uso medicinal en
Chile Bol Micol 1990 5(12)25-8
7 Labbeacute c Coll J Connolly J Faini F Farrugia L Rycroft D Bioactive
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concentracion-inhibitoria-minima-cim
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
8
3221 Descripcioacuten 19
3222 Propiedades 20
3223 Mecanismo de accioacuten 22
3224 Presentaciones 25
323 Streptococcus mutans 27
3231 Clasificacioacuten 27
3232 S mutans y grupo mutans 27
3233 Descripcioacuten 28
3234 Estructura celular 29
3235 Factores de virulencia 30
3236 Haacutebitat 31
324 Fitoterapia 32
3241 Definicioacuten 32
3242 Usos de la fitoterapia 32
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos 33
34 Hipoacutetesis y variables 34
35 Operacionalizacioacuten de variables 35
IV METODOLOGIacuteA 36
41 Tipo de investigacioacuten 36
42 Poblacioacuten y muestra 36
43 Procedimientos y teacutecnicas 37
431 Obtencioacuten del aceite esencial 37
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro 38
44 Procesamiento de datos 45
45 Anaacutelisis de resultados 46
9
V RESULTADOS 47
VI DISCUSIOacuteN 58
VII CONCLUSIONES 60
VIII REFERENCIAS BIBILIOGRAacuteFICAS 61
IX ANEXOS 67
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
9
V RESULTADOS 47
VI DISCUSIOacuteN 58
VII CONCLUSIONES 60
VIII REFERENCIAS BIBILIOGRAacuteFICAS 61
IX ANEXOS 67
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
10
I INTRODUCCIOacuteN
En la cavidad bucal existe una gran variedad de microorganismos que se
caracterizan por ser extremadamente complejos en geacuteneros y especies
estos son responsables de la gran mayoriacutea de procesos infecciosos
bucales entre ellos caries y enfermedades periodontales La caries dental
es la maacutes frecuente que afecta la denticioacuten temporal y permanente de
nuestra poblacioacuten es una enfermedad multifactorial donde se evidencia la
interaccioacuten de cuatro factores principales hospedero dieta tiempo y
microbiota 1 La formacioacuten de la placa bacteriana ocurre a traveacutes de la
fijacioacuten de bacterias sobre las superficies dentarias Asiacute la placa bacteriana
debido a su caracteriacutestica de agregacioacuten continua va adquiriendo nuevas
especies en cada etapa de su desarrollo Dentro de estos microorganismos
se pueden encontrar S mutans S mitis S sanguis Ssobrinus y Lcasei
2 Siendo el Streptococcus mutans considerado como el microorganismo
maacutes frecuentemente aislado en placa dentobacteriana se trata de
combatirlo encontrando mecanismos para su control a traveacutes del uso de
sustancias antimicrobianas
En los uacuteltimos antildeos el uso de alternativas naturales a traveacutes de hierbas
con propiedades medicinales estaacute siendo estudiado cientiacuteficamente con el
fin de utilizarlos en el tratamiento de afecciones bucales maacutes prevalentes
en nuestra poblacioacuten
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es una especie ampliamente
utilizada en la sierra central y sur de nuestro paiacutes por los pobladores que la
cultivan tradicionalmente por sus muacuteltiples propiedades El presente
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
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41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
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42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
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74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
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46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
11
estudio trata de demostrar cientiacuteficamente las propiedades antibacterianas
que presenta en cavidad oral con el fin de proporcionarle a la poblacioacuten
una alternativa natural econoacutemica y de faacutecil alcance frente a los problemas
de salud oral a los que puedan estar expuestos
II PROBLEMA DE INVESTIGACIOgraveN
21 Aacuterea problema
Las plantas medicinales han acompantildeado la evolucioacuten del hombre e
histoacutericamente han estado ligadas a la forma de cura ancestral Durante
mucho tiempo los productos naturales y sobre todo las plantas
medicinales fueron el principal recurso que disponiacutean los meacutedicos
Esto hizo se profundizase el estudio de las especies vegetales ampliar
sus experiencias y su empleo 3
El Peruacute como paiacutes con amplia biodiversidad alberga gran cantidad de
especies vegetales Posee cerca de 80 mil especies lo que representa
el 10 de la flora total mundial 4 La fitoterapia no ha dejado de tener
vigencia Muchas de las plantas medicinales y los remedios que se
utilizaban antiguamente se siguen usando
22 Delimitacioacuten del problema
En el Peruacute existen muchas especies de plantas con propiedades
medicinales conocidas que son utilizadas comuacutenmente por la
poblacioacuten tambieacuten existe gran cantidad de plantas auacuten no investigadas
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
12
cientiacuteficamente que prueben su actividad farmacoloacutegica en cavidad
oral como Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo del cual existen
estudios que prueban su actividad antimicrobiana pero existen
escasos estudios sobre la actividad antibacteriana en microorganismos
propios de la cavidad bucal
23 Formulacioacuten del problema
iquestExiste actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
24 Objetivos de la investigacioacuten
241 Objetivo general
Determinar la actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a
Streptococcus mutans
242 Objetivos especiacuteficos
Determinar la Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente
a Streptococcus mutans
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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concentracion-inhibitoria-minima-cim
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Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
13
Comparar el efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo a diferentes concentraciones
sobre el crecimiento de Streptococcus mutans
Comparar el grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la Clorhexidina al 012 y al aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
25 Justificacioacuten de la investigacioacuten
En nuestro paiacutes existen muchas comunidades que por su localizacioacuten
presentan dificultades para acceder faacutecilmente a los servicios de salud
tienen a su alrededor variedad de especies vegetales que podriacutean ser
utilizadas medicinalmente conociendo sus propiedades terapeacuteuticas El
uso de plantas medicinales estaacute al alcance de la poblacioacuten de esta
manera resultariacutea accesible tratar las afecciones bucales reduciendo
asiacute las enfermedades cariogeacutenicas en la poblacioacuten de manera
significativa
Se ha descrito que el uso de la biotecnologiacutea permite investigaciones
que contribuyen a la descripcioacuten de nuevos principios activos u otros
compuestos fitoquiacutemicos que serviraacuten como base en la
experimentacioacuten farmacoloacutegica o siacutentesis de nuevos faacutermacos que
ayuden en el tratamiento de muchas enfermedades que aquejan a la
comunidad en general 5
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
14
26 Limitaciones de la investigacioacuten
Escazas investigaciones cientiacuteficas referidas a los beneficios de las
propiedades de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en el
campo odontoloacutegico
La recoleccioacuten de las hojas de la planta se realizaraacute en una eacutepoca
apropiada
III MARCO TEOacuteRICO
31 Antecedentes
Lazo W (1990) realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana
de algunas plantas de uso medicinal en Chile encontroacute que el
desarrollo de Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis fue inhibido por
la decoccioacuten y el extracto de etanol de caacutescara de frutos de Punica
granatum L raiacutez de Geum quellyon Sweet corteza de Quillaja
saponaria Mol la decoccioacuten y el extracto en acetato de etilo de
cotiledones de Lucuma bifera Mol la decoccioacuten y el extracto en etanol
o acetato de etilo de hojas y tallos de Calceolaria thyrsiflora Graham
Sphacele salviae Haplopappus baylahuen Remy y la decoccioacuten y los
extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Mol) A Gray 6
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
15
Labbeacute C y et al (2002) investigaron acerca de los flavonoides
bioactivos de Luma chequen y en un estudio quiacutemico guiado por
bioensayo del extracto metanoacutelico de las hojas frescas de Luma
chequen condujo al aislamiento de lumaflavonoides A(1) B(2) y C(3)
cuyas estructuras son propuestas sobre la base de los datos
espectroscoacutepicos de NMR Los bioensayos mostraron que las
fracciones 1 y 2 presentan mejor actividad fungistaacutetica frente a la cepa
de Botrytis cinerea 7
Carhuapoma M (2006) realizoacute un estudio de la composicioacuten quiacutemica y
actividad antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo una especie nativa con virtudes antiinflamatoria
antimicrobiana y conservante de tejidos pos mortem en la Facultad de
Farmacia y Bioquiacutemica de la UNMSM El objetivo del estudio fue
caracterizar la composicioacuten quiacutemica y determinar la actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen Los resultados
sugieren que el aceite esencial de Luma chequen posee actividad
antioxidante debido a la estructura de sus constituyentes quiacutemicos 8
Carpio A (2008) Realizoacute un estudio preliminar de actividad
antimicrobiana de extractos de plantas contra bacterias de la cavidad
oral en la facultad de odontologiacutea de la UPCH Encontroacute resultados
positivos para 24 extractos de 27 de estas plantas Los extractos con
mayor efecto antimicrobiano corresponden a las especies Momordica
charantia L Piper dumosum Rudge Byrsonima poeppigiana A Juss
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
16
Anacardium occidentale L Psidum guajava L Marcia paivae O Berg
Couroupita guianensis Aubl Vismia angusta Miq y cuatro aceites
esenciales correspondientes a las especies Cymbopogon citratos Staf
Mentha pulegium L y Minthostachys mollis (Kunth) Grises 9
Castro LA (2008) Estudioacute acerca de la composicioacuten quiacutemica del aceite
esencial de las hojas de Erythroxylum novogranatense (Morris) coca
actividad antioxidante y determinacioacuten antibacteriana frente a
Streptococcus mutans sentildealando que Luma chequen mostroacute efecto
antioxidante con aplicacioacuten de tres modelos antioxidantes concluyendo
que las moleacuteculas del aceite esencial actuacutean en sinergismo
potenciando su capacidad antiradicalaria dando una proteccioacuten a las
macro moleacuteculas bioloacutegicas como proteiacutenas liacutepidos aacutecidos nucleicos y
carbohidratos por lo que es usado para tratar afecciones de las viacuteas
respiratorias 10
Gonccedilalves M y et al (2011) Estudiaron la composicioacuten quiacutemica y la
actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de Luma
chequen (Molina) A Gray La actividad antibacteriana y antifuacutengica del
aceite y los tres constituyentes principales (α-pineno 18-cineol y
linalol) se evaluaron contra tres bacterias Gram positivas y dos
bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos filamentosos
por el meacutetodo de difusioacuten en disco Discos con cloranfenicol (30 mg)
ampicilina (10 mg) y nistatina (100 unidades) se utilizaron para
controlar la sensibilidad de los microorganismos ensayados Eacutestos
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
17
fueron Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 Streptococcus faecalis CECT 795
Escherlchia coli ATCC 25922 Proteus vulgaris CECT 484 Candida
albicans CECT 1394 Cryptococcus neoformans CECT 1078
Cladosporium cladosponoides CECT 2111 Aspergillus niger CECT
2574 y Aspergillus fumigatus CECT 2071 Todos los experimentos se
llevaron a cabo por triplicado la media y desviacioacuten estaacutendar se
calcularon para los diaacutemetros de la zona de inhibicioacuten La prueba de
difusioacuten en disco utilizada mostroacute que el aceite de L chequen era
activo contra todos los microorganismos ensayados excepto
Staphylococcus epidermidis Streptococcus faecalis y Aspergillus niger
Sin embargo el aceite resultoacute ser significativamente maacutes activa contra
Proteus vulgaris Staphylococcus aureus Cryptococcus neoformans y
Cladosporium cladosporioides La actividad antimicrobiana de los tres
constituyentes principales del aceite tambieacuten se ensayaron contra las
mismas cepas La actividad del aceite esencial puede estar asociada
con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y linalol La
actividad antimicrobiana del aceite esencial tambieacuten se determinoacute
usando la teacutecnica de dilucioacuten mediante la medicioacuten de la concentracioacuten
inhibitoria miacutenima (CIM) frente a Escherichia coli Proteus vulgaris
Staphylococcus aureus Candida albicans Cryptococcus neoformans
Cladosporium cladosporioides y Aspergillus fumigatus El aceite
esencial mostroacute actividad significativa frente a Proteus vulgaris
Cryptococcus neoformans y Cladosporium cladosporioides con valores
de CIM que oscilan desde 045 hasta 167 l ml 11
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
18
Simirgiotis M y et al (2013) Estudiaron la capacidad antioxidante el
contenido de polifenoles y los perfiles HPLC-DAD-ESIMS de
compuestos fenoacutelicos de bayas sudamericanas de Luma apiculata y
Luma chequen encontrando 12 compuestos fenoacutelicos en frutos de L
apiculata y 12 en las partes aeacutereas mientras que L chequen produjo
10 compuestos en los frutos y 16 en las partes aeacutereas Toda la baya y
extractos de las partes aeacutereas presentan alta capacidad antioxidante en
el ensayo de DPPH (IC50 de 1041+-002 y 244+-003gml para L
apiculata 1289+-005 y 322+-005 para L chequen) que puede estar
relacionado con el rango diverso de compuestos fenoacutelicos detectados
La capacidad antioxidante junto con los altos contenidos polifenoacutelicos y
compuestos identificados puede apoyar al menos en parte su uso
como medicamentos botaacutenico 12
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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concentracion-inhibitoria-minima-cim
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concentracion-minima-bactericida-cmb
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Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
19
32 Bases teoacutericas
321 Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
3211 Clasificacioacuten sisteacutemica y variedades del geacutenero
Seguacuten el sistema de clasificacioacuten de A Cronquist (1981)
determinados por Beltraacuten SH y Soria LR se ubica en la
siguiente categoriacutea taxonoacutemica 13
DIVISIOacuteN Magnoliophyta
CLASE Magnoliopsida
SUBCLASE Rosidae
ORDEN Myrtales
FAMILIA MYRTACEAE
GEacuteNERO Luma
ESPECIE Luma chequen (Molina) AGray
SINONIMIA VULGAR ldquoArrayaacutenrdquo ldquoWallpumardquo ldquoRayaacuten
castillardquo y ldquoLumardquo
SINONIMIA CIENTIacuteFICA Eugenia bella de Luma chequen
Eugenia chequen de Luma chequen Eugenia gayana de
Luma chequen Eugenia myrtomimeta de Luma chequen
Eugenia pulchra de Luma chequen Luma gayana de Luma
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
20
chequen Myrceugenella chequen de Luma chequen
Myrceugenella chequen var myrtomimeta de Luma
chequen Myrceugenella gayana de Luma chequen
Myrceugenella langerfeldtii de Luma chequen Myrtus
chequen de Luma chequen Myrtus gayana de Luma
chequen Myrtus uliginosa de Luma chequen Myrtus
uliginosa var f major de Luma chequen 14
3212 Descripcioacuten y caracteriacutesticas morfoloacutegicas
Arbusto que puede llegar a medir entre los 5 a 6m de altura
y alcanza una cobertura de 5m de diaacutemetro Es coposo
con follaje denso y siempre verde La copa es globosa y va
desde el primer o segundo tercio La corteza externa es lisa
de color marroacuten claro la corteza interna es de color
blanquecino con olor tenue y agradable Las hojas son
simples opuestas y decusadas Las laacuteminas son eliacutepticas
de 05 a 25 cm de longitud y 03 a 15 cm de ancho con el
aacutepice agudo el borde entero y la base obtusa Los peciolos
son muy cortos de 1 a 2 mm de longitud Las hojas son
lisas y tienen un olor agradable al ser estrujadas Las flores
son blancas solitarias axilares hermafroditas
actinomorfas y tetraacutemeras son de mediano tamantildeo de 1 a
2 cm de longitud presentan numerosos estambres libres de
7 mm de longitud y pistilo muy pequentildeo Los frutos son
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
21
globosos rojizos con pocas semillas y escaso endosperma
81516
Figura 1 Luma chequen a Rama con frutos b Flor c Antera d Caacuteliz y pistilo 16
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
22
Figura 2 Arbusto de Luma chequen 8
Figura 3 Ramas y hojas de Luma chequen 8
Figura 4 Flor de Luma chequen 8
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
23
3213 Distribucioacuten y haacutebitat
Se encuentra en los andes de Sudameacuterica central entre
Peruacute Bolivia y Chile Crece desde los 2500 a 4000
msnm En el Peruacute se distribuye en la sierra central y sur
del paiacutes puede encontrarse en departamentos como
Ancash Cerro de Pasco Lima Juniacuten Ayacucho y Cusco
con predileccioacuten hacia el sur Se desarrolla en terrenos con
humedad del subsuelo y a orillas de los riacuteos 813
3214 Usos y Propiedades medicinales
Dentro de las propiedades medicinales se puede
mencionar que las hojas y meristemas apicales del tallo de
Luma chequen son usadas por las comunidades locales
para los tratamientos de tos odontalgia desordenes
gastrointestinales e infecciones pos parto 11
Tambieacuten en estudios etnobotaacutenicos se mencionan sus
propiedades antireumaacutetica antidiarreico antiseacuteptico
astringente balsaacutemico hemostaacutetico vasoconstrictor
antineuraacutelgico antiinflamatorio y analgeacutesico 17
En el departamento de Arequipa las ramas se utilizan para
realizar bantildeos en casos de ldquomal de airerdquo y despueacutes del
parto 18
Figura 5 Fruto de Luma chequen 15
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
24
Se encontroacute tambieacuten que las hojas aromaacuteticas son usadas
en forma de infusioacuten debido a sus propiedades
carminativas 19
En algunos pueblos del departamento de Ayacucho las
hojas y ramas joacutevenes son usadas en forma de coccioacuten
llamaacutendola ldquoagua de arrayaacutenrdquo para evitar la putrefaccioacuten de
tejidos pos morten conservaacutendolos por muchos antildeos 81314
Ademaacutes la madera de esta especie es dura y durable
aunque no alcanza diaacutemetros grandes se le utiliza para la
elaboracioacuten de utensilios y herramientas agriacutecolas La lentildea
y el carboacuten son de excelente calidad El follaje es empleado
como aromatizante y saborizante en la cocina y como
condimento en la preparacioacuten de embutidos 13
3215 Aceite esencial y Luma chequen
Los aceites esenciales son el resultado de la mescla de
varias sustancias quiacutemicas biosintetizadas por las plantas
Constituyen la fraccioacuten liacutequida volaacutetil generalmente
destilable por arrastre con vapor de agua que contienen
sustancias responsables del aroma de las plantas y que
son responsables en la industria cosmeacutetica (perfumes y
aromatizantes) de alimentos (condimentos y saborizantes)
y farmaceacuteutica Tras su produccioacuten a partir de tejidos
secretores se almacenan en distintos oacuterganos de la planta
en su gran mayoriacutea son de olor agradable 2021
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
25
Los aceites esenciales se clasifican seguacuten su consistencia
(esencias fluidas baacutelsamos y oleorresinas) seguacuten su
origen (naturales artificiales y sinteacuteticas) y seguacuten la clase
quiacutemica de componentes principales (monoterpenoides
sesquiterpenoides fenilpropanoides) 20
3216 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
El aceite esencial de Luma chequen presenta los
siguientes constituyentes
Tabla 1 Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de Luma chequen 8
CONSTITUYENTES
RI1
RI2
METODOS DE
IDENTIFICACION
2-metilbutirato de etilo
01 152 121 RI1 RI2 CG-MS
Isobutirato de isobutilo 11 195 137 GC-MS
13C-NMR
α-tuyona 03 208 - RI1 GC-MS
α-pineno 573 215 113 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Canfeno 02 219 126 RI1 RI2 GC-MS
β-pineno 62 231 147 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Isobutirato de 2-metilbutilo 17 247 - GC-MS
13C-NMR
p-cimeno 09 251 238 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
18-cineol 75 256 209 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Limoneno 38 251 204 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de cis-linalol 02 273 322 RI1 RI2 GC-MS
Oacutexido de trans-linalol 02 281 336 RI1 RI2 GC-MS
Linalol 37 289 377 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
26
Fenchol 02 293 391 RI1 RI2 GC-MS
Camfolenal 04 296 345 RI1 RI2 GC-MS
Trans-Pinocarveol 07 306 424 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Verbenol 22 310 437 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Pinocarvona 04 313 380 RI1 RI2 GC-MS
Bomeol 03 319 447 RI1 RI2 GC-MS
Terpinen-4-ol 02 325 398 RI1 RI2 GC-MS
Mirtenal 04 329 409 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-terpineol 06 332 446 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Myrtenol 06 335 490 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Verbenona 09 337 451 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Trans-Carveol 03 345 512 RI1 RI2 GC-MS
Isobutirato de bencilo 01 379 486 RI1 RI2 GC-MS
β-elemeno tr 437 394 RI1 RI2 GC-MS
β-selineno 13 483 454 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
α-selineno 04 488 456 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Oacutexido de β-cariofileno 09 527 577 RI1 RI2 GC-MS
13C-NMR
Viridiflorol 01 533 627 RI1 RI2 GC-MS
Cubenol 01 549 619 RI1 RI2 GC-MS
Myrceno tr - 180 RI2 GC-MS
Isobutirato de cis-3-hexenilo tr - 298 RI2 GC-MS
α-p-dimetilestireno tr - 320 RI2 GC-MS
Mentona tr - 334 RI2 GC-MS
allo-aromadendreno 01 - 417 RI2 GC-MS
Pulegona tr - 418 RI2 GC-MS
Geraniol tr - 517 RI2 GC-MS
p-cimen-8-ol 01 - 519 RI2 GC-MS
Total de identificacioacuten 936
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
27
322 Clorhexidina
3221 Descripcioacuten
La clorhexidina es una moleacutecula bicatioacutenica simeacutetrica es un
diacutemero proguanil por lo que se dice que es una bisguanida
conectada por una cadena central hexametileno En cada
extremo se enlaza un radical paraclorofenil (2 anillos 4
clorofenil) resultando su nombre completo
paraclorofenilbiguanida 2223
Figura 6 Estructura de la Clorhexidina 24
Este compuesto es una base fuerte dicatioacutenica a pH
superior a 35 con dos cargas positivas en cada extremo
del puente hexametileno Es esta naturaleza dicatioacutenica
que la hace extremadamente interactiva con los aniones lo
Leyenda
Tr Trazas le 005
IR1 Iacutendice de retencioacuten en metilsilicona SE-30
IR2 Iacutendice de retencioacuten en Supelcowax
TM10
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
28
que es relevante para su eficacia seguridad efectos
secundarios colaterales y dificultad para formularla en
productos Aunque es una base la clorhexidina se
mantiene maacutes estable en forma de sal y la preparacioacuten maacutes
comuacuten es la sal de digluconato por su alta solubilidad en
agua 23
Clorhexidina fue desarrollada en la deacutecada de los 40 por
Imperial Chemical Industries en Inglaterra por cientiacuteficos
que realizaban estudios sobre la malaria Los
investigadores fueron capaces de desarrollar compuestos
denominados polibiguanidas que demostraron tener
amplio espectro antibacteriano salioacute al mercado en 1954
como antiseacuteptico para heridas de la piel posteriormente se
usoacute en medicina y cirugiacutea En odontologiacutea se utilizoacute
inicialmente como antiseacuteptico bucal y en tratamientos de
endodoncia El estudio definitivo que introdujo la
clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado
por Loumle y Schiott en 1970 demostrando que un enjuague
de 60 segundos dos veces al diacutea con solucioacuten de gluconato
de clorhexidina al 02 en ausencia de cepillado normal
inhibiacutea la formacioacuten de placa y consecuentemente
desarrollo de gingivitis 222325-27
3222 Propiedades
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
29
Clorhexidina es un eficaz antiseacuteptico de amplio espectro
frente a microorganismos de la placa bacteriana Su accioacuten
es raacutepida y mantiene su efecto durante largo periacuteodo
liberaacutendose en forma gradual por difusioacuten en la
cavidad oral hasta por 24 horas seguacuten vaya
disminuyendo la concentracioacuten de clorhexidina en la
saliva evitando asiacute la posible recolonizacioacuten bacteriana en
cavidad oral Debido a su carga positiva se adsorbe
durante el enjuague oral en la superficie de los
dientes placa y mucosa oral que tienen una carga
neta negativa formando un sistema de liberacioacuten
sostenida La Clorhexidina actuacutea a distintos niveles Elimina
la estructura de la placa bacteriana existente inhibe la
adhesioacuten de proteiacutenas muco-salivares inhibe la formacioacuten
de nueva placa bacteriana y destruye microorganismos
responsables de formacioacuten de placa dental En bajas
concentraciones es bacteriostaacutetica y en las elevadas
es bactericida La baja absorcioacuten de clorhexidina es un
factor en su baja toxicidad Se metaboliza en el organismo
absorbieacutendose deacutebilmente por la mucosa del tracto
digestivo eliminaacutendose por las heces el 90 del faacutermaco
absorbido y el resto lo hace por orina No se acumula en el
organismo ni se metaboliza en sustancias lesivas 2226
La clorhexidina se usa en la mayoriacutea de casos para
tratamiento de enfermedades periodontales al actuar como
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
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antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
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50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
30
agente bacteriostaacutetico o bactericida actuando sobre
bacterias cariogeacutenicas La clorhexidina es el agente
antimicrobiano bucal maacutes usado efectivo e investigado en
eliminar o disminuir el Streptococos mutans en procesos
dependientes de este microorganismo 28
La clorhexidina 012 presenta efecto inhibidor significativo
en la actividad de las enzimas proteoliacuteticas que generan
caries dentinaria 29
Investigaciones realizadas muestran que la inhibicioacuten
importante del crecimiento de Streptococcus mutans y la
incapacidad siguiente de crecer como placa bacteriana en
presencia de sacarosa ocurriacutea despueacutes de un reacutegimen de
exposicioacuten escalonado a clorhexidina inicialmente y luego a
xilitol 30
Se ha reportado tambieacuten que los barnices de clorhexidina
son capaces de reducir los niveles de Streptococcus
mutans Porphyromonas gingivalis y la gingivitis mejorando
la salud oral del paciente 31
3223 Mecanismo de accioacuten
Clorhexidina se une fuertemente a la membrana celular
bacteriana lo que a bajas concentraciones produce
aumento de la permeabilidad con filtracioacuten de componentes
intracelulares incluido el potasio (efecto bacteriostaacutetico) En
concentraciones altas produce precipitacioacuten del citoplasma
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
31
bacteriano y muerte celular (efecto bactericida) En boca se
adsorbe raacutepidamente a las superficies de contacto
incluidos los dientes con peliacutecula adquirida proteiacutenas
salivales y a la hidroxiapatita Los depoacutesitos de clorhexidina
se forman por la interaccioacuten reversible de la moleacutecula de
clorhexidina con grupos fosfato sulfato y carboxilo de los
tejidos blandos y duros La clorhexidina adsorbida se libera
gradualmente en 8-12 horas en su forma activa Despueacutes
de 24 horas auacuten pueden recuperarse concentraciones
bajas de clorhexidina lo que evita la colonizacioacuten
bacteriana durante ese tiempo Su pH oacuteptimo se encuentra
entre 55 y 70 en funcioacuten de eacuteste ejerce su accioacuten frente a
diferentes bacterias Con un pH entre 50 y 80 es activa
frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas Los
estreptococos orales transportan azuacutecares a traveacutes del
sistema fosfoenolpiruvato fosfotransferasa La clorhexidina
incluso en baja concentracioacuten inhibe este sistema esto
podriacutea explicar el hecho de que a bajas concentraciones
clorhexidina puede reducir la produccioacuten de aacutecido a partir
de glucosa por estreptococos orales sin afectar su
viabilidad celular 22-25
La clorhexidina previene la formacioacuten de placa por medio
de los siguientes pasos
a) Bloquea grupos de aacutecidos libres de las glicoproteiacutenas
salivales (mucinas) que forman la peliacutecula adquirida
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
32
que permitiraacute la formacioacuten de placa bacteriana siendo
eacutesta su primera capa no permitiendo la formacioacuten de la
misma
b) La carga ioacutenica positiva de la clorhexidina atrae a la
superficie microbiana de carga negativa para lo que
contribuye el pH del medio que es neutro o baacutesico
permitiendo a los microorganismos unirse a las
moleacuteculas de clorhexidina y no se adhieran a la peliacutecula
adquirida La clorhexidina actuacutea sobre la membrana de
microorganismos produciendo cambios electroforeacuteticos
que actuacutean sobre las bacterias produciendo
precipitacioacuten de iones potasio y fosfato A mayor
concentracioacuten de clorhexidina se produce una
precipitacioacuten plasmaacutetica de los microorganismos
causaacutendoles la muerte lo que le confiere efecto
bactericida
c) La clorhexidina tambieacuten destruye la placa formada al
competir con el ioacuten calcio factor coadyuvante de la
formacioacuten y crecimiento de placa bacteriana que actuacutea
como moleacutecula de enlace que permite a las bacterias
fijarse a la peliacutecula adquirida sin impedimentos Cuando
la clorhexidina se une al ioacuten calcio impide la unioacuten del
mismo a las bacterias
d) A altas concentraciones la clorhexidina produce tras
unirse a la pared bacteriana cambios electroforeacuteticos
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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concentracion-inhibitoria-minima-cim
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
33
que causan precipitacioacuten citoplasmaacutetica que conlleva la
muerte celular 23
3224 Presentaciones
La clorhexidina se puede encontrar en diversas
presentaciones asiacute tenemos
a) Colutorios es la maacutes utilizada su forma de
presentacioacuten comuacuten es en solucioacuten al 012 para
enjuagues de 15 ml durante 30 segundos y al 02
para enjuagues de 10 ml
b) Dentiacutefricos es difiacutecil formular la clorhexidina en una
pasta dental
c) Geles en comparacioacuten con el colutorio el gel muestra
mayor control en la inflamacioacuten gingival debido a mayor
adherencia a la superficie dental y mucosa su uso no
soacutelo se justificariacutea en el control de enfermedad
periodontal sino tambieacuten como antiseacuteptico de accioacuten
localizada
d) Barnices El barniz de clorhexidina presenta eficacia
probada en la reduccioacuten de Streptococcus mutans
Ademaacutes se reducen los efectos secundarios como
alteraciones del gusto y el sabor amargo asiacute como la
ausencia de lesiones mucosas al centildeirse la aplicacioacuten a
la superficie dentaria disminuyendo el contacto con
superficies mucosas
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
34
e) Aerosoles Presentacioacuten maacutes usada en pacientes con
discapacidad fiacutesica y psiacutequica por la comodidad de
aplicacioacuten por parte de familiares
f) Irrigaciones Con irrigaciones pulsaacutetiles al 006 soacutelo
se obtienen resultados transitorios con ventaja de ser
agradable para el paciente La irrigacioacuten del surco
gingival con agua reduce el nuacutemero de
microorganismos al adicionar agentes antimicrobianos
se consigue disminuir auacuten maacutes el nuacutemero de
microorganismos
g) Chicles con clorhexidina se ha demostrado su
eficacia consiguiendo reduccioacuten significativamente
mayor de iacutendices de placa y gingivitis que los chicles
placebo y similares resultados a 2 enjuagues diarios
con clorhexidina A demaacutes los chicles presentan
ventaja de producir menor tincioacuten en dientes y
superficies orales 23
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
35
323 Streptococcus mutans
3231 Clasificacioacuten
Esta especie bacteriana presenta la siguiente clasificacioacuten
taxonoacutemica 32
DOMINIO Bacterias
PHYLIUM Firmicutes
CLASE Bacilli
ORDEN Lactobacillales
FAMILIA Streptococcaceae
GEacuteNERO Streptococcus
ESPECIE Streptococcus mutans
3232 S mutans y Grupo Mutans
La especie Streptococcus mutans se ubica dentro de un
conjunto de bacterias denominado ldquoGrupo Mutansrdquo los
cuales presentan diversidad geneacutetica antigeacutenica y
bioquiacutemica tambieacuten comparten rasgos fenotiacutepicos como
fermentacioacuten del manitol y sorbitol produccioacuten de glucanos
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
36
extracelulares a partir de sacarosa ciertos morfotipos
coloniales al ser cultivados en agar con sacarosa y la
induccioacuten de caries a partir del consumo de carbohidratos
(sobre todo sacarosa) por parte del hueacutesped 33
El grupo mutans estaacute conformado por las siguientes
especies S mutans S sobrinus S cricetus S rattus S
downei S macacae y S ferus La primera diferenciacioacuten
de las distintas cepas se efectuoacute a partir de su perfil de
produccioacuten de bacteriocinas posteriormente se encontroacute
que existiacutean ocho grupos seroloacutegicos en las especies del
grupo mutans Los dos grandes subgrupos presentan
respectivamente los serotipos cef (correspondiente a S
mutans) y dg (S sobrinus) Las especies del grupo mutans
predominantes en la boca de la mayoriacutea de los sujetos
corresponden al S mutans mientras que el S sobrinus
aparece en menos individuos y en cantidades menores34
El Streptococcus mutans presenta el serotipo c que es el
maacutes frecuente en la colonizacioacuten inicial que se produce en
funcioacuten de caracteriacutesticas particulares de la saliva de cada
individuo 3536
3233 Descripcioacuten
S mutans es un coco Gram positivo que se dispone en
pares o cadenas cortas es anaerobio o aerobio facultativo
ya que para desarrollarse necesita medios enriquecidos y
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
37
ambientes de microaerofilia o anaerobiosis con una
tensioacuten de CO2 al 10 Posee los polisacaacuteridos antigeacutenicos
definidos para los serotipos c e y f siendo el serotipo c el
maacutes predominante de la cavidad oral en humanos 37-39
3234 Estructura celular
El Streptococcus mutans tiene una pared celular gruesa
eacutesta se compone de peptidoglicano (mureiacutena) y aacutecidos
teicoicos que impiden la lisis osmoacutetica del protoplasto
celular y le confieren rigidez y forma Presenta proteiacutenas
fijadoras de glucanos que intervendriacutean en la adhesioacuten a la
peliacutecula adquirida cuando en ella existen glucanos
adsorbidos y en los procesos de agregacioacuten bacteriana
Posee proteiacutenas parietales superficiales que pueden
liberarse al medio en el curso de crecimiento bacteriano y
se comportan como adhesinas son conocidas como
antiacutegenos III y mediriacutean la adhesioacuten a la peliacutecula adquirida
en ausencia de glucanos en su superficie y la coagregacioacuten
con otras bacterias El papel que desempentildean sus fimbrias
y aacutecidos lipoteicoicos en los procesos de adhesioacuten a tejidos
del hospedador y en los de agregacioacuten bacteriana es
controvertida El S mutans se compone de ADN circular y
tiene por lo menos tres estrechamente relacionados pero
diferentes plaacutesmidos El tamantildeo de estos plaacutesmidos son
similares de aproximadamente 56 kilobases (kb) Estos
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
38
son importantes para S mutans debido a sus funciones
incluyendo la resistencia a ciertos antibioacuteticos o metales
pesados la produccioacuten de bacteriocina y la inmunidad las
viacuteas cataboacutelicas de accesorios y los mecanismos para la
conjugacioacuten como las actividades de transferencia 3740
3235 Factores de virulencia
Los factores de virulencia son los que promueven la
colonizacioacuten e invasioacuten en tejidos haciendo que las
bacterias alcancen altos niveles de poblacioacuten antes que se
vean limitadas por la respuesta del hospedero En el caso
del S mutans tenemos los siguientes 4142
o Acidogenicidad S mutans es capaz de fermentar
diversos azuacutecares particularmente manitol y sorbitol En
medios ricos en carbohidratos se genera aacutecido laacutectico
como producto final del metabolismo el cual se ha
asociado con el origen de caries
o Aciduricidad es la tolerancia al aacutecido que le permite
mantener una capacidad glicoliacutetica a niveles bajos de pH
(pH 44) donde el crecimiento de otras especies estaacute
inhibido
o Acidofilicidad S mutans puede resistir la acidez del
medio bombeando protones (H+) fuera de la ceacutelula
o Siacutentesis de polisacaacuteridos extracelulares A partir de la
fermentacioacuten de hidratos de carbono principalmente de
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
39
la sacarosa el S mutans puede sintetizar polisacaacuteridos
extra celulares como glucanos (dextraacuten y levaacuten) y
fructanos que promueven la adherencia selectiva y
acumulacioacuten de un amplio nuacutemero de estreptococos
cariogeacutenicos en los dientes ademaacutes de aumentar la
porosidad y dimensioacuten de la matriz de la placa dental
Esto permite una mayor difusioacuten de sustrato a traveacutes de
la superficie del esmalte se produce un descenso de los
valores de pH en capas maacutes profundas de la placa y se
favorece el desarrollo de la caries
o Siacutentesis de polisacaacuteridos intracelulares como el
glucoacutegeno que puede ser degradado por dextranasas
fructanasas y glucoacutegenofosforilasas Sirve como reserva
alimenticia y mantiene la produccioacuten de aacutecido durante
largos periodos auacuten en ausencia de consumo de azuacutecar
3236 Haacutebitat
El principal hospedador del S mutans es la boca del
hombre puede desarrollarse en temperaturas que van
desde 18 a 40 ordmC Coloniza especialmente las superficies
duras de la cavidad oral (esmalte o cemento) se han
obtenido tambieacuten aislamientos a partir de heces humanas
El S mutans induce lesiones cariosas tanto de superficies
lisas de fosas y fisuras como en zonas interproximales y
cemento radicular A nivel extraoral el S mutans estaacute
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
40
relacionado con endocarditis subagudas y raramente con
otros procesos patoloacutegicos 37
324 Fitoterapia
3241 Definicioacuten
Ciencia que estudia el uso de los productos de origen
vegetal con finalidad preventiva y de tratamiento 43
3242 Usos de la Fitoterapia
El uso de la fitoterapia se ha dado desde eacutepocas muy
antiguas el hombre ha buscado distintos remedios para
aliviar sus padecimientos los primeros remedios que
usaron debido a su variedad abundancia y muacuteltiples
propiedades fueron las plantas
En la actualidad Aproximadamente el 80 de la poblacioacuten
de la mayor parte de paiacuteses en desarrollo todaviacutea usan la
medicina tradicional derivada de plantas para tratar
enfermedades en humanos Paiacuteses como China Cuba Sri-
Lanka Tailandia y otros han inscrito oficialmente en sus
programas de salud el uso de la medicina tradicional por
ejemplo la homeopatiacutea que depende de material vegetal o
sus derivados para tratar dolencias en humanos 44
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
41
La fitoterapia actual se considera una terapeacuteutica suave no
agresiva que utiliza principalmente productos con actividad
moderada con maacutergenes terapeacuteuticos relativamente
amplios se considera especialmente uacutetil en el tratamiento
de afecciones leves o moderadas y afecciones croacutenicas 43
La Organizacioacuten Mundial de la Salud reconoce la
importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y
prevencioacuten de muacuteltiples enfermedades como tambieacuten la
relevancia a nivel econoacutemico al ser una fuente de
descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos
tiene costo inferior a la siacutentesis de nuevos faacutermacos El
intereacutes cientiacutefico sobre plantas medicinales investigando su
riqueza y variabilidad quiacutemica ha impulsado la
revalorizacioacuten de su empleo en muchas partes del mundo
representando una forma complementaria de curar el
empirismo de la terapia queda atraacutes en funcioacuten de la
evidencia cientiacutefica armonizando la medicina tradicional
con las terapias de cada paiacutes 45
33 Definicioacuten de teacuterminos baacutesicos
Actividad Antibacteriana La actividad antimicrobiana se define
como la capacidad de matar inhibir yo inactivar microorganismos
impedir su proliferacioacuten yo impedir su accioacuten patoacutegena 46
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
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_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
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Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
42
Concentracioacuten Inhibitoria Miacutenima (CIM) Es la menor
concentracioacuten de antibioacutetico capaz de inhibir el crecimiento de 105
bacterias en 1 mL de medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten
Se clasifica la sensibilidad de un germen frente a un antibioacutetico en
funcioacuten de su CMI 47
Concentracioacuten Miacutenima Bactericida (CMB) Es la menor
concentracioacuten capaz de destruir o matar 105 bacterias en 1 mL de
medio de cultivo tras 18-24 h de incubacioacuten 48
34 Hipoacutetesis y variables
Hipoacutetesis
ldquoExiste actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de
Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus
mutansrdquo
Variables
- Variables del Estudio
o Variable Independiente Aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones
o Variable Dependiente Actividad antimicrobiana (mediante los
halos de inhibicioacuten frente a la cepa Streptococus mutans)
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
43
35 Operacionalizacioacuten de variables
VARIABLE
CONCEPTUALI
ZACIOacuteN
DIMENSIONES
INDICADORES
ESCALA
CATEGORIacuteA
Actividad
antibacteriana
frente a
Streptococcus
mutans
Capacidad de
ciertas
sustancias
quiacutemicas
producidas por
un ser vivo o
derivadas
sinteacuteticamente
de eacutel que matan
o impiden el
crecimiento de
bacterias
sensibles a
ellas
Concentracioacuten
Miacutenima
Inhibitoria
Efecto en 10
Nominal
Siacute
No
Efecto en 50
Nominal
Siacute
No
Efecto en 100
Nominal
Siacute
No
Grado de
Sensibilidad del
Streptococcus
mutans frente al
Aceite esencial
de Luma
chequen
Diaacutemetro de los
Halos de
Inhibicioacuten (mm)
Intervalo
6mm = R
gt6mm = S
Aceite
Esencial de
Luma
chequen
(Molina) A
Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en
diferentes
concentracio_
nes
Mezcla de
sustancias
quiacutemicas
biosintetizadas
por la planta que
contiene
fracciones
liacutequidas
volaacutetiles
generalmente
destilables por
arrastre con
vapor de agua
importantes en
la industria
cosmeacutetica
alimentaria y
farmacoloacutegica
------
Concentracioacuten
del Aceite
Esencial de
Luma chequen
Ordinal
10
50
100
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
44
IV METODOLOGIacuteA
41 Tipo de investigacioacuten
El anaacutelisis del estudio pertenece al tipo
Experimental porque el investigador controla la accioacuten de una
variable sobre otra
Prospectivo debido a que el registro de la informacioacuten se
realizaraacute despueacutes de efectuado el experimento
Transversal porque la informacioacuten se obtendraacute en un soacutelo
momento
In vitro porque el estudio se realizaraacute dentro de un laboratorio
42 Poblacioacuten y muestra
Se trabajoacute con cepas estaacutendares de Streptococcus mutans
provenientes de American Type Culture Collection (ATCC) 25175 de
las cuales se seleccionaron 5 colonias que cumplieron con las
condiciones de estar bien aisladas y ser del mismo tipo morfoloacutegico y
con aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo el
cual se obtuvo en el Centro de Investigacioacuten de Plantas Medicinales
Aromaacuteticas y Medicina Tradicional CIPLANT
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
45
43 Procedimientos y teacutecnicas
431 Obtencioacuten del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo
El material de hojas se tratoacute por hidrodestilacioacuten (HD) con arrastre
de vapor de agua Las ventajas son su simplicidad bajo costo y el
hecho de maniobrar grandes voluacutemenes de materia prima Este
meacutetodo se fundamenta en que los aceites esenciales son
arrastrados por la corriente de vapor de agua que se genera en la
fuente de vapor luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) es
condensada en un refrigerante de vidrio se separa el aceite del
agua por simple diferencia de densidades
Aproximadamente de 5 Kg de hojas secas de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo de la muestra seca fueron sometidas a
extraccioacuten por el meacutetodo de arrastre por vapor de agua Una vez
destilado se separoacute por diferencia de densidades utilizando una
pera de decantacioacuten se deshidratoacute con sulfato de sodio anhidro se
filtroacute y este filtrado fue el aceite esencial puro se guardoacute en frasco
de vidrio de color aacutembar bajo refrigeracioacuten
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
46
432 Determinacioacuten de la actividad antibacteriana in vitro del
aceite esencial frente a Streptococcus mutans
Meacutetodo de Disco - Difusioacuten en Agar Fundamento 49
Este meacutetodo representa la prueba de susceptibilidad maacutes
utilizada en bacteriologiacutea cliacutenica permite obtener resultados
exactos mediante un procedimiento estandarizado sencillo de
ejecucioacuten raacutepida econoacutemico y reproducible Se utiliza en el
estudio de la inhibicioacuten del crecimiento bacteriano mediante la
difusioacuten de las sustancias activas en un medio soacutelido la que se
evidencia con la formacioacuten de halos de inhibicioacuten
Microorganismo
Bacteria Gram Positiva Streptococcus mutans ATTC 25175
Control Positivo
Clorhexidina al 012
Control Negativo
Dimetil sulfoacutexido AR (DMSO)
Muestra
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
47
Aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en
concentraciones de 100 50 y 10 por ciento Utilizaacutendose como
diluyente el Dimetil sulfoacutexido AR
Reconstitucioacuten de la cepa (Inoacuteculo) 49
A partir del cultivo puro del Streptococcus mutans con un
desarrollo de 24 horas en placa de Tripticasa Soya Agar
(TSA) se seleccionaron 5 colonias bien aisladas y del
mismo tipo morfoloacutegico
Se tomaron 5 colonias seleccionadas con un asa de
siembra esteacuteril y se transfirieron a un tubo de ensayo que
conteniacutea 5 mL de caldo Muumlller-Hinton
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
48
Se incuboacute el caldo a una temperatura entre 37 degC por 6
horas en microaerofilia hasta obtener una turbidez final
equivalente al 05 de la escala de Mc Farland que
corresponde a 108 UFCmL
Sembrado de la cepa en Agar 49
La cepa reconstituida se sembroacute en 14 placas petri que
conteniacutean Agar Muumlller-Hinton con la teacutecnica de difusioacuten de la
siguiente manera
Se sumergioacute un hisopo de algodoacuten esteacuteril en el inoacuteculo se
rotoacute el hisopo varias veces presionando firmemente sobre
la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido
para remover el exceso del inoacuteculo
Se inoculoacute la superficie seca de la placa de Muumlller-Hinton
estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar
una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo sobre la placa
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
49
Se dejoacute secar la placa a temperatura ambiente durante 3
a 5 minutos para que cualquier exceso de humedad
superficial sea absorbido
Dilucioacuten del Aceite esencial
El aceite esencial puro se diluyoacute con Dimetil sulfoacutexido AR en
tubos de ensayo de tal forma que se obtuvieron tres
concentraciones correspondientes a 100 50 y 10
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
50
Discos de papel
Los discos de papel tuvieron un diaacutemetro de 6mm y un espesor
de 002mm
Inoculacioacuten de la muestra
Los discos de papel fueron enumerados del 1 al 5 y utilizando
una micropipeta se procededioacute de la siguiente manera
Disco 1 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 100
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
51
Disco 2 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 50
Disco 3 se inoculoacute 10uL del aceite esencial al 10
Disco 4 se inoculoacute 10uL de Clorhexidina al 012
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
52
Disco 5 se inoculoacute 10uL de Dimetil sulfoacutexido AR
Luego se colocaron cada uno de los discos sobre la superficie
del agar con la ayuda de una pinza esteacuteril presionando
suavemente sobre cada disco para asegurar un contacto
completo con la superficie del agar Los discos estuvieron a una
distancia miacutenima de 25mm uno del otro
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
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Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
53
Incubacioacuten de la muestra
Se cubrieron las placas petri se colocaron en la incubadora en
posicioacuten invertida y se procedioacute a incubacioacuten en un ambiente de
microaerofilia a 37 ordmC por 24 horas
44 Procesamiento de datos
La accioacuten antibacteriana del aceite esencial fue cuantificada en
miliacutemetros midiendo los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten
completa (incluyendo el diaacutemetro de los discos) utilizando un
calibrador digital
Se mantuvo iluminada la parte posterior de la placa petri con una
luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un
fondo negro
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
54
Los diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten obtenidos de cada una
de las placas fueron anotados en la ficha de recoleccioacuten de
datos
La CIM se consideroacute como la menor concentracioacuten del aceite
esencial capaz de inhibir el desarrollo bacteriano
La interpretacioacuten de los resultados se realizoacute de la siguiente
manera 50
La falta de desarrollo alrededor del disco indica que la
bacteria es ldquoS sensiblerdquo al aceite esencial estudiado lo
que significa que puede utilizarse como antimicrobiano en
dosis terapeacuteuticas
El crecimiento del microorganismo alrededor del disco
indica que es ldquoR resistenterdquo al aceite esencial estudiado
por lo cual no debe utilizarse como antimicrobiano
45 Anaacutelisis de resultados
El anaacutelisis estadiacutestico de los resultados se realizoacute utilizando el software
STATA Versioacuten 12
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
55
V RESULTADOS
Se realizaron 14 ensayos vaacutelidos para cada concentracioacuten del aceite
esencial de Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo donde se
obtuvieron los resultados observados en la Fig 7 Las mediciones de los
halos de inhibicioacuten fueron registrados en la ficha de recoleccioacuten de datos
que se observa en la Tabla 2
F
i
g
u
r
Figura 7 Formacioacuten de halos de inhibicioacuten en Streptococcus mutans
ATTC 25175
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
56
Tabla 2 Mediciones de los halos de inhibicioacuten
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1 601 783 814 1597 6
Placa Nordm 2 613 755 866 1675 6
Placa Nordm 3 65 862 865 1676 6
Placa Nordm 4 608 735 816 1765 6
HALO Placa Nordm 5 622 812 911 1674 6
DE Placa Nordm 6 601 706 827 1567 6
INHIBICION Placa Nordm 7 775 954 965 1691 6
EN Placa Nordm 8 601 796 829 1531 6
(mm) Placa Nordm 9 601 707 806 168 6
Placa Nordm 10 618 73 857 1678 6
Placa Nordm 11 614 762 839 159 6
Placa Nordm 12 601 763 909 1631 6
Placa Nordm 13 633 839 918 1557 6
Placa Nordm 14 653 831 895 1664 6
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
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75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
57
Con los datos obtenidos se procedioacute al anaacutelisis estadiacutestico de la siguiente
manera
Se realizoacute la prueba de normalidad para los halos de inhibicioacuten de cada
una de las concentraciones con la finalidad de demostrar que estos tienen
una distribucioacuten normal (P ge 005) al 95 de nivel de confianza Se
encontroacute que el aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo en concentraciones de 50 y 100 presentan distribucioacuten normal
(P ge 005) mientras que la concentracioacuten del aceite al 10 no presenta
distribucioacuten normal (P lt 005)
51 Actividad antibacteriana del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Grupo Ndeg Media DS Mediana CoefVariac
Aceite 10 14 628 046 614 007
Aceite 50 14 788 068 773 009
Aceite 100 14 866 048 861 006
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
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Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
58
Grafico 1 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten diferentes
concentraciones del aceite
Los halos de inhibicioacuten de mayor diaacutemetro se presentan en la
concentracioacuten del aceite al 100 con una media de 866 y mediana de
861 mm le sigue la concentracioacuten del aceite al 50 con una media de
788 y mediana de 773 mm por uacuteltimo la concentracioacuten del aceite al
10 presenta los halos de inhibicioacuten de menor tamantildeo con una media
de 628 y mediana de 614 mm
0000
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
9000
10000
aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n(m
m)
concentraciones de aceite
Media
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
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de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
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10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
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p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
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10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
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37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
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40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
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2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
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42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
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74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
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44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
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46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
59
52 Concentracioacuten miacutenima inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
Tabla 4 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite frente
al Streptococcus mutans
Concentracioacuten
del aceite
Sin efecto Con efecto Total
Ndeg Ndeg
10 0 0 14 100 14
50 0 0 14 100 14
100 0 0 14 100 14
Graacutefico 2 Efecto de las diferentes concentraciones del aceite
frente al Streptococcus mutans
Todas las concentraciones del aceite 10 50 y 100 presentan efecto
frente al Streptococcus mutans
0
2
4
6
8
10
12
14
16
Aceite 10 Aceite 50 Aceite 100
Nordm
de
pla
cas
Concentracioacuten del aceite
Sin efecto
Con efecto
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
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70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
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14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
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19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
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20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
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38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
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39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
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40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
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41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
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sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
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74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
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45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
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46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
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_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
60
53 Comparacioacuten del efecto del aceite esencial de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en diferentes concentraciones sobre el
crecimiento de Streptococcus mutans
Dado que una de las concentraciones del aceite no presenta
distribucioacuten normal se utilizoacute la prueba de Kruskall Wallis para
comparacioacuten de maacutes de dos medianas
Tabla 5 Prueba de Kruskall Wallis para las tres concentraciones
del aceite
Grupo Ndeg Suma-rango X2 P
Aceite 10 14 1120
3013
001
Aceite 50 14 3255
Aceite 100 14 4655
Utilizando la prueba de Kruskall Wallis se observa que existen
diferencias significativas entre las tres concentraciones del aceite (al
menos dos concentraciones difieren P lt 005)
Para evaluar entre quienes existen diferencias significativas se
comparoacute por pares de medianas utilizando la prueba U de Mann
Whitney (Suma de rangos de Wilcoxon)
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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72
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_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
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Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
61
Tabla 6 Prueba de U de Mann Whitney para comparacioacuten de dos
concentraciones del aceite
Aceite Ndeg Z P
10 vs 50 14 -4193 lt 001
10 vs 100 14 -4515 lt 001
50 vs 100 14 -3056 lt 001
El resultado de la prueba de suma de rangos de Wilcoxon estandarizoacute a
un valor Z el cual nos muestra que existe diferencias significativas
entre todos los posibles pares de concentraciones del aceite esencial
(P lt 005)
54 Comparacioacuten del grado de sensibilidad de Streptococcus mutans
frente a la clorhexidina al 012 y al aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo
Dado que uacutenicamente el grupo del aceite esencial al 10 no presentoacute
distribucioacuten normal y que la diferencia de valores era miacutenima entre
todos los grupos se utilizoacute la prueba T de Student para comparar entre
pares de medias con un nivel de significancia de 005
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
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clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
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mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
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10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
2 Ramos M Dias R Dantas R Vieira M Nascimiento W Estudo
comparativo in vitro da actividade antibacteriana de productos
fitoteraacutepicos sobre bacterias cariogenicas Odontoped Clin Integr v 4
n 1 p 33-38 janabr 2004
3 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 1381288-1293
4 MINAM (Ministerio del Ambiente) Peruacute paiacutes megadiverso 2009
5 Rocha P Biotecnologiacutea en Plantas Medicinales y Aromaacuteticas En II
Segundo Congreso Internacional de Plantas Medicinales y Aromaacuteticas
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira 2006
6 Lazo W Accioacuten antimicrobiana de algunas plantas de uso medicinal en
Chile Bol Micol 1990 5(12)25-8
7 Labbeacute c Coll J Connolly J Faini F Farrugia L Rycroft D Bioactive
Flavonones from Luma chequen Collect Czech Chem Commun
2002 67 115-123
8 Carhuapoma M Estudio de la composicioacuten quiacutemica y actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo [Tesis Magister] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de
San Marcos 2006
70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
QV770DP6 C282008Lima
10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
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35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
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36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
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40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
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2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
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74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
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antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
62
Tabla 7 Prueba de T de Student comparando Clorhexidina al
012 con las tres concentraciones del aceite esencial
Grupos Medias (dif) ES (dif) t P IC (95)
Clorhex vs 10 1013 021 4792 lt 001 969 1057
Clorhex vs 50 853 025 3408 lt 001 802 904
Clorhex vs 100 776 021 3616 lt 001 732 819
Se utilizoacute la prueba T de Student para comparar las medias del halo de
inhibicioacuten entre clorhexidina al 012 y cada una de las
concentraciones del aceite esencial encontrando diferencias
significativas entre todos los pares de medias (P lt 005) siendo mayor
la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y menor
diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
Graacutefico 3 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 10
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 10
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
grupos de comparacioacuten
Media
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
2 Ramos M Dias R Dantas R Vieira M Nascimiento W Estudo
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n 1 p 33-38 janabr 2004
3 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
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5 Rocha P Biotecnologiacutea en Plantas Medicinales y Aromaacuteticas En II
Segundo Congreso Internacional de Plantas Medicinales y Aromaacuteticas
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6 Lazo W Accioacuten antimicrobiana de algunas plantas de uso medicinal en
Chile Bol Micol 1990 5(12)25-8
7 Labbeacute c Coll J Connolly J Faini F Farrugia L Rycroft D Bioactive
Flavonones from Luma chequen Collect Czech Chem Commun
2002 67 115-123
8 Carhuapoma M Estudio de la composicioacuten quiacutemica y actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo [Tesis Magister] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de
San Marcos 2006
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9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
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10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
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12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
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14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
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16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
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18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
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19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
63
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 10 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 6 mm
Graacutefico 4 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 50
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 7 mm
-1000
1000
3000
5000
7000
9000
11000
13000
15000
17000
clorhex 012 aceite al 50
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 50
Media
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
2 Ramos M Dias R Dantas R Vieira M Nascimiento W Estudo
comparativo in vitro da actividade antibacteriana de productos
fitoteraacutepicos sobre bacterias cariogenicas Odontoped Clin Integr v 4
n 1 p 33-38 janabr 2004
3 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 1381288-1293
4 MINAM (Ministerio del Ambiente) Peruacute paiacutes megadiverso 2009
5 Rocha P Biotecnologiacutea en Plantas Medicinales y Aromaacuteticas En II
Segundo Congreso Internacional de Plantas Medicinales y Aromaacuteticas
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira 2006
6 Lazo W Accioacuten antimicrobiana de algunas plantas de uso medicinal en
Chile Bol Micol 1990 5(12)25-8
7 Labbeacute c Coll J Connolly J Faini F Farrugia L Rycroft D Bioactive
Flavonones from Luma chequen Collect Czech Chem Commun
2002 67 115-123
8 Carhuapoma M Estudio de la composicioacuten quiacutemica y actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo [Tesis Magister] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de
San Marcos 2006
70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
QV770DP6 C282008Lima
10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
64
Graacutefico 5 Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorexidina al 012
y aceite esencial al 100
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten promedio mayor
a 16 mm mientras que el aceite esencial al 50 presenta un halo de
inhibicioacuten mayor a 8 mm
Graacutefico 6 Halo de inhibicioacuten promedio de clorexidina al 012
frente a las concentraciones del aceite esencial
0000
2000
4000
6000
8000
10000
12000
14000
16000
18000
clorhex 012 aceite al 100
Halo de inhibicioacuten promedio seguacuten clorhexidina al 012 y aceite al 100
Media
00002000400060008000
1000012000140001600018000
clorhex 012 aceite al 10 aceite al 50 aceite al 100
hal
o d
e in
hib
icioacute
n (
mm
)
Tiacutetulo del eje
Halo de inhibicioacuten promedio de clorhexidina frente a las concentraciones del aceite
Media
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
2 Ramos M Dias R Dantas R Vieira M Nascimiento W Estudo
comparativo in vitro da actividade antibacteriana de productos
fitoteraacutepicos sobre bacterias cariogenicas Odontoped Clin Integr v 4
n 1 p 33-38 janabr 2004
3 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 1381288-1293
4 MINAM (Ministerio del Ambiente) Peruacute paiacutes megadiverso 2009
5 Rocha P Biotecnologiacutea en Plantas Medicinales y Aromaacuteticas En II
Segundo Congreso Internacional de Plantas Medicinales y Aromaacuteticas
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira 2006
6 Lazo W Accioacuten antimicrobiana de algunas plantas de uso medicinal en
Chile Bol Micol 1990 5(12)25-8
7 Labbeacute c Coll J Connolly J Faini F Farrugia L Rycroft D Bioactive
Flavonones from Luma chequen Collect Czech Chem Commun
2002 67 115-123
8 Carhuapoma M Estudio de la composicioacuten quiacutemica y actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo [Tesis Magister] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de
San Marcos 2006
70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
QV770DP6 C282008Lima
10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
65
La clorhexidina al 012 presenta un halo de inhibicioacuten mayor a
comparacioacuten de las tres concentraciones del aceite esencial siendo
mayor la diferencia entre clorhexidina al 012 y aceite al 10 y
menor entre clorhexidina al 012 y aceite al 100
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
2 Ramos M Dias R Dantas R Vieira M Nascimiento W Estudo
comparativo in vitro da actividade antibacteriana de productos
fitoteraacutepicos sobre bacterias cariogenicas Odontoped Clin Integr v 4
n 1 p 33-38 janabr 2004
3 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 1381288-1293
4 MINAM (Ministerio del Ambiente) Peruacute paiacutes megadiverso 2009
5 Rocha P Biotecnologiacutea en Plantas Medicinales y Aromaacuteticas En II
Segundo Congreso Internacional de Plantas Medicinales y Aromaacuteticas
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira 2006
6 Lazo W Accioacuten antimicrobiana de algunas plantas de uso medicinal en
Chile Bol Micol 1990 5(12)25-8
7 Labbeacute c Coll J Connolly J Faini F Farrugia L Rycroft D Bioactive
Flavonones from Luma chequen Collect Czech Chem Commun
2002 67 115-123
8 Carhuapoma M Estudio de la composicioacuten quiacutemica y actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo [Tesis Magister] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de
San Marcos 2006
70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
QV770DP6 C282008Lima
10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
66
VI DISCUSIOacuteN
En la actualidad se investigan numerosas plantas con la finalidad de
encontrar en ellas componentes antimicrobianos que luego puedan ser
utilizados medicinalmente Luma chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo es
una planta que es utilizada en la medicina tradicional por sus muacuteltiples
propiedades En la presente investigacioacuten se buscoacute determinar la actividad
antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A
Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans Los resultados demostraron
que existen diferencias significativas con respecto al tamantildeo de los halos
de inhibicioacuten ante la presencia de clorhexidina al 012 y las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo A pesar que esta especie vegetal es poco conocida
cientiacuteficamente ha sido estudiada por algunos investigadores
Lazo W (1990) 6 realizoacute un estudio acerca de la accioacuten antimicrobiana de
algunas plantas de uso medicinal en chile en la cual utilizoacute la decoccioacuten y
los extractos en etanol acetato de etilo y cloroformo de Luma chequen
(Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo en la presente investigacioacuten se utilizoacute el aceite
esencial En sus resultados logroacute inhibir el desarrollo de Staphylococcus
aureus y Bacillus subtilis mientras que en este estudio se observa la
actividad antibacteriana sobre la cepa de Streptococcus mutans
Labbeacute C y et al (2002) 7 investigaron acerca de los flavonoides bioactivos
de Luma chequen utilizando el extracto metanoacutelico de las hojas frescas
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
2 Ramos M Dias R Dantas R Vieira M Nascimiento W Estudo
comparativo in vitro da actividade antibacteriana de productos
fitoteraacutepicos sobre bacterias cariogenicas Odontoped Clin Integr v 4
n 1 p 33-38 janabr 2004
3 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 1381288-1293
4 MINAM (Ministerio del Ambiente) Peruacute paiacutes megadiverso 2009
5 Rocha P Biotecnologiacutea en Plantas Medicinales y Aromaacuteticas En II
Segundo Congreso Internacional de Plantas Medicinales y Aromaacuteticas
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira 2006
6 Lazo W Accioacuten antimicrobiana de algunas plantas de uso medicinal en
Chile Bol Micol 1990 5(12)25-8
7 Labbeacute c Coll J Connolly J Faini F Farrugia L Rycroft D Bioactive
Flavonones from Luma chequen Collect Czech Chem Commun
2002 67 115-123
8 Carhuapoma M Estudio de la composicioacuten quiacutemica y actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo [Tesis Magister] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de
San Marcos 2006
70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
QV770DP6 C282008Lima
10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
67
encontrando un efecto fungistaacutetico En la presente investigacioacuten se
encontroacute efecto antibacteriano utilizando el aceite esencial de Luma
chequen
Gonccedilalves M y col (2011)11 realizaron un estudio acerca de la composicioacuten
quiacutemica y la actividad antimicrobiana del aceite comercial disponible de
Luma chequen (Molina) A Gray donde evaluaron tres bacterias Gram
positivas dos bacterias Gram negativas dos levaduras y tres hongos Para
evaluar la actividad antibacteriana y antifuacutengica utilizaron el meacutetodo de
difusioacuten en disco la misma que se utilizoacute en el presente estudio En su
investigacioacuten utilizaron el dimetil sulfoacutexido (DMSO) como solvente para
diluir el aceite esencial obteniendo concentraciones en un rango de 033 a
10 microLmL en el presente estudio tambieacuten se utilizoacute el DMSO para obtener
las tres concentraciones del aceite esencial al 10 50 y 100 Todos los
experimentos fueron realizados por triplicado mientras que en este estudio
se realizaron 14 repeticiones Gonccedilalves M y col Creen que la actividad
antimicrobiana que presenta el aceite esencial de Luma chequen puede
estar asociado con la importante contribucioacuten de α-pineno 18-cineol y
linalol que como se indica en este estudio representan un alto porcentaje
en la composicioacuten quiacutemica del aceite esencial
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
2 Ramos M Dias R Dantas R Vieira M Nascimiento W Estudo
comparativo in vitro da actividade antibacteriana de productos
fitoteraacutepicos sobre bacterias cariogenicas Odontoped Clin Integr v 4
n 1 p 33-38 janabr 2004
3 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 1381288-1293
4 MINAM (Ministerio del Ambiente) Peruacute paiacutes megadiverso 2009
5 Rocha P Biotecnologiacutea en Plantas Medicinales y Aromaacuteticas En II
Segundo Congreso Internacional de Plantas Medicinales y Aromaacuteticas
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira 2006
6 Lazo W Accioacuten antimicrobiana de algunas plantas de uso medicinal en
Chile Bol Micol 1990 5(12)25-8
7 Labbeacute c Coll J Connolly J Faini F Farrugia L Rycroft D Bioactive
Flavonones from Luma chequen Collect Czech Chem Commun
2002 67 115-123
8 Carhuapoma M Estudio de la composicioacuten quiacutemica y actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo [Tesis Magister] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de
San Marcos 2006
70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
QV770DP6 C282008Lima
10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
68
VII CONCLUSIONES
Existe actividad antibacteriana ldquoin vitrordquo del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
La Concentracioacuten Miacutenima Inhibitoria del aceite esencial de Luma
chequen (Molina) A Gray ldquoarrayaacutenrdquo frente a Streptococcus mutans
se puede observar a partir de la concentracioacuten al 10
Las tres concentraciones estudiadas del aceite esencial al 10 50 y
100 presentan efecto antibacteriano frente a Streptococcus
mutans siendo la concentracioacuten al 100 la que presentoacute mayor
diaacutemetro del halo de inhibicioacuten con una media de 866 mm a
comparacioacuten de la concentracioacuten al 10 que presentoacute una media de
628 mm y la concentracioacuten al 50 que obtuvo una media de 788
mm
El grupo control de clorhexidina al 012 mostroacute diferencia
estadiacutesticamente significativa (P lt 005) con respecto a las tres
concentraciones del aceite esencial (10 50 y 100) Estas
concentraciones a su vez tambieacuten mostraron diferencias
significativas entre ellas
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
1 Souza F Gil J Doenccedila caacuterie Nem infecciosa men transmissiacutevel
RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
2 Ramos M Dias R Dantas R Vieira M Nascimiento W Estudo
comparativo in vitro da actividade antibacteriana de productos
fitoteraacutepicos sobre bacterias cariogenicas Odontoped Clin Integr v 4
n 1 p 33-38 janabr 2004
3 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 1381288-1293
4 MINAM (Ministerio del Ambiente) Peruacute paiacutes megadiverso 2009
5 Rocha P Biotecnologiacutea en Plantas Medicinales y Aromaacuteticas En II
Segundo Congreso Internacional de Plantas Medicinales y Aromaacuteticas
Universidad Nacional de Colombia Sede Palmira 2006
6 Lazo W Accioacuten antimicrobiana de algunas plantas de uso medicinal en
Chile Bol Micol 1990 5(12)25-8
7 Labbeacute c Coll J Connolly J Faini F Farrugia L Rycroft D Bioactive
Flavonones from Luma chequen Collect Czech Chem Commun
2002 67 115-123
8 Carhuapoma M Estudio de la composicioacuten quiacutemica y actividad
antioxidante del aceite esencial de Luma chequen (Molina) A Gray
ldquoarrayaacutenrdquo [Tesis Magister] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de
San Marcos 2006
70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
QV770DP6 C282008Lima
10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
69
VIII REFERENCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS
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RGO Porto Alegre v 49 n 3 p 139-144 julago 1998
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San Marcos 2006
70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
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QV770DP6 C282008Lima
10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
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20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
70
9 Carpio A Estudio preliminar de actividad antimicrobiana de extractos
de plantas contra bacterias de la cavidad oral PE11 TL-UPCH
QV770DP6 C282008Lima
10 Castro A Composicioacuten quiacutemica del aceite esencial de las hojas de
Erythroxylum novogranatense (Morris) coca actividad antioxidante y
determinacioacuten antibacteriana frente a Streptococcus mutans [Tesis
Doctoral] Lima Peruacute Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2008
11 Gonccedilalvez MJ Cavaleiro C Proenccedila da Cunha A Salgueiro L
Chemical Composition and Antimicrobial Activity of the Commercially
Available Oil of Luma chequen (Molina) A Gray Journal of Essential
Oil Research JEOR 200618(1) 108-110
12 Simirgiotis M Boacuterquez J Schmeda-Hirschmann G Antioxidant
capacity polyphenolic content and tandem HPLC-DAD-ESIMS profiling
of phenolic compounds from the South American berries Luma
apiculata and L chequeacuten Food Chem 2013 139 (1-4) 289 ndash 99
13 Cronquist A An integrated system of classification of flowering plants
Edit Columbia University Press New York 1981
14 Sistema de Informacioacuten de Biodiversidad SIB Administracioacuten de
Parques Nacionales
15 Reynel C y J Marcelo (2009) Aacuterboles de los ecosistemas forestales
andinos Manual de identificacioacuten de especies Serie Investigacioacuten y
Sistematizacioacuten No 9 Programa Regional ECOBONA ndash
INTERCOOPERATION Lima
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
71
16 PROTEGE Red de Proteccioacuten Social Gobierno de Chile
Medicamentos Herbarios Tradicionales MTH
17 Muntildeiz M Etnobotaacutenica de la flora medicinal de la provincia de Paruro
UNSAAC Cusco 1992
18 Sotta N Plantas aromaacuteticas y medicinales de la regioacuten de Arequipa
Edit Akuarella Arequipa 2000
19 Mostacero LJ Mejiacutea CF Gamarra TO Taxonomiacutea de las faneroacutegamas
uacutetiles del Peruacute Edit Normas Legales Trujillo 2002
20 Martiacutenez A Aceites Esenciales Facultad de Quiacutemica Farmaceacuteutica ndash
Universidad de Antioquiacutea Medellin 2003
21 Barrera M Aceites esenciales Programa de Desarrollo Econoacutemico
Sostenible en Centroameacuterica El Salvador 2008
22 Torres M Diaz M Acosta A La clorhexidina bases estructurales y
aplicaciones en la estomatologiacutea Gaceta Meacutedica Espirituana 2009
11(1)
23 Morante S Valoracioacuten cruzada y a doble ciego mediante el modelo de
gingivitis experimental de la eficacia de tres colutorios de clorhexidina
sin alcohol frente a la prevencioacuten de gingivitis y a la neoformacioacuten de
placa supragingival [Tesis Doctoral] Madrid Espantildea Universidad
Complutense de Madrid 2003
24 Lim K Kam PCA Chlorhexidine - pharmacology and clinical
applications Anaesthesia and Intensive Care 2008 36(4) 502-12
25 Balandrano F Soluciones para irrigacioacuten en endodoncia Hipoclorito de
Sodio y Gluconato de Clorhexidina Revista Cientiacutefica Odontoloacutegica
CCDCR 2007 Vol3 No1
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
72
26 Arrue M Ibaacutentildeez L Clorhexidina y Povidona Yodada Sesiones Cliacutenicas
de Ginecologiacutea 2007 MIR Edit Unidad de comunicacioacuten del Hospital
Donostia-Guatemala
27 Pomacoacutendor C Papel de la clorhexidina en la odontologiacutea
restauradora Odontologiacutea Sanmarquina 2010 13(2) 46-49
28 Yevenes I Reyes J Campos N Saragoni V Efecto inhibitorio en
placa microbiana y propiedades antibacterianas de enjuagatorios de
clorhexidina Av Periodon Implanto 2003 15 1 19-24
29 Garcia M B Carrilho M R Noumlr JE Anauate-netto C Anido-anido
A Amore R Tjaumlderhane L Bretz W A Chlorhexidine inhibits the
proteolytic activity of root and coronal carious dentin in vitro Caries
Research 2009 43(2) 92-6
30 Modesto A Drake D R Multiple exposures to chlorhexidine and xylitol
Adhesion and biofilm formation by streptococcus mutans Current
Microbiology 2006 52(6) 418-23
31 George A Kalangi S Vasudevan M Krishnaswamy N (2010)
Chlorhexidine varnishes effectively inhibit porphyromonas gingivalis and
streptococcus mutans - an in vivo study Journal of Indian Society of
Periodontology 2010 14(3) 178-180
32 Alarcoacuten P Diagnoacutestico Microbioloacutegico del Geacutenero Streptococcus
Laboratorio de Referencias Cocaceas Gran Positivas Instituto de Salud
Puacuteblica Chile 2011
33 Lamas M Estudio de la colonizacioacuten por estreptococos mutans y
haacutebitos dieteacuteticos durante la lactancia y primera infancia [Tesis
Doctoral] Madrid Espantildea Universidad Complutense de Madrid 2003
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
73
34 Emanuelsson IR Thornqvist E Genotypes of mutans streptococci
tend to persist in their host for several years Caries Res 2000 34(2)
p 133-9
35 Masuda N et al Longitudinal survey of the distribution of various
serotypes of Streptococcus mutans in infants J Clin Microbiol 1979
10(4) p 497-502
36 Svanberg M Krasse B Oral implantation of saliva-treated
Streptococcus mutans in man Arch Oral Biol 1981 26(3) p 197-201
37 Lieacutebana J Microbiologiacutea Oral McGraw-Hill (eds) 1995Cap 15 pp
220-239
38 Stanke F Urzuacutea I Marine A Nuevas Estrategias en Cariologiacutea 2deg
Edicioacuten Universidad de Chile2001 Cap2 pp 16-30
39 Seki M Yamahita Y Torigoe H Tsuda H Maeno M Effect of
mixed mutans streptococci colonization on caries developmet Oral
Microbiol Inmunol 2006 2147-52
40 Nakano K Ooshima T (2009) Serotype classification of streptococcus
mutans and its detection outside the oral cavity Future Microbiology
2009 4(7) 891-902
41 Sieber C Recuento de Streptococcus mutans en muestras de biofilm
sobre dientes restaurados con resina compuesta oclusal versus dientes
sanos mediante el meacutetodo de cubeta [Tesis para optar el tiacutetulo de
Cirujano-Dentista] Santiago Chile Universidad de Chile 2012
42 Aguilera M Romano E Ramos N Rojas L Sensibilidad de
Streptococcus mutans a tres enjuagues bucales comerciales (Estudio
in vitro) ODOUS Cientiacutefica 2011 Vol 12 No 1
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
74
43 Cantildeigueral S Fitoterapia concepto y aacutembito de aplicacioacuten Universidad
de Barcelona Valencia 2009
44 Zambrana T Beneficios de la fitoterapia Revista Cubana de Plantas
Medicinales 2005 Vol10 No 2
45 Avello M Cisternas I Fitoterapia sus oriacutegenes caracteriacutesticas y
situacioacuten en Chile Rev Med Chile 2010 138 1288-1293
46 Wikilengua del espantildeol Terminesp actividad
antibacterianahttpwwwwikilenguaorgindexphpTerminespactividad
_antimicrobiana
47 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-inhibitoria-minima-cim
48 Infomed Glosario de teacuterminos farmacoloacutegicos Formulario Nacional de
Medicamentoshttpglosariosldcuterminosfarmacologicos20110429
concentracion-minima-bactericida-cmb
49 Negroni M Microbiologiacutea Estomatoloacutegica Fundamentos y guiacutea
praacutectica 2da Ed Meacutedica Panamericana Buenos Aires 2009
50 Sacsaquispe R Velaacutesquez J MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA
LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA POR EL
MEacuteTODO DE DISCO DIFUSIOacuteN Ministerio de Salud del Peruacute Instituto
Nacional de Salud Organismo Puacuteblico Descentralizado de Sector
Salud Lima 2002
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
75
IX ANEXOS
Tabla 8 Ficha de recoleccioacuten de datos
Concentracioacuten del Aceite Esencial
de Luma Chequen
Clorhexidina
012
Dimetil
sulfoacutexido
10 50 100 C (+) C (-)
Placa Nordm 1
Placa Nordm 2
Placa Nordm 3
Placa Nordm 4
HALO Placa Nordm 5
DE Placa Nordm 6
INHIBICION Placa Nordm 7
EN Placa Nordm 8
(mm) Placa Nordm 9
Placa Nordm 10
Placa Nordm 11
Placa Nordm 12
Placa Nordm 13
Placa Nordm 14
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital
76
Figura 8 Calibrador digital DIGITAL CALIPER (0-150mm)
Figura 9 Medicioacuten de los halos de inhibicioacuten con el calibrador digital