UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y RECURSOS NATURALES

CULTIVO MICROBIOLÓGICO

Alumna: Auqui Jurado Vanessa

Código: 1129510114

Curso: laboratorio de microbiología general

Grupo horario: 92g

Profesora: Ms.C. BLG° Suyo Loayza, Beatriz

Callao, Perú

2014

CULTIVO MICROBIOLÓGICO

1. INTRODUCCIÓN

Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las características del medio y cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de nutrientes en el medio.

2. OBJETIVOS Comparar los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos

de microorganismos. Conocer los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de

microorganismos.

3. MARCO TEORICODiferentes métodos de siembra

- Sembrar: Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación.El resultado de una siembra se llama: Cultivo

·         Las siembras pueden ser: - Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez - Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria

Métodos Generales:1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el  tubo con el uso del asa cargada con el  material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados. Medio de cultivo: LiquidoInstrumento: AsaFinalidad: poner la bacteria en suspensión Diluciones sucesivas Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas células que, tras inocularse en un medio de cultivo, generen colonias aisladas.

2) Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material  en la superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo,  allí se extiende por toda la superficie con el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más profunda de la superficie inclinada  y se termina la estría en la parte más cerca de la boca del tubo. Medio de cultivo: agar base inclinadoInstrumento: asa o aguja bacteriológica

3) Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puede conseguir  una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se funde el medio

de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias formas: a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando se quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual se repite la operación sin tomar con el asa nuevo material.b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estría luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el último cuadrante aparecerán las colonias aisladas c- El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde, se esteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente.Medio de cultivo: solido en placa de PetriInstrumento. AsaFinalidad. Obtener colonias aisladas

 4) Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.  Medio de cultivo. SemisólidoInstrumento: aguja bacteriológicaFinalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el rojo fenol. En este medio sembraremos por picadura y estrías en superficie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirán en superficie y profundidad. A lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y según lo hagan en la parte superior o inferior del tubo, estarán indicando su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:

Crecimiento microbiano en medio líquido

Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos las células que seproducen en cada división continúan su vida independientemente formándose una suspensión de células libres.En un cultivo discontinuo de bacterias en medio líquido, se pueden diferenciar cuatrofases en la evolución de los parámetros que miden el crecimiento microbiano:

1.- Fase lag o de adaptación durante que los microorganismos adaptan su metabolismo a las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de cultivo) para iniciar la fase de crecimiento exponencial.2.- Fase exponencial o logarítmica: en ella la velocidad de crecimiento es máxima yel tiempo de generación es mínimo. Durante esta fase las bacterias consumen a velocidad máxima los nutrientes del medio. La evolución del número de células durante esta fase se explica con los modelos matemáticos que describiremos a continuación.

3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el número de bacterias (ni la masa uotros parámetros del cultivo). Las células en fase estacionaria desarrollan un metabolismo diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una acumulación y liberación de metabolitos secundarios que pueden tener importancia industrial.

Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algún nutrienteesencial del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la fase exponencial hacen que el medio sea inhóspito para el crecimiento microbiano.La fase estacionaria tiene gran importancia porque probablemente represente conmayor fidelidad el estado metabólico real de los microorganismos en los ambientes naturales.4.- Fase de muerte: se produce una reducción del número de bacterias viables delcultivo.

Crecimiento microbiano en medio sólidoLas fases, parámetros y cinética de crecimiento discutidas para el caso de los cultivoslíquidos se presentan también en cultivos sólidos. La cinética de crecimiento, en estecaso, se puede estudiar siguiendo la evolución del número de células viables por unidad de superficie o por unidad de masa.Cuando una célula aislada e inmóvil comienza a crecer sobre un substrato sólido, elresultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente, se denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una célula bacteriana viva y aislada que

si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da lugar a la producción de una colonia en un breve lapso de tiempo. Si el número inicial de bacterias por unidad de superficie es muy alto, la confluencia de las colonias da lugar a lo que se llama un césped cuando se realizan los cultivos en placas de laboratorio.En el caso de microorganismos móviles (deslizantes) o en el de los hongos filamentosos que tienen un crecimiento trófico no se producen colonias aisladas sino formaciones más difusas o miceliares.

4. MATERIALES medio de cultivo ya preparado asa de siembra mechero tubo de ensayo 1ml de agua destilada y 9ml de chica de jora 1/10

5. PROCEDIMIENTOCuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón.

Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para escribir.

Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente, proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto.

Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que el asa se enfríe.

Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.

Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en tubo de ensayo, proceda del siguiente modo:

Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior.

Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa de trabajo)

Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte externa del tubo. Esta acción calórica, provoca además una convección del movimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación.

Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el fondo de la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de diferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo:

Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña, trazando una línea longitudinal.

Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba, imprimiéndole un movimiento de zigzag.

Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo.

Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente roturando el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal.

Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa de Petri, proceda de la siguiente manera:

Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la superficie.

Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento.

Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el segundo.

Repita esta operación una o dos veces más.

Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo.

Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de dejarla en el puesto de trabajo.

Rotular y guardar para la incubación

6. CONCLUSIONES

Una vez que ya tenemos los medios de cultivo preparados, hay que inocularlos, y para ello se necesita:Medio de cultivo.Condiciones óptimas de incubación como temperatura, pH, presión, condiciones atmosféricas (concentración de O2).

Estos medios de cultivo son sólidos (cultivos en reposo), o líquidos (para cultivos en agitación) Al realizar una siembra de microorganismos, debemos tener en cuenta que técnica se va a utilizar, debido a que estas varían respecto a las características del microorganismo a tratar. También debe tenerse en cuenta la forma, espacio y el objetivo al que se quiere llegar, pues dependiendo de esto la técnica de siembra es diferente. Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar .Un cultivo de bacterias o de hongos es con el fin de aislarlas en el medio para lograr un mejor estudio de ellos.

7. CUESTIONARIO1. ¿CUANDO REALIZARIA CULTIVO POR DILUCIONES?

Técnica de las diluciones en serie:Si el microorganismo que se busca en un cultivo mixto se encuentra en mayos cantidad que cualquiera de los otros microorganismos, es posible obtenerlo en cultivo puro mediante una serie de diluciones en tubo, del medio de cultivo apropiado. Cuando la muestra este muy diluida contendrá solamente la bacteria que buscamos. Aunque es recomendable confirmar mediante el procedimiento de la siembra en placa la pureza del cultivo que se aisló de la manera descrita.

2. ¿QUE OTRAS FORMAS DE SIEMBRA EXISTEN?

Técnica por agotamiento de asa

Siembra por estrías.

Siembra por punción.

Siembra volumétrica.

Siembra masiva.

8. BIBLIOGRAFIAhttp://html.tecnicas-de-cultivo-microbiologia.html

http://www.slideshare.net/aguero-luna/medios-de-cultivos

http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.-%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf

Medio de cultivo

Tipo de medio

Agente bacteriostático

Azúcar fermentable

Sistema Indicador

ALRF (agar lactosa rojo fenol)

diferencial (no selectivo)

----- lactosa rojo fenol

Agar Cetrimide selectivo bromuro de cetiltrimetil amonio

------- --------

Agar Mac Conkey

selectivo y diferencial

cristal violeta, sales biliares

lactosa rojo neutro

SS agar (Salmonella Shigella)

 selectivo y diferencial

verde brillante, sales biliares

lactosa rojo neutro,  citrato férrico

VRBA (violeta rojo bilis agar)

selectivo y diferencial

cristal violeta, sales biliares

lactosa rojo neutro

Manitol Salt Agar (Chapman)

 selectivo y diferencial

cloruro de sodio

manitol rojo fenol

EMB agar (eosin methylen blue)

selectivo y diferencial

eosina y azul de metileno

lactosa eosina y azul de metileno

XLD agar (xilosa lisina desoxicolato)

 selectivo y diferencial

desoxicolato de sodio

lactosa, xilosa, sacarosa

rojo fenol, citrato férrico amónico y tiosulfato de sodio

BiS agar (bismuto sulfito)

selectivo y diferencial

verde brillante, sulfito de bismuto

glucosa indicador de sulfito de Bi y sulfato ferroso

Baird Parker agar

 selectivo y diferencial

Cloruro de litio y telurito de potasio

------ yema de huevo, telurito de potasio

TSB + 10% NaCl

enriquecimiento selectivo

cloruro de sodio

------ -------

Caldo Tetrationato

enriquecimiento selectivo

Tetrationato, sales biliares

------ ------

CLBVB (caldo lactosa bilis verde brillante)

enriquecimiento selectivo

verde brillante, sales biliares

lactosa producción de gas

MEDIO DE CULTIVO, TIPO DE MEDIO, AZUCAR FERMENTABLE, SISTEMA INDICADOR