CUANTIFICACIÓN DE ADN Y ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA

Cuantificación espectrofotométrica del ADN

Uno de los métodos mas utilizados es el Análisis de la absorción UV ya que los nucleótidos poseen máximos de absorción a 260 nm, este método permite realizar una estimación de la concentración de la muestra solo si esta se encuentra pura. Para evaluar la pureza de la muestra se determina la proporción OD 260 nm / OD 280 nm, si la relación es mayor a 1,6 puede estimarse que la muestra es los suficientemente pura para confiar en la cuantificación espectrofotométrica.

La calidad de las moléculas extraídas se analiza por electroforesis en gel de agarosa, la agarosa es un polisacárido altamente purificado que se utiliza para separar macromoléculas como ácidos nucleicos y complejos prosteicos. Tienen un menos poder de resolución que la poliacrilamida peor mejor rango de separación.

El ADN esta homogéneamente cargado de forma negativa. La velocidad de migración del ADN en la matriz de agarosa está determinado por:

Tamaño de ADN. Concentración de agarosa. Conformación del ADN. Superenrrollado, lineal y circular relajado. Voltaje aplicado.