Cromatografía multidimensional

R. Carabias Martínez

Cromatografía multidimensional

Cromatografia Monodimensional

Cromatografia multidimensional

Todos los componentes de la muestra están sujetos a dos separaciones.

Los componentes que se han separado en la primera columna deben permanecer separados

en la segunda columna

TIPOS DE CROMATOGRAFIA MULTIDIMENSINAL

2D TLC Elucion en una dirección seguida de una elución formando un ángulo con la primera ( 1944)

CGxCG

LCxGC

LCxLC

CGxCGxLC

Cromatografía de gases en dos dimensiones

1991 Phillips

Acronimo de comprehensive GCxGC

Inyección secuencial de segmentos de

la primera columna ( dimensión 1 D1)

son inyectados en la segunda columna

( dimensión 2 D2)

Inyector no clave.

Columnas, selección adecuada con fases

estacionarias diferentes

Detectores, respuesta rápida

Etapa clave el modulador ( INTERFASE ENTRE

LAS DOS COLUMNAS)

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FORMAS DE TRABAJO

Utilización de dos columnas con fases diferentes

La primera no polar de 25 m

La segunda polar de 1m ( la elución es completa en 2-8 min)

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TRABAJAR CON DOS COLUMNAS EN SERIE

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MODULADORES La parte más importante

Tiene dos funciones:

focalización de los analitos

transferencia rápida.

TIPOS: valvulas, focalizadores térmicos

VENTAJAS DE LA FOCALIZACIÓN TÉRMICA

Incremento de señal

Un pico cromatográfico eluye en 10segundos

Se suelen tomar al menos cinco fracciones del pico.

Duración de la señal de 2segundos.

Aumento de la sensibilidad por cinco

Suma de las cinco áreas igual al área total

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DETECTORES

Se obtienen señales de semianchura de pico de 0.2segundos.

Detectores de respuesta rápida:

Detector de ionización por llama (FID)

Detectores de captura electrónica ( ECD)

Detectores de tiempo de vuelo (TOP-MS)

Detectores de quadrupolo ( MS)

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Cromatografía Líquida-Gases

Dificultades de ¨on line¨LC- GC.

El empleo de LCxCG ´off line¨se usa frecuentemente.

Uso de NP ( fase normal) y SEC 8 exclusión por tamaño) y acoplamiento a gases

Necesidad de una interfase. En la interfase tiene lugar la evaporación del disolvente.

Problemas con las fases móviles que tienen agua

Problemas con los analitos volátiles

Soluciones

Microcromatografía ( 10L ).

Usar un SPE previo

Las más utilizadas son NP con evaporación del disolvente

Para volátiles usar SPE o bien un PTV

Cromatografía Líquida-Gases

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Cromatografía Líquida-Gases

Programación de temperatura para la evaporación (PTV)

Cromatografía Líquida-Gases

Triglicéridos. Separación en función de el numero de átomos de carbono, dobles enlaces, ácidos grasos

Cromatografía Líquida Líquida

Dificultades de ¨on line¨LC- LC inmiscibilidad de las fases móviles precipitación de las sales del tampón incompatibilidad de fases móviles

Propuestas de ´on line¨

Uso de micro y nano cromatografía líquidapermite inyectar volúmenes pequeños de fases inmiscibles75% n-hexano 25% acetato de etilo en una fase móvil 50% agua 50% acetonitrilo.

Uso de separación con columna de cambio iónico seguido de una columna de C18

Uso de separación con C18 seguido de exclusión por tamaño

Cromatografía Líquida Líquida

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Cromatografía multidimensional

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