cromatografia
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CromatografíaLuis Marín
Luisana LugoVíctor Loaiza
Maracay, Marzo de 2010
Universidad de CaraboboFacultad de Ciencias de la Salud
Escuela de Medicina “Dr. Witremundo Torrealba”Departamento de Fisiología y Bioquímica
Sede Aragua
¿Que es la Cromatografía?
Es un conjunto de Técnicas basadas en el principio de retención
selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes
¿Que es la Cromatografía?
Fase Móvil
Fase Estacionaria
Consiste en un liquido o gas que es arrastrado a través de la fase estacionaria
Consiste en un solido o un liquido fijado a un solido por donde el cual pasa la fase móvil
Tipos de Cromatografía
Plana En Columna
En papel En capa fina Por Afinidad
Por Exclusión Molecular
Intercambio Iónico
Tipos de Cromatografía: Cromatografía Plana
La fase estacionaria se representa por un papel de filtro y la móvil por un disolvente.
En Papel
Análisis cualitativos
Tipos de Cromatografía: Cromatografía Plana
En Capa Fina
Una fase móvil (normalmente, un disolvente) y a una fase estacionaria (la llamada capa fina, que puede ser papel o gel de sílice)
Separar Componentes Puros
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Depósito
Proteína Simple (Fase
Móvil)
Matriz porosa sólida (Fase
Estacionaria)
Efluido
Soporte Poroso
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Cromatografía de Exclusión Molecular
La cromatografía de filtración molecular es un método de cromatografía en columna por el cual las moléculas se separan en solución según su peso molecular.
Separa proteínas según su tamaño. La fase sólida consiste en pequeñas perlas que contienen unos poros o cavidades de tamaño calibrado. Las proteínas de mayor tamaño no pueden entrar en las cavidades.Las proteínas mas pequeñas penetran en las cavidades.
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Representación de un lecho comatográfico formado por micropartículas porosas como las empleadas en cromatografía de exclusión molecular.
Fibras de la matriz polimérica
Partículas más pequeñas
Partículas más grandes
Volumen de intersticio entre partículas
Espacio interno entre partículas
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Cromatografía de Intercambio Iónico
En este tipo de Cromatografía la F.E tiene grupos cargados que interaccionan electroestáticamente con iones de signo contrario de la fase móvil.
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Partículas poliméricas con grupos funcionales cargados negativamente
Se añade la mezcla de proteínas a la columna que contiene intercambiadores de
cationes
Las proteínas se desplazan a través de la columna a velocidades determinadas por su carga neta al pH que se esta utilizando.
En el caso de los intercambiadores
catiónicos, las proteínas con carga neta negativa se
desplazan más rápido y eluyen antes.
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Cromatografía por Afinidad
La cromatografía de afinidad permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando
ANTICUERPOS
COFACTORES
INHIBIDORES ENZIMATICOS
LECTINAS
LIGANDO DE AFINIDAD
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
LIGANDO DE AFINIDAD
MOLÉCULAS BIOQUÍMICAS RESPONSABLES DE LA RETENCION ESPECIFICA DE LOS SOLUTOS- ANALITICOS ,( PROTEINAS).
NATURALEZA ACCION
Macromoléculas biológicas o moléculas de bajo peso
molecular Biomolèculas pequeñas o macromoléculas bioquímicas
Ligando específicos Ligando generales
Anticuerpo Lectinas y
nucleótidos
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Mezcla de proteínas
Polímero con Ligando
Proteína de Interés
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
Características de la
Cromatografía de Afinidad
CAMPO DE APLICACIÓN RESTRINGIDO
SEPARACIÓN DE UN SOLUTO ANALÍTICO ( PROTEÍNA)
ALTA SELECTIVIDAD EN EL MECANISMO DE RETENCIÓN
Tipos de Cromatografía: Cromatografía en Columna
