(Biología 2º bach. Logse) Clonación de la insulina humana pág 1 /2

CLONACIÓN DEL GEN DE LA INSULINA HUMANA EN BACTERIAS

Ribosomas, enzimas, DNA, RNAm (insulina)...etcROTURA POR ÓSMOSIS,

CRIOFRACTURACIÓN.. ...

ULTRACEN-TRIFUGACIÓN Y SEPARACIÓN

POR Pm Y FORMA

RNAm insulina maduro (sin intrones)

(DNA insulina monocatenárico)

Transcriptasa inversa vírica + precursores del

DNA

DNA polimerasa

(DNA insulina humana bicatenárico)

A) Preparación del plásmido bacteriano con “extremos pegajosos” o “ganchos”

(Plásmido cortado con extremos “pegajosos”)

Enzima de restricción bacteriano específico

(Biología 2º bach. Logse) Clonación de la insulina humana pág 2 /2B) Preparación del gen a insertar con extremos pegajosos

complementarios (adición de eslabones y “corte”)

+

(DNA de insulina con extremos “pegajosos”)

(El mismo enzima de restricción bacteriano usado para el plásmido)

DNA ligasa

+Gen insulina con ganchos pegajosos Plásmido abierto con ganchos

pegajosos complementarios

C) Unión del gen al plásmido por los extremos pegajosos.DNA ligasa

ADICIÓN DE PLÁSMIDOS A CULTIVO BACTERIANO Y “TRANSFORMACIÓN”

Sin plásmidos: mueren ante tetraciclina y ampicilina

Con plásmidos sin el gen: sobreviven ante tetraciclina y ampicilina

Con plásmidos con gen de la insulina insertado: sobreviven ante ampicilina y mueren ante

tetraciclina

D) Búsqueda y clonación de la bacteria “transformada”.

TECNICA DE “RÉPLICA DE PLACAS” Y USO DE

ANTICUERPOS RADIOACTIVOS DE LA INSULINA