Carmen Pastoriza Cruz C.H.U. Ourense

CITOMETRIA DE FLUJO EN EL MIELOMA MÚLTIPLE

• Características de la muestra para el estudio de

CMF

• Diagnóstico de la célula plasmática por CMF

• Inmunofenotipos aberrantes

• Papel de la CMF en MGUS y MM smoldering

• Diferencias en la cuantificación de células

plasmáticas (CP)

• CMF en la EMR en Mieloma Múltiple

• La CMF se ha convertido en una herramienta indispensable en el

manejo de las patologías hematológicas.

• Utilidades de la CMF:

– Estudio de gran número de células en un corto periodo de tiempo.

– Análisis simultáneo de múltiples parámetros en una misma célula.

– Almacenamiento de datos IF y comparación con análisis de

muestras posteriores.

– Evaluación cuantitativa de células con determinada expresión

antigénica.

– Combinación en el estudio de antígenos de superficie e

intracelulares.

• ¿ Y en las alteraciones de células plasmáticas (CP)?: diferenciación

CP normal vs patológica.

Volumen: 1,5 mL

Anticoagulante: EDTA

Tipo de muestra: médula ósea

Número de eventos a adquirir: 100.000- 200.000

¿Cómo definimos la célula plasmática por

CMF?

IF CP Normal IF CP Atípica

CD38 ++ ++/+

CD138 ++ ++

CD19 ++ -

CD45 ++ -

CD56 - ++

CD27 ++ -/+d

CD28 -/+d ++

CD117 - ++

CD81 + -

Inmunoglobulinas Kc/Lc policlonalidad restricción clonal

Backbones markers

No existen marcadores tumorales específicos

Eventos CD38++/ CD138++

Plasmáticas normales Plasmáticas aberrantes

Infra-expresados

Infra-expresados

Sobre-expresados

CP normales

CP atípicas

• Mujer, 52 años. AP: Dislipemia.

• Remitida para estudio de pico monoclonal sérico

• No anemia

• Bioquímica sin alteraciones

• Dolor óseo lumbar de 2 meses de evolución.

• Proteinograma: CM 2 g/dL

• Inmunoglobulinas: Ig G 2,400 mg/dL, sin inmunoparesia

• PC a realizar: - Estudio de MO.

- Serie ósea.

- Estudio orina de 24h.

• Estudio orina 24h: no pico monoclonal.

IFE negativa.

BJ negativa.

• Medulograma: 6-7% de cél plasmáticas, no acúmulos.

• CMF MO:

– 3,5% célula plasmáticas.

– 95% de las mismas con IF aberrante.

• Serie ósea: no evidencia de lesiones líticas.

Osteoporosis

MGUS

Alteración Criterios

MGUS CM sérico < 3 g/dL

Plasmáticas clonales <10% en MO

Ausencia de CRAB

MM asintomático/q CM sérico >=3 g/dL y/o

Plasmáticas clonales >10% en MO

Ausencia de CRAB

• MGUS pueden evolucionar a MM (1% año).

• Herramientas para determinar el riesgo de

progresión de cada paciente.

• Scores pronósticos.

N= 500 pacientes. MGUS 407 MMa 93

Seguimiento 56 meses (24-187).

MMa MGUS

MMa >95% aPC+ Inmunoparesia MGUS >95% aPC+ Aneuploidia

• Mujer, 53 años.

• Revisión rutinaria en consulta: astenia.

• Hemograma: Hb 9,5 g/dL

• Bioquímica: Creatinina 1,3 g/dL. Albúmina 4,2 mg/dL.

B2 Microglobulina 5,8 mg/L.

• Persiste dolor óseo lumbar.

• Proteinograma sérico: CM 4,9 g/dL

• Inmunoglobulinas: Ig G 5,100 mg/dL

• Ratio k/l libre 4,20

• Bence Jones: negativa

• PC a realizar:

– Estudio de MO.

– Serie ósea.

• Medulograma: 40-42% células plasmáticas. No

evidencia de plasmoblastos.

• Citometría de flujo: 31% de eventos con IF de célula

plasmática. El 97% IF aberrante.

• Serie ósea: lesiones líticas en bóveda craneal y

diáfisis humeral.

• JC: Mieloma Múltiples ISS III

• Inicia tratamiento:

– CyBORD

– Bifosfonatos

Eventos CD38++/ CD138++

IF atípico: CD45-/ CD19-/ CD56+ CD27-/ CD81-/ Lambda ++

MORFOLOGIA

CITOMETRIA

• El gold estándar sigue siendo el recuento morfológico.

• Diferencias cuantitativas importantes entre citología e

CMF.

• Se han postulado varias hipótesis:

– Muestras de mo distintas.

– Contaminación por sangre periférica de la muestra.

– Existencia de acúmulos de CP.

– Pérdida de CD38/ CD138 durante el procesamiento

de la mo.

– CD56 y adherencia al microambiente

• Se han realizados estudios para comparar los

recuentos de CP por morfología y por CMF.

• Se usaron muestras de mo del distintos aspirados.

• Sin embargo, el porcentaje de CP medido por CMF

era el mismo que el detectado morfológicamente

en las muestras de las citocentrífugas.

HEMODILUCIÓN

Paiva et al. Haematologica 2009; 94: 1599-1602

• Recibe 6 ciclos de CyBorD

• Recogida de stem cells tras 4º ciclo

• Tipo de respuesta

– CM: no evidencia de PM sérico/urinario

– Ig G 1649 mg/dL

– IFE sérica: población Ig G kappa

– MO: 3% céls plasmáticas

– CMF: 0,01% IF aberrante.

• TASPE (Melfalan-200) sin intercurrencias

VGPR

2008 112: 4017-4023

n= 295 pacientes MM ≥ RP d+100 Taspe

n= 295 pacientes MM ≥ RP d+100 Taspe

N= 397 pacientes d+100 TASPE

Subgrupo 241 pacientes

• Hemograma sin citopenias.

• NO CRAB.

• Proteinograma: no evidencia de pico monoclonal

• Ig G 1.020 mg/dL

• IF s/u: negativa.

• Ratio K/L normal

• MO: 1% céls plasmáticas

• CMF MO: no fenotipos aberrantes en la población

plasmática.

RC estricta

¿Habría cambiado nuestra

actitud si EMR+ a día

+100 post TASPE?

RC RC

Estricta IF

≠

NO

• La CMF permite la distinción de la CP patológica a

través de su IF aberrante.

• Posible papel en scores de progresión de

MGUS/MMq a MM.

• Cuantificación distinta que la morfología,

principalmente por hemodilución.

• Determinación de RC estricta definida por IMWG.

• La calidad de la respuesta al tratamiento, medida

a través de la EMR.

Muchas gracias …