citogenetica
DESCRIPTION
Problema de Infertilidad sin causa definida puede tener un origen cromosónico.TRANSCRIPT
CITOGENÉTICA CLÁSICA
Y
CITOGENÉTICA MOLECULAR
PROF. T.M. CIT. FAVIÁN TREULEN
¿ QUE ES LA CITOGENÉTICA?
-Disciplina que tiene por objeto estudiar alteraciones numéricas y estructurales que pueden producirse en los cromosomas.
- Estas alteraciones pueden ser congénitas o adquiridas.
- Pueden producirse en todas las células del organismo o solo en algunas.
-La citogénetica se remonta al año 1956 cuando Tijo y Levan describen el número de 46 cromosomas.
- En 1959 Lejeune describe a la trisomía 21.
-En 1971 Caspersson describe el primer método de bandeo cromosómico, el bandeo Q.
-El bandeo Q y otras técnicas de bandeo (GTG, CBG) descritas posteriormente han facilitado la identificación de cada uno de los cromosomas.
-Actualmente existe el ISCN 1995.
-Cromosomas 1 – 22 X e Y.
-Grupos A(1-3), B(4-5), C(6-12,X), D(13-15), E(16-18), F(19-20), G(21-22,Y)
-Brazos largos y cortos.
¿ QUE ES UN CARIOTIPO?
-El conjunto de cromosomas de una célula se denomina cariotipo.
- Se mantiene inalterable en todas las células de un individuo asi como en los individuos de una misma especie.
-A veces se producen alteraciones que son estudiadas con técnicas de citogenética clásica.
¿CÓMO OBTENEMOS UN CARIOTIPO?
CICLO CELULAR
-La transición desde interfase a división celular (mitosis) y volver a interfase.
-Se reconocen 4 fases en el ciclo celular: G1 (gap one); S(síntesis); G2(gap two); M(mitosis).
MITOSIS
En la fase S cada cromosoma se replica y la célula llega ser 4n. Durante la mitosis cada una de las dos copias se deriva a cada una de las células hijas.
La mitosis puede dividirse en cuatro etapas: profase, metafase, anafase, telofase.
En metafase los cromosomas se encuentran en su máxima compactación.
CULTIVO CELULAR
-El análisis citogenético se puede realizar en células de diferentes tejidos como, linfocitos de sangre periférica, fibroblastos, amniocitos, trofoblastos, células tumorales y germinales.
-Por la facilidad de la obtención de la muestra, los exámenes de rutina se realizan en linfocitos de sangre periférica.
-Dependiendo del diagnóstico existen variaciones a la técnica standard.
-Incubar la muestra en un medio de cultivo líquido adecuado (RPMI 1640).
-Una vez alcanzado el crecimiento adecuado se detiene el ciclo celular en metafase (colcemid).
-Se realiza la cosecha de las mitosis.
-Se gotea la solución en un portaobjeto limpio y los cromosomas fijados al vidrio se someten luego a técnicas de tinción y bandeo.
BANDEO CROMOSÓMICO
-Se someten los cromosomas a diferentes agentes denaturantes del DNA (calor, tripsina, soluciones alcalinas).
-El bandeo GTG (tripsina) se usa de rutina y se complementa con otros bandeos (CBG o RBG)
ANÁLISIS MICROSCÓPICO
-Se realiza en un mínimo de 35 mitosis bandeadas, más una fotografía y el montaje del cariotipo completo de cada una de ellas.
- Este recuento debe ser aumentado a 50 o 100 mitosis en presencia de dos o más lineas celulares y en X frágil.
DESCRIPCIÓN DEL CARIOTIPO
La descripción del cariotipo normal o con alteraciones como traslocaciones, deleciones, inversiones, rearreglos estructurales complejos, fragilidades, duplicaciones, se realiza con la nomenclatura indicada por el ISCN (1995)
CITOGENETICA MOLECULAR
-Las limitaciones de la citogenética clásica y de la genética molecular por si solas, han sido superadas por la implementación de la citogenética molecular que utiliza las ventajas de ambas
-A esta metodología se le denomina FISH.
-Se basa en la hibridación in situ, detección y localización de secuencias específicas de ácidos nucleicos en estructuras biológicas morfológicamente conservadas.
-Utiliza sondas complementarias a un segmento de DNA.
-Estas sondas son biotiniladas no radioactivas.
TECNICA DE FISH
-PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA-PREPARACION DE LAS PLACAS-PREPARACION DE LAS SONDAS-HIBRIDACION-LAVADOS POST-HIBRIDACION-DETECCION-TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI)-VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)
TIPOS DE SONDAS
PAINTING o COATING
SONDAS REPETITIVAS DE DNA ALFA SATELITE
SONDAS DE DNA DE SECUENCIA UNICA
GEN SRY EN CROMOSOMA X
CROMOSOMA X: SONDA ROJACROMOSOMA Y: SONDA VERDECROMOSOMA 18: SONDA CELESTE
SONDA DELECION CROMOSOMA 15
DELECION EN EL CROMOSOMA 15
DELECION DEL LOCUS KAL EN EL CROM. X
EL FISH NOS PERMITE RESPONDER PREGUNTAS
IMPOSIBLES DE RESOLVER CON TÉCNICAS DE
CITOGENÉTICA CLÁSICA, ES MENOS LABORIOSO
Y MAS RÁPIDO QUE LOS BANDEOS DE ALTA
RESOLUCIÓN, ES UNA TÉCNICA FACTIBLE Y
PODEROSA EN RESOLUCIÓN.
CITOGENETICA CLASICA Y MOLECULAR EN REPRODUCCION
APLICACIONES:
-Determinar la prevalencia de anomalias y de variantes cromosómicas en parejas con esterilidad e infertilidad.
-Determinar presencia de alteraciones numéricas( aneuploidias).
-Determinar presencia de alteraciones estructurales (translocacionesdeleciones, microdeleciones, inversiones, duplicaciones,etc.)
-Determinar presencia de variantes cromosómicas (sitios fragiles, variaciones satelitales, heterocromatina centromérica aumentada, etc.)
-Diagnóstico prenatal: (anomalias genéticas y defectos del tubo neural.
-FISH permite la evaluación de aberraciones numéricas en células de líquido amniótico directamente sin cultivar.(trisomía 21, trisomía 13, trisomía 18, S. de Turner o S. De Klinefelter.)
-Diagnóstico genético preimplantatorio: Posibilidad de analizar la presencia de alteraciones cromosómicas (FISH) y genéticas (P.C.R.)en embriones antes de ser transferidos al útero. (biopsia embrionaria).
-Translocaciones, determinar el sexo de embriones en enfermedades ligadas al sexo (hemofilia, distrofia muscular de Duchenne).-Determinar enfermedades genéticas (Fibrosis quística, Enf. De Tay-Sachs, Sindrome de Marfan, Beta-talasemia, Anemia falciforme, etc.
LOS PROBLEMAS DE ESTERILIDAD O INFERTILIDAD
SIN CAUSA DEFINIDA, PUEDEN TENER UN ORIGEN
CROMOSÓMICO Y REFUERZAN LA NECESIDAD DE
ESTUDIAR A UN MAYOR NÚMERO DE PAREJAS CON
PROBLEMAS DE REPRODUCCIÓN PARA UNA
EVALUACIÓN CITOGENÉTICA, UNA VEZ EXCLUIDAS
OTRAS CAUSAS.