cinética del cáncer de mama

Monitoreo de las características cinéticas-enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama

Banca Erika LizethGranados León DellaniraNambo Arcos Mónica EstherPaniagua Picasso Lilia EritaniaReyes Cisneros AndreaRíos Mireles Francisco

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El cáncer de mama, características básicas

Es un tumor maligno que se origina en las células del seno.

Un tumor maligno es un grupo de células cancerosas que pueden crecer invadiendo los tejidos cercanos o que pueden propagarse (metástasis) a partes distantes del cuerpo.La incidencia es mayor en mujeres pero también los hombres pueden padecerlo.

Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama

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Existen dos tipos principales:

Carcinoma ductal (la mayoría son de este tipo )

Carcinoma lobulillar

*En raras ocasiones, el cáncer de mama puede comenzar en otras áreas de la mama.

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• Factores de riesgo• Edad y sexo• Ciclo menstrual• Antecedentes familiares

• Genes (BRCA1 y BRCA2)• Raza y origen étnico• Consumo de alcohol• Parto • Ingesta de DES (dietilestilbestrol)• Hormonoterapia• Obesidad• Radiación• Afecciones benignas de los senos

2015 Características básicas

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Introducción

El estudio del proceso de oncogénesis de cáncer de mama demostró una sucesiva acumulación de

anormalidades:

durante la progresión de la enfermedad antes de la aparición de tumores detectables; por lo que se han

realizado grandes esfuerzos para hacer uso de éstas en la detección temprana del cáncer.


genéticas, bioquímicas e inmunes

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• los métodos de investigación clínica y diagnóstico (en particular, la mamografía de cribado) están limitados en su capacidad de pronóstico debido a importantes tasas de resultados falsos.

• Las condiciones de la membrana y el citoplasma de linfocitos difieren

estructuralmente y funcionalmente entre individuos con y sin tumores malignos.

(Microviscosidad intracelular)2015 Introducción

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Objetivo

• Determinar la posible correlación entre las características básicas (Km y Vmax) de las reacciones enzimáticas bioquímicas en células mononucleares periféricas en pacientes con BC y signos clínico-patológicos comunes en pacientes con BC.


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Metodología del estudio

• Detección de signos de activación temprana de linfocitos basados en el cálculo de la intensidad de fluorescencia de células sanguíneas mononucleares periféricas marcadas con fluoresceína. La estimación de la cinética de este proceso fue conducida vía las constantes de Michaelis-Menten.


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•


Materiales y métodos

28 pacientes con BC

10 pacientes con cáncer de

colon

23 pacientes sanos

• Fueron examinados para el análisis de Km y los valores de su Vmax para células individuales.

• Las muestras de sangre y el tejido tisular fueron obtenidos a partir de departamentos quirúrgicos del centro médico de Assaf Harofeh y el centro médico Rabin.

• Los exámenes del tejido tumoral se realizaron a cargo del departamento de patología de dichos hospitales.

10Monitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas mononucleares en pacientes con cáncer de mama

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• Lavadas 2 veces con PBS (pH 7.2) y resuspendidas completamente en RPMI 1640.

• FDA, método para identificación de monocitos sanguíneos mediante la utilización de estereasas inespecíficas.

• Se incubaron por media horaMonitoreo de las características cinéticas enzimáticas de células periféricas

mononucleares en pacientes con cáncer de mama

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Mediciones

• La hidrólisis enzimática de la FDA y la acumulación intracelular de fluoresceína por PBMCs individuales se midieron por el escáner célula individual en una bandeja de la célula.

• El control de la uniformidad celular se llevó a cabo por examen microscópico en la bandeja de la célula desarrollado y patentado por laboratorios.

• Uso de la FDA mide los parámetros cinéticos de la actividad esterasa de PBMCs derivadas de pacientes con cáncer y pacientes sanos.

• Km y Vmax de la reacción bioquímica para las células individuales (max 300 células / paciente) se calcularon después de las mediciones periódicas repetidas de las mismas células, las cuales fueron expuestas a diferentes concentraciones de sustrato (0,6µM, 1,2µM, 2,4 µM y 3,6µM).

• Por cada concentración de sustrato, las células fueron medidas 6 veces en intervalos aprox. de 40 s.

• Bajo la exposición secuencial FDA, la pendiente de la intensidad fluorescente entre las concentraciones sucesivas era casi cero, lo que significa que Vo se dejó caer a cero


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ResultadosTabla 2. Características enzimáticas generales de las PBMCs en pacientes con cáncer

y en donadores sanos

Parámetros Donadores sanos (n=23)

P. Con cáncer de mama (n=28)

P. Con cáncer de colon (n=10)

Km (µM)

Sin tratamiento 1.73±0.18 1.93±0.24 2.02±0.2

PHA 2.41±0.21 2.52±0.25b 3.22±0.4b

Tejido tumoral 1.56±0.12 2.95±0.47b 3.45±0.72b

Vmax

Sin tratamiento 633.8±87.9 476.7±99.2 338.9±80.1

PHA 1995±360.3b 1094.5±131.8b 513.6±94.8

Tejido tumoral 612.5±112.6 722.9±269.1 422.1±96.3

Nota- b: P<0-05, representa la diferencia significativa entre células sin tratamiento y células incubadas con PHA o tejido tumoral


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Valores promedio en grupos con distintos grados histopatológicos tumorales

10

0.5

1

1.5

2

2.5

3

3.5

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Km µ

M

Células sin tratar células tratadas de tejido tumo-ral

Se encontró diferencia significativa en los valores de Km de las células no tratadas (se encontró entre los pacientes con cáncer de mama con alta (grado 1, y) y grado 2

El aumento de Los valores de Km después de la incubación con el tejido del tumor es estadísticamente significativa en pacientes con cáncer de mama conmoderadamente diferenciado ( grado 2), en comparación con el donante sanocélulas

En los pacientes con baja diferenciación de tumor ( ) el aumento del valor promedio de Km después de la exposición del tejido tumoral no fue estadísticamente significativa.


Tabla 3. Los cambios de la Vmax (au) en varios grupos de pacientes con cáncer de mama dependiendo del grado histopatológico del tumor

Células sin tratamiento

Células tratadas con tejido tumoral

Células tratadas con fitohemaglutininas

Tumores bien diferenciados

224.9±64.8 254.9±93.7 1071.8±316.9a

Tumores moderadamente diferenciados

648.6±186.3 1111.7±479.8 1124.8±193.9

Tumores poco diferenciados

321.5±106.0 303.5±123.7 1109.2±254.9a

a P< 0.02 representa la diferencia significativa entre las células sin tratamiento y las células incubadas con fitohemaglutininas.


Tabla 4 Características bioquímicas de los varios grupos de pacientes con cáncer de mama de acuerdo a los factores de riesgo

Factores de riesgo

Significado de los valores de Km (µM)

Positivo Negativo

Células sin tratamiento

Tejido tumoral

P a Células sin tratamiento

Tejido tumoral

P a

Metástasis 1.74±0.16 1.81±0.37 <0.85 1.68±0.016 3.7±0.67 <0.009

Sobreexpresión de la proteína Her-2/neu

1.41±0.27 2.43±0.7 <0.20 1.9±0.18 3.37±0.67 <0.04

Estrógenos Rc

1.85±0.16 2.94±0.47 <0.04 1.31±0.24 5.28±2.01 <0.09

Progesterona Rc

2.0±0.17 3.2±0.57 <0.04 1.2±0.21 4.21±1-27 <0.09

a P representa la diferencia significativa entre las células sin tratamiento y las células incubadas con tejido tumoral

172013

A) La reacción enzimática intracelular tal como se comprueba por la intensidad fluorescentede fluoresceína acumulada (la ordenada) en la sangre periférica individuo.

células mononucleares en uno de los pacientes de cáncer de mama . A, las células no tratadas; B, las células se incubaron con tejido tumoral autólogo. Cada grupo se define por las seis mediciones de intensidad de fluorescencia tomadas a seis puntos de tiempo por las mismas células individuales

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Discusión y conclusiones

• En primer lugar, en la exposición al tejido tumoral, las reacciones enzimáticas de células periféricas sanguíneas en pacientes con cáncer de mama fueron marcadamente distintas a las reacciones enzimáticas en los pacientes sanos, basados en los signos clásicos de Km y Vmax.


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• En segundo lugar, valores más altos de Km en tejido tumoral activado de PBMCs fueron asociados a un mejor pronóstico de pacientes con cáncer de mama.


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• Finalmente, las características básicas, Km y Vmax, de las reacciones enzimáticas de glóbulos blancos mononucleares periféricos vivos puede servir como un criterio adicional para el monitoreo y pronóstico de cáncer de mama.


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• Se desarrolló una nueva metodología para la detección temprana de la activación de linfocitos basados en mediciones en estado estacionario de la intensidad de fluorescencia de células mononucleares de sangre periférica marcados con fluoresceína.

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cinética del cáncer de mama

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