carrera de especializacion en biotecnologia …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en...
TRANSCRIPT
![Page 1: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/1.jpg)
CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA INDUSTRIAL FCEyN-INTI
Materia de Articulación CEBI-E5
BIOCATÁLISIS APLICADA
Docente a cargo: Dra. Cristina dos Santos [email protected]
CEBI- E5-2 : Cinética de los biocatalizadores/Estabilidad Enzimas/Inactivación enzimas/Métodos de estabilización
![Page 2: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/2.jpg)
Proteínas formadas por los 21 aa(raramente aa como la selenocisteínaformada por reacción enzimática de deshidrogenasas o la glutation peroxidasa)
Forman cadenas lineales de aminoácidosunidas por puentes S-S de las cisteínas
Se estabilizan con los sustratos porinteracciones no covalentes o covalentestransitorias que actuan sinérgicamente(solo se desestabiliza el complejo E-S porfuerzas coulómbicas de igual signo)
ENZIMAS
Otras proteínas que no son enzimaspueden catalizar reacciones: anticuerpos catalíticos o las ribozimas
Existen muchas proteínas sin funcionescatalíticas:
Ej.Transporte de oxígeno (hemoglobina y mioglobina)
![Page 3: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/3.jpg)
CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOCATALIZADORES
Clase 1….Estabilidad de enzimas
Un biocatalizador puede ser caracterizado por:
1. Actividad: productividad
2. Estabilidad: condiciones de operación, vida útil
3. Selectividad: frente a reacciones no deseadas
La estabilidad de la enzima afecta la velocidad de la reacción.
![Page 4: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/4.jpg)
CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOCATALIZADORES
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN
Velocidad de la reacción catalizada depende de…
TEMPERATURA
pH
INHIBIDORES
Competitivos
No competitivos
Acompetitivos
SUSTRATO
AGENTES DESNATURALIZANTES
ALMACENAMIENTO
COFACTORES
![Page 5: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/5.jpg)
ENZIMAS: ESTRUCTURA QUÍMICA
TIPOS ENZIMAS
PROTEÍNAS SIMPLES
Solo aminoácidos
PROTEÍNAS CONJUGADAS
Heterogéneas
APOENZIMA`
(parte proteíca)
COFACTOR
(COMPONENTE NO PROTEÍCO)
ORGÁNICOS
COENZIMAS
Unión no covalenteGRUPO PROSTÉTICO
Unión covalente
INORGÁNICOS
Cationes Metálicos Zn2+ Cu2+Ca2+ Fe2+ Mg2+
INACTIVA SIN
COFACTOR
![Page 6: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/6.jpg)
ENZIMAS: ESTRUCTURA QUÍMICA
GRUPO PROSTÉTICO
Es un grupo covalentemente unido a la proteína y coordinado a algún ión metálico.
ENZIMAS: Metalenzimas
Anhidrasa carbónica(balance de pH en riñon)
Nitratoreductasa
PROTEÍNAS: no son enzimas
![Page 7: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/7.jpg)
TIPOS DE ENZIMASEjemplos de enzimas que requieren cofactor
Iones metálicos como cofactores Coenzimas
Coenzimas Enzima
Pirofosfato de tiamina Piruvato deshidrogenasa
Flavin adenin nucléotido Monoaminooxidasa
Nicotiadenin nucleótido NAD
Lactato deshidrogenasa
Coenzima A AcetilCodescarboxilasa
Biotina Piruvatodescarboxilasa
Cofactor Enzima
Fe(II) o Fe(III) Citocromo oxidasaCatalasaPeroxidasa
Zn(II) Anhidrasa carbónicaCarboxipeptidasas
Ni(II) Ureasa
Mn(II) Superoxidodismutasa
Mg(II) HexoquinasasGlucosa-6-fosfatasa
![Page 8: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/8.jpg)
TIPOS DE ENZIMASEjemplos de enzimas que requieren coenzimas
Coenzimas TIPO REACCIÓN (+)requiere regeneración cofactor)“f” fácil“c” complicado
NAD+/NADHNADH+/NADPH
Reducción carbonilosOxidación de alcoholes
+, f
ATP Fosforilaciones +,f
Acetil coenzima A Alquilaciones +, c
Flavilos (FAV) C=C reducciones No req.
Biotina Carboxilaciones No req.
![Page 9: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/9.jpg)
ENZIMAS: ESTRUCTURA QUÍMICACOFACTORES
Ejemplos de coenzimas son vitaminas y derivados.
No todas las vitaminas son coenzimas.Vitaminas B: coenzima A, que es un derivado del ácido pantoténico (vitamina B5), o los cofactores NAD+ y NADP+, que son derivados de la niacina (vitamina B3).
ENZIMAS
dinucleótido de nicotinamida y adenina
Reducción de SUSTRATO, Oxidación de NADH o NADPH
Oxidación de SUSTRATOReducción de NAD+ o NADP+
![Page 10: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/10.jpg)
CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOCATALIZADORES
Estabilidad térmica caracterizada por Tm
Temperatura del equilibrio entre 50%proteína nativa y 50% desnaturalizada Depende de - Cadena de aminoácidos de la proteína (Est.1ª)-puentes S-S-Solvente-presencia de sales (Tm= To+K.[S])
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: TEMPERATURA
![Page 11: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/11.jpg)
CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOCATALIZADORES
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: TEMPERATURA
Lactoperoxidasabovina
![Page 12: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/12.jpg)
Grupos químicos ionizables presentes en las proteínas (-COOH;-NH2; -SH ) Estabilidad al pH depende de la composición de AA de la proteína.
CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOCATALIZADORES
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS : pH
No polares
Polares
BásicosÁcidos
![Page 13: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/13.jpg)
CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOCATALIZADORES
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS : pH
pH óptimo= pH en el cual la actividad catalítica es máxima depende de• interacciones entre sustrato y enzima necesarias para dar el producto.• de cada enzima y reacción catalizada
![Page 14: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/14.jpg)
CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOCATALIZADORES
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: Agentes desnaturalizantes
AGENTES DESNATURALIZANTES
Ácidos y bases fuertes (ΔpH)
Solventes orgánicos
Agente reductores urea y beta-mercaptoetanol.
Sales
Iones metálicos (Hg(II); Pb(II)
Agresión mecánica
![Page 15: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/15.jpg)
CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOCATALIZADORES
pHOP
Temperatura TOP
Concentración cofactoresEstabilidad en el tiempo durante el almacenamiento puede expresarse como un decaimiento de 1ªorden
[E]t = [E]0 exp(–kd · t)
[E]t y [E]0 son la concentración de enzima en el tiempo t e inicial y kd es la constante de velocidad de desactivación
Kd determinada a partir de factores estadístico
Boltzmann
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: Tiempo almacenamiento
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: Tiempo almacenamiento
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: Tiempo almacenamiento
![Page 16: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/16.jpg)
CINÉTICA DE REACCIÓN
MM supone que existen 3 pasos elementales1ª formación del complejo E-S y esto se plantea como un equilibrio2ª disociación del complejo3ª formación irreversible del P (paso limitante)
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: SUSTRATO
![Page 17: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/17.jpg)
CINÉTICA DE REACCIÓN
MM supone que existen 3 pasos elementales1ª formación del complejo E-S y esto se plantea como un equilibrio2ª disociación del complejo3ª formación irreversible del P (paso limitante)
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: SUSTRATO
![Page 18: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/18.jpg)
No cumplen MyMENZIMAS ALOSTÉRICAS O COOPERATIVAS
• Tienen más de un sitio de unión para el substrato y la unión de una molécula facilita la de las posteriores.
• Son Proteínas cuaternarias
n: coeficiente de
cooperación; n > 1 indica
cooperación positivaRegulación por inhibiciónpor producto
![Page 19: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/19.jpg)
• REVERSIBLES: la enzima recupera su actividad al eliminarlos.
• IRREVERSIBLES: la enzima continúa inhibida
• REVERSIBLESCompetitivos
No-competitivos
Acompetitivos
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: INHIBIDORES
![Page 20: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/20.jpg)
• Interactúa con algún grupo esencial de la enzima, formando un complejo E-I.
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: INHIBIDORES COMPETITIVOS
INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona en el sitio activo del sustrato.Afecta Km no la Vmax
INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona en el sitio activo del sustrato.Afecta Km no la Vmax
![Page 21: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/21.jpg)
En este tipo de inhibidores, se
incluyen sustancias
estructuralmente muy parecidas
al substrato
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: INHIBIDORES COMPETITIVOS
![Page 22: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/22.jpg)
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: INHIBIDORES NO COMPETITIVOS
• El inhibidor se une en otro sitio. El substrato aún puede unirse a la enzima y formarse un complejo E-S-I, catalíticamente inactivo y el complejo E-I.
Se definen dos constantes:
• Si KI1= KI2inhibición no-competitiva pura.
• Si KI1≠ KI2inhibición parcialmente competitiva o mixta
![Page 23: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/23.jpg)
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: INHIBIDORES NO COMPETITIVOS PUROS
INHIBIDOR NO COMPETITIVONo afecta Km si afecta la Vmax
![Page 24: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/24.jpg)
• El inhibidor se une al complejo E-S para dar un complejo E-S-I incapaz de transformarse en productos.
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: INHIBIDORES ACOMPETITIVOS
Inhibidor acompetitivo no se une al sitio activo de S.Cuando I se une a E genera mayor afinidad de S por E entonces se forma un complejo E-S muy estable y no da PEsquema cinético sencillo : “ I se une a ES dando ESI que es improductivo”
![Page 25: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/25.jpg)
Varía tanto Vmax (↓) como Km
(↓) aumenta la afinidad por estabilización del complejo al formarse [E-S-I] según:
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: INHIBIDORES ACOMPETITIVOS
![Page 26: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/26.jpg)
• Altas [S] pueden causar inhibición de algunas reacciones enzimáticas.
La [S] que hace máxima la velocidad
de reacción se determina evaluando
dr/d[S] = 0, con lo cual:
Cte de inhibición
que depende del
sustrato.
FACTORES AFECTAN LA VELOCIDAD DE REACCIÓN DE LA CATÁLISIS: INHIBICIÓN POR SUSTRATO
![Page 27: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/27.jpg)
RESUMEN
• Las mayoría de las reacciones catalizadas por enzimas tienen una cinética
de acuerdo al modelo de M-M.
• Algunas sustancias presentes en el medio de reacción, pueden tener un
efecto inhibitorio del tipo:
• Competitivo
• No Competitivo
• Acompetitiva.
• A veces es el propio sustrato de la reacción el que inhibe.
• Algunas enzimas no siguen M-M y deben ajustarse a otros modelos
empíricos. Uno de los más habituales es el comportamiento alostérico.
![Page 28: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/28.jpg)
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS
El proceso de catálisis tiene lugar al exponerse residuos de aaespecíficos de la enzima al sustrato. La alta especificidad depende de la forma, tamaño de la región de la enzima llamada sitio activo y de las propiedades de los aa en la misma.
![Page 29: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/29.jpg)
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS
-interacciones no covalentes -reacciones ácido base -uniones covalentes transitorias-reacciones nucleofílicas-reacciones electrofílicas-reacciones de oxidoreduccionde cofactores
MECANISMOS DE CATÁLISIS
1. Catálisis ácido base2. Catálisis covalente3. Catálisis íón metálica4. Catálisis por efectos de proximidad5. Catálisis por efectos de orientación6. Catálisis por unión preferencial en el
estado de transición
![Page 30: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/30.jpg)
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS
1.CATÁLISIS ÁCIDO BASE
Las enzimas trasfieren un protón desde o hacia el sustrato,
provocando ruptura de un enlace covalente
![Page 31: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/31.jpg)
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS
2. CATÁLISIS COVALENTEC
OV
ALE
NTE
Ataque Nucleofílico(dador de electrones) o electrofílico(aceptor electrones) del centro activo de la enzima sobre el sustrato
Estado transitorio por enlace covalente inestable
Ruptura enlace covalente liberación del
producto
![Page 32: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/32.jpg)
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS
Ejemplo: Hidrólisis de proteínasQuimotripsina (proteasa)
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS
![Page 33: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/33.jpg)
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS
2. CATÁLISIS COVALENTE
CO
VA
LEN
TE Enzimas denominadas SERINA proteasas
Utilizan el grupo CH2OH de la serinacomo nucleófilo para hidrolizar enlaces peptídicotris.
Ej. enzimas tripsina y quimiotripsina
Grupo HO de la Serina
Grupo imidazol de la Histidina
Grupo SH de la Cisteína
![Page 34: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/34.jpg)
Paso 1: Sustrato (PP ) se introduce en sitioactivo (SA) de la quimotripsina (QT).Se traslada H+de Ser-195 a His-57 y se forma C=O
Paso 2: q+ de His-57 se neutraliza con la q- del áciaspártico (Asp-102). CuandoC=O se forma en el PP, se rompe la C-N. El grupo con N se estabiliza unido a H de His-57.
Paso 3:la porción de PP con el N se mueve fuera del SA.
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS2. CATÁLISIS COVALENTEEjemplo Quimotripsina
![Page 35: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/35.jpg)
.
Paso 4: H2O ingresaSA.O del agua cede H+ al N de His-57 y se une al C del PP. Se rompe C=O
Paso 5: se rompe C-O con Ser-195y se restablece elO-H de la serina.Ser-195 y His-57 vuelven a su conformación original.
Paso 6: la porción de PP con El O-H sale del SA.La QT está lista para recibirotra molécula de sustrato
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS2. CATÁLISIS COVALENTEEjemplo Quimotripsina
![Page 36: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/36.jpg)
MECANISMO DE ACCIÓN DE LAS ENZIMAS2. CATÁLISIS COVALENTE
• Tripsina- Quimiotripsina
• ElastanaSERINA
• PapaínaCISTEÍNA
• Glucosa -6-fosfatasaHISTIDINA
![Page 37: CARRERA DE ESPECIALIZACION EN BIOTECNOLOGIA …biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-content/...en el sitio activo del sustrato. Afecta Km no la Vmax INHIBIDOR COMPETITIVO reacciona](https://reader034.vdocumento.com/reader034/viewer/2022052320/6077cf44c3cd025bcf3765f5/html5/thumbnails/37.jpg)
Evaluación del rendimiento en procesos BIO
CONVERSIÓN DE REACTIVOS