c19orf12 aceruloplasminemia cp · •habitualmente el primer caso en una familia es un hijo de...

FORMA CLÍNICA GEN FORMA CLÍNICA GEN

Neurodegeneración asociada a

pantotenato quinasa (PKAN) PANK2


proteína beta -propeller (BPAN) WDR45


fosfolipasa A2 (MPAN) PLA2G6 Neuroferritinopatía FTL


proteína de membrana

mitocondrial (MPAN)

C19orf12 Aceruloplasminemia CP


hidroxilasa de ácidos grasos (FAHN) FA2H Síndrome de Woodhouse-Sakati DCAF17

Enfermedad de Kufor-Rakeb ATP13A2 COASY

Genética de las ENACH

• Genes más frecuentes: PANK2 : 50% PLA2G6: 20%

C19orf12: 6-10% WDR45: 1-2%

• Genes más raros: FA2H, COASY, ATP13A2, DCAF17, FTL y CP

• Sin diagnóstico: 40% casos

•Habitualmente el primer caso en una familia es un hijo de padres sanos portadores.

•Afecta por igual a hombres y a mujeres.

•Los enfermos presentan dos mutaciones en un mismo gen; no es preciso que sea la misma (heterozigotos compuestos).

Herencia Autosómica Recesiva

Análisis genético: Protocolo de Trabajo

Secuenciación de los genes más

frecuentes

PANK2, PLA2G6, C19orf12 y WDR45

Mutaciones en exones y regiones

de alrededor (splicing)

Sanger

Descartar grandes deleciones y/o duplicaciones

PANK2 y PLA2G6

MLPA

(kit comercial)

Análisis de los genes menos frecuentes

DCAF17, COASY, ATP13A2, FTL, CP y

FA2H

Panel de Genes

Trastornos del movimiento

PERSONA CÉLULA CROMOSOMA GEN

¿Qué es? La determinación del orden de los

nucleótidos (A, C, G y T) en la cadena de DNA.

La secuencia de DNA constituye la información

genética heredable.

Frederik Sanger

Análisis de los genes más frecuentes

•Detectar pequeños cambios

•Estudiar gen a gen

Secuenciación de DNA: Sanger

http://es.wikipedia.org/wiki/Nucle%C3%B3tido

http://es.wikipedia.org/wiki/Adenina

http://es.wikipedia.org/wiki/Citosina

http://es.wikipedia.org/wiki/Guanina

http://es.wikipedia.org/wiki/Timina

c.570C>G

c.656G>T c.747dup c.790C>T

c.1211A>T c.1038A>T

c.1171dupATTG c.1064A>G c.1070G>C

c.1475C>G c.1502T>C c.1583C>T

EXÓN 1 EXÓN 2 EXÓN 3 EXÓN 4 EXÓN 5 EXÓN 6 EXÓN 7

Gen PANK2

Más del 80% de mutaciones están en los exones

GEN

hijo enfermo

padre sano portador hija

sana

madre sana portador

PANK2 PLA2G6

Paciente Mutación Paciente Mutación

NBIA-1 c.1211 A>T (Hom) NBIA-6 c.2017C>T (Hom)*

NBIA-2,3,4,5,7,8 c.1583C>T (Hom) NBIA-11 c,1010T>A*/c.1027G>A

NBIA-09,10 c.1171dupATTG* NBIA-14,15 c.1640A<G(Hom)

NBIA-13 c.1070G>C*/c.790C>T NBIA-17 2221C>T/2370T>G

NBIA-16,33 c.747dup*/c.1475C>G* NBIA-26 c.209 G>A/c.895-16T>A *

NBIA-19 c.1502T>C (Hom) NBIA-32 c.1547dupGC (Hom)

NBIA-34,35 c.1064A>G/c.1502T>C NBIA-44,45 c.680 C>T (Hom)*

NBIA-42,43 c.570-571delCA/c.980 C>T

*Mu

taci

ón

no

vel

• Genes: PANK2, PLA2G6, C19orf12, WDR45

• 40 pacientes (35 familias):

o Diagnóstico genético en 26 pacientes

o 14 pacientes pendientes de diagnóstico

Análisis de los genes más frecuentes

17 42,5%

9 22,5%

14 35%

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

PANK2 PLA2G6 SINDIAGNÓSTICO

• Genes: PANK2, PLA2G6, C19orf12, WDR45

• 40 pacientes (35 familias)

• Diagnóstico genético en 26 pacientes

• 14 pacientes pendientes de diagnóstico

Análisis de los genes más frecuentes Genes más frecuentes

Según bibliografía:

PANK2 : 50%

PLA2G6: 20%

C19orf12: 6-10%

WDR45: 1-2%



frecuentes




Sanger


PANK2 y PLA2G6

MLPA

(kit comercial)



FA2H

Panel de Genes


Diagnóstico genético 26 de 40 pacientes

Más del 80% de mutaciones están en los exones

¿Qué pasa si una mutación está en otra parte del gen? Por ejemplo en un intrón

DELECIÓN

DUPLICACIÓN

Secuenciación de los genes más frecuentes


Mutaciones en exones y regiones de alrededor

(splicing)

Sanger


PANK2 y PLA2G6

MLPA


DCAF17, COASY, ATP13A2, FTL, CP y FA2H

Panel de Genes


Análisis de deleciones/duplicaciones

grandes en PANK2 y PLA2G6

Paciente Genes investigados MLPA

NBIA12 PANK2,C19orf12,WDR45 SI

NBIA18 PANK2,PLA2G6,C19ORF12,WDR45 SI


NBIA21 PANK2,PLA2G6,C19ORF12,WDR45 NO




NBIA28 PANK2,PLA2G6,C19ORF12 SI


NBIA31 COASY, WDR45 SI



NBIA41 PANK2,PLA2G6 c.1615C>A (HET),C19ORF12,WDR45 NO

NBIA37 PANK2c.332T>A/c.1713+63insT*, PLA2G6, C19ORF12,WDR45 NO

14 pacientes sin diagnóstico → MLPA hecho en 11→ Sin resultados positivos



frecuentes




Sanger


PANK2 y PLA2G6

MLPA

(kit comercial)



FA2H

Panel de Genes


Diagnóstico genético 26 de 40 pacientes

14 pacientes sin diagnóstico No resultados positivos

Análisis genético: Panel de Genes

•El panel de genes permite el análisis de un gran número de genes al mismo

tiempo.

•Técnica mucho más rápida y también más compleja de interpretar.

•Se incluirán los genes implicados en las ENACH y también otros

relacionados con trastornos del movimiento:

ENACH

DISTONÍA

PARKINSON

ENFERMEDAD DE WILSON

GENES IMPLICADOS EN LA SÍNTESIS DE COENZIMA A

….

•De esta forma se estudiarán aquellos casos cuya clínica sea más complicada

Análisis genético: Tipo de muestra

Extracción DNA

Tubos EDTA

Extracción RNA

Tubos PAXgene

Para estudiar mutaciones que no están en los exones analizamos

RNA

Tubos PAXgene

•Los intrones de los genes humanos son enormes.

•Es posible trabajar con fragmentos más pequeños (cDNA

obtenido a partir de mRNA)

•De esta forma detectamos si hay cambios de tamaño debido a

mutaciones que están en los intrones

Pacientes sin dx genético

Extracción RNA RT-PCR abarcando

todo el cDNA

Objetivo: En pacientes en quienes no se logra el diagnóstico genético con el

protocolo habitual, se investiga si hay mutaciones en regiones intrónicas

¿El cambio detectado es patológico?

Individuo sano

enfermo

Estudiar al resto de familiares

Comprobar si el cambio está en población sana

Análisis informáticos

•Averiguar si la base mutada es importante •Predecir si el cambio puede alterar la función de la proteína

Función de los genes ENACH

ATP

ase

act

ivit

y (

Un

its/

mo

l)

0

0,05

0,1

0,15

0,2

0,25

0,3

0,35

0,4

0,45

* *

WT R190W S25L D6A EMPTY

* p_valor < 0,05

Ensayo de actividad

Proteína normal MPZ-HA Superficie de la célula

Proteína mutada p.S121F Interior de la célula

Estudio de localización

DESORGANIZACIÓN MUTADO

RN

Ai

3 -

5 d

5

we

eks

Co

ntr

ol

ORGANIZACIÓN NORMAL

3 -

5 d

Mosca Transgénica

c19orf12 aceruloplasminemia cp · •habitualmente el primer caso en una familia es un hijo de...

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