1. BIOLOGIA MOLECULAR PARA PROFESIONALES DE LA SALUD II Luz Esmeralda Murcia Urrego Bacteriloga Esp. Administracin en salud

2. Retomando Estructura celular, organelos y funciones. Estructura del ADN y ARN. Replicacin . Transcripcin. Traduccin. Postraduccin. Tcnicas: electroforsis y PCR. 3. Pendientes Telmeros. Telomerasa, ARN.Diskeratosis congnita, sndromes mielodisplsicos, histiocitosis. Neuroblastoma. 4. Pendientes ADN ribosomal ADNr. Secuencia de ADN contenida en los cromosomas del ncleolo que codifica ARN ribosomal, muy utilizado en estudios filogenticos por su bajo porlimorfismo gentico. 5. MUTACIONES MOLECULARES Silenciosas Neutra Cambio de sentido o missense (cancer colorectal) Sin sentido o non sense (Talasemia) Adicin delecin o frame shift (Fibrosis quistica) AGG x CGG (Arg) AAA x AGA (Lys Arg) UCA x UUA (Ser Leu) AGA x STOP AGA TCT AGG GAA AGA TCC TAG GGA AT AGA TTA GGG AAT 6. Programas para biomodelos Jmol, Chime, RasMol. http://www.biorom.uma.es/contenido/bi omodel/model1j/dna/inicio.htm 7. AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS 8. Clonado ADN -- ADN - Vector (plsmido) Ligacin (ADN ligasa) Insercin (Transformacin o transfeccin). - Propagacin (seleccin, miniprep) - Purificacin 9. AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS IN VITRO Amplificacin del ADN diana. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), la autorreplicacin de la secuencia (3SR) y la amplificacin por desplazamiento de la hebra (SDA). Amplificacin de la sonda, que incluye la replicasa Q o la reaccin en cadena de la ligasa (LCR). Amplificacin de la seal, en los cuales la seal generada por cada sonda es aumentada. 10. Variaciones de la PCR RT-PCR RT-PCR http://www.biorom.uma.es/contenido/U IB/pcresp/index.html Q-PCR http://www.youtube.com/watch?v=e74Y YdSHraY 11. Variaciones de la PCR PCRDESCRIPCCIONPCR anidadaA partir de un amplicn se aplican nuevos primes. Aumenta la sensibilidad.PCR de extensin solapadaCambios de secuencia introducidos dentro de fragmentos (clonados) de ADN. 4 primers con productos de ADN mutado solapados.PCR in situEn portaobjetos sobre tejido o clulas. Se hace amplificacin del ADN e hibridacin in situ.PCR mltipleAmplificacin simultnea de ms de una secuencia.RT-PCRARN es el molde inicial y la enzima es transcriptasa inversa que forma cADN.Q -PCRCuantifica ADN o ARN en tiempo real. Se detecta basndose en fluorocromos o sondas.Otrase-PCR, AFLP, Colonia, Asimtrica, Especfica de alelo, Hot start, ISSR, Touchdown, Tail, MLPA, Inversa. 12. VISUALIZACION DEL AMPLIFICADO 13. VISUALIZACION DEL AMPLIFICADO Electroforsis de agarosa. Southern blot 14. VISUALIZACION DEL AMPLIFICADO Hibridacin en micro placas de ELISA. 15. Amplificacin isotrmica de cidos nucleicos LAMP Sistema que utiliza una polimerasa con alta actividad de desplazamiento de cadena (Bst) y un sistema de dos cebadores internos y dos cebadores externos para reconocer un total de seis secuencias distintas en el ADN blanco -produccin material inicial -Ciclos de amplificacin y elongacin. -Reciclaje. 16. LAMP 17. Deteccin por bioluminiscencia 18. OTRAS NASBA (Nucleic Acid Sequence Based Amplification) 3SR. 19. SECUENCIACION DE ACIDOS NUCLEICOS 20. SECUENCIACION Determinacin de la secuencia de nucletidos de una molcula especfica. -Mtodo qumico -Mtodo enzimtico Deteccin de mutaciones, aplicaciones forenses, ADN fsiles, diagnstico de enfermedades. 21. SECUENCIACION Di-deoxi-nucletidos http://www.youtube.com/watch?v=fNIG 2KROxYA Pirosecuenciacin http://www.youtube.com/watch?v=a0qB RjwGAbE 22. REFERENCIAS ADICIONALES http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/PCR/Aplicaciones-PCRAmplificacion%20de%20acidos%20nucleicos%20in%20vitro.pdfhttp://www.fiiaiafp.com/neo_2012/pdf/presentaciones/Sesion%20Paralela%208%20Los %20peligros%20en%20alimentacion/Deteccion%20Molecular%20de%20p atogenos%20por%20amplificacion%20isotermica%20Alejandro%20Rojas. pdfhttp://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S071610182002000100003&script=sci_arttext