Bacteriología

Seminario 1

Introducción a laMicrobiología y a la

BacteriologíaMicrobiología 1

II CátedraFacultad de Medicina (UBA)

Introduccióna la

Microbiología

¿Qué es la MICROBIOLOGIA?La Microbiología se puede definir comola ciencia que trata de los seres vivosmuy pequeños, concretamente de aquelloscuyo tamaño se encuentra por debajo delpoder resolutivo del ojo humano:BACTERIAS, VIRUS Y HONGOS

PARASITOS: organismosunicelulares(microscópicos) ypluricelulares(macroscópicos)

Poder resolutivo del ojo: 0,1-0,2 mm.Por ejemplo: tamaño de unabacteria esférica 0.2 y 2um(micrómetros).

MICROORGANISMOSEs un conjunto de formas de vida agrupados por conveniencia delhombre; todos los organismos que no pueden observarse a simplevista. Es necesaria la ayuda de una lupa o de microscopios.Entre los microorganismos están:

FORMAS ACELULARES FORMAS CELULARESOrganismos unicelulares o pluricelulares de

dimensiones microscópicas.

ResumenCaracterísticas Virus Bacterias Hongos Parásitos

Célula NO si si si

Diámetroaprox. (um)

0.02-0.2 1-5 3-10(levadura)

15-25(trofozoito)

Ácido nucleico ADN ó ARNO ADN y ARN ADN y ARN ADN y ARN

Tipo de núcleo Ninguno Procariota Eucariota Eucariota

Naturaleza dela superficieexterna

Cápsideproteica yenvoltura

lipoproteína(virus

envueltos)

Pared celularde

proteoglicano

Pared celularde quitina

Membranaflexible

Mecanismo dereplicación

Parásitosintracelulares

obligados

Fisión binaria Gemacion omitosis

Cicloscomplejos

¿Qué estudia la microbiología?De los microorganismos se estudian sus:

ActividadesForma y estructuraReproducciónFisiología y metabolismoIdentificaciónDistribución en la naturalezaRelaciones con otros seresEfectos benéficos y perjudiciales

humanos

••••••••••

que ejercen sobre los

Alteraciones físicas y químicas que ejercen en el medio

¿Dónde se encuentran losmicroorganismos?

Los microorganismos son ubicuos

Se encuentran en el aire, en el agua, en el suelo,en los alimentos, sobre las superficies de los

losobjetos y sobre el exterior desus

todosorganismos y aún dentro de sistemasdigestivos, respiratorios y genitales.

En un cuerpo sano viven1 trillon de microbios

APLICACIONES DE LA MICROBIOLOGIA

1- Bancos de sangreLos bancos de sangre tienen por cometido la preparación eficiente yoportuna de componentes sanguíneos inocuos.

Funciones:-Captación, educación y registro de donantes.

-Extracción de sangre y separación de sus componentes.-Análisis inmunohematologico, serológico, distribución y almacenamiento

correspondiente de la misma.

Programas de seguridad en el laboratorio de forma tal que eldonante, el paciente y el personal del banco de sangre esténprotegidos contra posibles efectos nocivos de la exposicióna la sangre humana.

Normas preventivas y bioseguridad:-Toda muestra de sangre debe ser tratada y manipulada como si fuese Infecciosa

(aquellos materiales de alto riesgo para SIDA, Hepatitis B y/o C pueden demandarmedidas de seguridad especiales)

- Un buen programa de seguridad debe considerar todos los peligros que en el ambientelaboral pueden ser causales de accidentes y/o enfermedades profesionales.

- Implementar el uso de etiquetas y carteles y en las muestras.-El personal debe vacunarse contra Hepatitis B (excepto que se encuentre Inmunizado o

vacunado previamente)- Lavarse cuidadosamente las manos antes y después de cada procedimiento o si se tiene

contacto con material patógeno y después del contacto con pacientes o donantes.- Mantener los elementos de protección personal en óptimas condiciones de aseo, en un

lugar seguro y de fácil acceso.- Las mujeres embarazadas que trabajen en bancos de sangre (expuestas a riesgos

biológicos VIH/SIDA y/o Hepatitis B, C) deberán ser muy estrictas en elcumplimiento de las normas de bioseguridad.

- Realizar la desinfección y limpieza de las superficies, elementos y equipos de trabajo alfinal de cada procedimiento y al final de cada jornada.

Es de suma importancia una efectiva comunicación y la provisión y uso el uso deequipamiento de protección.

ACCIDENTE DE EXPOSICION A SANGRE 0 FLUIDOSCORPORALES (AES):

• Se denomina a todo contacto con sangre o fluidos corporales y que lleva unasolución de continuidad (pinchazo o herida cortante) o un contacto conmucosas o con piel lesionada (eczema, escoriación, etc.).El riesgo detransmisión depende de numerosos factores, fundamentalmente de:

-la prevalencia de la infección en una población determinada-la concentración del agente infeccioso-la virulencia del mismo-el tipo de accidente

Los agentes más frecuentes de AES son:-Virus de la Inmunodeficiencia humana (HIV)-Virus de Hepatitis B (HBV)-Virus de Hepatitis C (HCV)

¡RECORDAR!

Bioseguridad

Protección Peligro

Procedimientos a seguir frente a un accidente laboral.

INMEDIATAMENTE DECONTAMINAR LA PIEL CON AGUAY JABÓN, o CONSOLUCIÓN FISIOLÓGICA EN CASO DE MUCOSAS.CATEGORIZAR ELACCIDENTE: Debe haber ocurrido con material contaminado conSANGRE.Realizar control de serología para HIV, HBV y HVC inmediatamente, y tomar medidasadicionales urgentes en caso de obtener resultados positivos.

2-Análisis de Peligros y Puntos de Control Críticos(APPCC o HACCP )

Es un proceso sistemático preventivo para garantizar la seguridadalimentaria de forma lógica y objetiva, identificando, evaluando y previniendotodos los riesgos de contaminación de los productos a nivel físico, químico y

biológico a lo largo de todos los procesos dela cadena de suministro.

HACCP NO es un sistema de control de calidad. Su objetivo es asegurar laINOCUIDAD.

Concepto de Puntos de Control Criticos (PCC)Fase en la que puede aplicarse un control y que es esencial para prevenir o

eliminar un peligro relacionado con la inocuidad de los alimentos o parareducirlo a un nivel aceptable.

Concepto de Límite Crítico (LC)Son los valores mínimos o máximos de un parámetro físico, químico o

microbiológico que deben ser controlados en un PCC. Deben estar asociados avariables tales como: temperatura, tiempo, actividad de agua, pH, acidez, residuos deantibióticos entre otros, evaluados y monitoreados con métodos rápidos para que sea

expedita la toma de decisión y ajuste.

Ejemplos:

• Temperatura y tiempo necesarios para inactivarmicroorganismos patógenos en procesos depasteurización de leche.

• pH en producto final para asegurar que noexiste desarrollo de patógenos en conservasenlatadas.

• Residuos de antibióticos y plaguicidas enmaterias primas, mediante pruebas químicascarne de abasto y leche.

en

METODOS DE ESTERILIZACIÓN YDESINFECCIÓN

• ESTERILIZACION: Es la total destrucción o eliminación de todas lasformas de vida microbiana. Este proceso debe ser utilizado en losmateriales de categoría crítica.

• DESINFECCION: Es el proceso de eliminación de microorganismospatógenos, excepto las esporas bacterianas. En los bancos de sangre seutiliza un nivel medio de desinfección, inactivando a losmicroorganismos (hongos, virus y bacterias) en la forma vegetativa.

La responsabilidad sobre las normas de seguridad depende del EQUIPODE SALUD EN SU TOTALIDAD

ORGANISMOS EINSTITUCIONES

Food and drugadministration

Agencia del gobierno de los Estados Unidos dependientedel Departamento de Salud y Servicios Humanos

responsable de la regulación de: alimentos, fármacos,dispositivos médicos, vacunas, sangre y injertos

biológicos, productos veterinarios (alimentos, drogas,dispositivos médicos), cosméticos, productos que emiten

radiación y productos con tabaco.

www.fda.gov

Centers for Disease Controland Prevention

Agencia del Departamento de Salud y ServiciosHumanos responsable del desarrollo y aplicación de

políticas para prevenir y controlar enfermedades.

Cuenta con centros, institutos y oficinasespecializadas: Centro de inmunización y

enfermedades respiratorias, de enfermedadeszoonóticas, de transmisión sexual.

www.cdc.gov

OMS – WHO –Organización Mundial de

la Salud

- Lleva a cabo la Clasificación internacionalde enfermedades

- Determina la aplicación de MedidasSanitarias para detener una epidemia, o

profilácticas (como la vacunación)- Asiste a países menos avanzados en

vacunación, aprovisionamientos de aguapotable, protección maternal, etc.- Realiza estadísticas y estudios

epidemiológicos de los 193 estadosmiembros.

www.who.int

CIE – ICD – Clasificación deenfermedades

El objetivo actual es estandarizar diagnósticos por código yenfermedades para su fácil reconocimiento con finesestadísticos.

OPS – PAHO -Organización

Panamericana de lasalud

Organismo internacional de salud pública dedicada a mejorarla salud y las condiciones de vida de los países de América.

-Fijar políticas sanitarias en los países miembros.

-Cooperar técnicamente, incluyendo actividades educativas yde apoyo promoviendo la prevención de enfermedades.

-Promover la estrategia de atención primaria de la salud.

www.paho.org

ANMAT - Agencia nacionalde Medicamentos,

Alimentos y TecnologíaMédica

• Controlar, fiscalizar, vigilar la calidad y sanidad de losproductos, sustancias, elementos y procesos queinvolucren medicamentos, alimentos cosméticos ytecnología médica.

• Velar por el cumplimiento de las disposiciones legales,científicas y técnicas especificadas en reglamentos oleyes.

• Ambos a través del: Instituto Nacional de Medicamentos,Instituto Nacional de Alimentos, Dirección de Tecnologíamédica y Dirección de evaluación de medicamentos.

www.anmat.gov.ar

Código Alimentario Argentino(CAA)

Regula en todo el territorio de Argentina todos losalimentos, condimentos, bebidas, sus materias primasy aditivos. Respecto a su elaboración,fraccionamiento, conservación, trasporte, envasado,así como también el establecimiento que lo elabore

Alimentos que obligatoriamente deberán estar sujetos acontroles microbiológicos (según el CAA):

Alimentos lácteos: Leche (en todas sus formas), Queso(todos los tipos), Yogur, Cremas, Manteca, etc.

Productos cárnicos que se consumen sin tratamientotérmico: Chacinados, Embutidos, Fiambres, Salados,

Ahumados, etc.Alimentos refrigerados: Aves, Vegetales, Pescados y

mariscos, etc.Alimentos congelados: Platos preparados, Helados,

Pescados y mariscos, Vegetales, Hielo, etc.Pastas frescas (con y sin relleno)

Bebidas analcohólicas:Agua

Jugos de frutasCondimentos: salsas y aderezos

Frutas secas: maní, etc.

Tolerancia microbiológica dela carne cruda vacuna según

el CAADeberá responder a las siguientesexigencias:- Actividad de agua (aw): 0,83 - 0,88- Anaerobios esporulados, no mayor de:

100 por g- Bacterias mesófilas (recuento a 35°C),

no mayor de: 106 por g- Cloruro de sodio, Máx: 15% p/p- Enterobacterias, no mayor de: 10 por g- Humedad: 55 - 65% p/p- pH, no superior a: 5,2- Sorbato de potasio, (c/ácido sórbico),

Máx 0,12% p/p- Staphylococcus aureus coagulasa

positiva,no mayor de: 100 por gramo

INAL – Instituto Nacional deVigilancia Alimentaria

Identifican de forma temprana losalimentos que no cumplen con el Código

Alimentario Argentino

Retirar del mercado productoscontaminados

Realizar acciones de prevención y controlde la Enfermedades de Transmisión

Alimentaria

Denuncie siempre que:• Consumió o compró comida que no era segura. La comida es

considerada insegura cuando:

• - La comida que debe ser servida caliente no se encuentra caliente• - La comida que debe estar fría no está refrigerada• - Los alimentos contienen materiales extraños a su composición normal,

por ej: vidrio, insectos, pelos, etc.• - Los alimentos listos para consumir están en contacto con alimentos

crudos• - Los alimentos tienen olor o sabor desagradable

• Si la higiene de un restaurante o supermercado no es la adecuada.Se considera que la higiene es inadecuada cuando:

• - El negocio o restaurante se encuentra visiblemente sucio• - El personal del lugar manipula alimentos crudos y después cocidos y/o

listos para consumir sin lavarse las manos entre ambas operaciones

• Si se enfermó después de comer un alimento

• - Si usted sospecha que tiene una infección o una intoxicaciónalimentaria, es importante que consulte a su médico.

Denuncie a:

• Telefónicamente a 0800-222-6110 o 4340-0888 de lunes a viernes de 8 a 17 hs ysábados y domingos de 8 a 20 al 0800-333-1234

• De manera personal al Departamento devigilancia Alimentaria en Estados Unidos25 de lunes a viernes de 8 a 17 hs.

Administración Nacionalde Laboratorios e Institutos de

Salud• Es un organismo público dependiente del

Ministerio de Salud de la Nación Argentina quetiene como objetivo participar en políticascientíficas vinculadas en los aspectos sanitariodel ámbito público

• - Nuclea y coordina institutos, laboratorios y centros de saludlocalizados en distintos lugares del país.

- Actúa como institución nacional de referencia para la prevención,control e investigación de patologías

- Lleva a cabo investigaciones de específicos agentes patógenos.- Realiza estudios epidemiológicos

www.anlis.gov.ar

Informe epidemiológico de la ANLIS:

¿Que es la epidemiología?

Estudios de la distribución y los determinantesde estados o eventos (en particularenfermedades) relacionados con la salud y laaplicación de esos estudios al control deenfermedades y otros problemas de salud.(según la OMS)

•

Vías de transmisión

• Horizontal: Respiratoria, Salival, Fecal Oral,Cutánea, Sexual, Sanguínea, Oftálmica,Zoonótica

• Vertical: pasaje transplacentaria

Enfermedad y EpidemiologíaInteracción entre el cuerpo humano y los diversos gérmenes

Salud y enfermedad

Defensas humanas Mecanismos patogénicosde los gérmenes

ENFERMEDADPersona infectada Recuperación completa

Daño temporarioDaño permanenteMuerte

PATOLOGÌA Estudio científico de las enfermedades

ETIOLOGÌA Causa de la enfermedad

PATOGENIAProvoca cambios estructurales y funcionales causados porenfermedad y de sus efectos finales sobre el organismo.

la

INFECCIÓN Invasión o colonización de cuerpo pormicroorganismos patógenos. (OPORTUNISTAS?)

ENFERMEDAD Aparece cuando la infección producecambios en el estado de salud.

SALUD (Definición según OMS 1946): "Estado de completobienestar físico, mental y social y no solamente la ausenciaenfermedad"

de

• Síntomas: cambios en la función corporal (dolor omalestar).Cambios subjetivos.Signos: cambios objetivos, que se pueden observar ymedir (cuantificar). Lesiones, tumefacción, fiebre,parálisis, etc.Síndrome : conjunto específico de signos o síntomasque pueden acompañar una enfermedad particular.

•

•

El Diagnóstico de una enfermedad se logra a través dela evaluación de los signos y los síntomas, junto a losresultados de las pruebas de laboratorio.

Aparición de una enfermedadIncidencia: es el nº de casos nuevos que surgen en•un área geográfica y período de tiempo determinadoEs un indicador de la diseminación de la enfermedad.

• Prevalencia: esárea geográfica

la proporción de personas que en uny período de tiempo establecido,

sufren una determinada enfermedadnº de los que padecen el trastornonº total de los habitantes del área)

GRADO DE COMPROMISO DEL HUESPED

• Sepsis es una enfermedad inflamatoria tóxica que se originaen la diseminación de microorganismos o sus toxinas,de un foco infeccioso.

a partir

• Septicemia es una infección sistémica causada por lamultiplicación de patógenos en la sangre.

• Bacteriemia es la presencia de bacterias en la sangre

• Toxemia es la presencia de toxinas en la sangre

• Viremia es la presencia de virus en sangre

INFECCIONES HOSPITALARIAS(NOSOCOMIALES)

• 5-15% de pacientes hospitalizados adquierenalgún tipo de infección nosocomial.Microorganismos presentes en el hospitalHuésped comprometidoCadena de transmisión

•••

MECANISMOS DE PATOGENICIDADMICROBIANOS

• PatogenicidadCapacidad de causar enfermedad al

defensas del huéspedsuperar las

• VirulenciaGrado o magnitud del daño que puede provocar

Cantidad de Microorganismos Invasores

• DI 50 indica la virulencia de un microorganismo (indica ladosis infecciosa para el 50% de una población de muestra)Ej. Bacillus anthracis puede causar infección por tres puertas de entradadiferentes.––

DI 50 a través de piel (carbunco cutáneo) es de 10 a 50 esporas.DI 50 por inhalación (carbunco respiratorio) es por aspiración de10.000 a 20.000 esporas.DI 50 en el caso del carbunco gastrointestinal es por la ingestión de250.000 a 1.000.000 de esporas.

–

• DL50 (dosis letal para el 50% de una población de muestra).Esta nomenclatura se usa para la potencia de una toxina. ej.0,03 ng/kg es la dosis letal en ratones para botulismo.

BACTERIOLOGÍA

• Microorganismos unicelulares que presentan un tamaño dealgunos µm de largo y diversas formas

• Son procariontes y por lo tanto no tienen núcleo, ni organelascitoplasmáticas

• Poseen una pared compuesta de peptidoglicano

• Muchas de ellas poseen flagelos u otro sistema dedesplazamiento y son móviles

• Son organismos de vida libre (excepto Chlamydia y Rickettsia)

• Se dividen por fisión binaria

BACTERIAS

Diferencias entre Procariontes y Eucariontes

CLASIFICACIÓN DE LASBACTERIAS

• Fenotípica: (propiedades reales y expresadas)morfología microscópica, morfologíamacroscópica, biotipo, serotipo, antibiograma.

• Genotípica: (propiedades potenciales) hibridaciónADN, análisis de secuencias de nucleótidos,análisis plásmidos, análisis fragmentos de ADNcromosómico.

• Analítica: análisis pared celular, lípidos pared,proteínas de sostén, enzimas celulares.

TAXONOMÍA Y NOMENCLATURABACTERIANAS

• Taxonomía = Clasificar• Criterios genéticos:

- Homología ADN- Homología ARN

ribosómico desubunidad 16S

• Nomenclatura = Poner nombre• Criterios muy diversos• Primera palabra hace referencia

al Género (mayúsculas)• Segunda palabra hace referencia

a la especie (minúsculas)• Se escriben siempre en cursiva o

subrayado (Ej.: Staphylococcusaureus)

MORFOLOGÍA BACTERIANA

ULTRAESTRUCTURA BACTERIANA• Estructuras citoplasmáticas: ADN cromosómico, ARNm,

ribosomas y metabolitos.

• Envoltura Celular:Cápsula, matriz exopolisacaridaMembrana Externa (solo Gram -)Pared CelularEspacio Periplasmico (solo Gram -)Membrana Citoplasmática

• Otras estructuras: Flagelos, Pili, Fimbrias

RECORDAR!

Cromosoma Bacteriano: ADN doble cadena circular y superenrrollado quese encuentra en el nucleiode.

Tiene función de replicación, recombinación y expresión de genes.

LTA = Acido Lipoteicoico

COMPARACIÓN ENTRE LAS ENVOLTURAS DE Gram + y Gram -

Formas Bacterianas libres de pared

Cuando las bacterias se tratan1) con enzimas líticas que degradan la pared celular, por

ejemplo: lisozima, o2) con antibióticos que interfieren con la biosíntesis de

peptidoglicanos,se producen bacterias libres de pared celular.

Generalmente estos tratamientos generan organismos noviables, pero que son útiles en la experimentación in vitro.A las bacterias libres de pared que no pueden replicar se lesllama esferoplastos (cuando la membrana externa aún estapresente) o protoplastos (si la membrana externa ya no estápresente). Ocasionalmente estos tratamientos generanformas de bacterias libres de pared que pueden replicar (lasformas L).

RECORDAR

Las estructuras bacterianas pueden serproteicas, hidrocarbonadas o lipídicas, o

combinadas.Recordar cuál es la estructura bioquímicapermite entender su antigenicidad y su

resistencia al calor

BLANCO DE ACCIONDE LOS ANTIBIOTICOS

MECANISMOS DERESISTENCIA ANTIBIÓTICA

• Inhibición enzimática• Alteración del blanco ribosomal• Modificación de la permeabilidad de la pared• Extracción del antibiótico• Alteración de los sistemas de transporte• Modificación de los precursores de la pared• Mutación de las enzimas• Cambio de la estructura de las proteínas blanco

¿Es posible terminar con lasenfermedades infecciosas?

• La era antibiótica moderna se inició hace más de 60 años con eldescubrimiento de la penicilina y otras sustancias similares,capaces de eliminar las bacterias.

• Tras los primeros y extraordinarios resultados, la humanidadconcibió la idea de eliminar las enfermedades infecciosas

• Sin embargo, hoy en día, dicha meta sigue siendo una aspiracióndifícil de alcanzar e incluso poco probable a la luz de lassorprendentes estrategias desarrolladas por las bacterias parasobrevivir y hacerse resistentes a la acción de un gran número decompuestos antibacterianos.

¿Es posible terminar con lasenfermedades infecciosas?

• Mayor rapidez la aparición de cepas poco o nada sensibles, inclusoa los compuestos de última generación, como vancomicina.

• Los primeros reportes de resistencia fueron publicados, casisimultáneamente en 1940, por varios grupos de investigadoresindependientes.

• Para 1947, un alto porcentaje de las cepas de estafilococos aisladasen los hospitales de Estados Unidos y varios países europeos eraninsensibles a penicilina G.

• La respuesta de la comunidad científica al surgimiento de gérmenesresistentes, fue la acelerada producción y utilización de nuevosfármacos.

Bases genéticas de laresistencia bacteriana

Según la teoría de la selecciónnatural, la variabilidad genética delos organismos vivientes esesencial para su evolución y en elcaso de las bacterias, estefenómeno es el resultado de tresmecanismos

• las mutaciones puntuales• los cambios estructurales en el

material genético• la adquisición de fragmentos de

ADN procedentes de otrasbacterias.

GENETICABACTERIANA

• Clon: conjunto de bacterias que derivan de un ancestroen común, como resultado de una misma cadena dereplicación.

• Especie bacteriana: circunscribe un grupogenéticamente similar de cepas individuales (una especiebacteriana se compone de diferentes clones).

• Variación GenéticaFenotípicas: modificación de una o varias

características como respuesta a estímulos presentes enel medio ambiente (mecanismo de adaptación).Genotípicas: variación del material genético

(mutaciones).

Mecanismos de regulación de la expresiónde genes

Regulación por reordenamiento: amplificación, variaciónde fase, variación antigénica.Regulación transcripcional: activación y represión degenes.Regulación post transcripcional: modificación que haceactiva una molécula inactivada. Por ejemplo: activaciónpor proteolisis de proteínas.

Recombinación HomólogaSe produce entre secuencias de ADN estrechamente

relacionadas y que en general se sustituye una secuenciapor otra.

División Celular

PlásmidosADN circular extracromosomal, que se replica de forma

autónoma con respecto al cromosoma bacteriano.Su función es contener información para la adaptación de labacteria al medio y para su evolución (Ej: resistencia a ATB)

Transposones: segmentos deADN con capacidad demovilizarse de forma autónomaen el genoma y que contienegenes estructurales (Ej: factoresde virulencia y para adaptaciónal medio). Mutan y se integrana cromosomas o plasmidos.

Las bacterias puedenintercambiar material genético

mediante tres mecanismos:

• Transformación (DNA desnudo)

• Conjugación (Contacto bacteriano)

• Transducción (Bacteriófago)

TRANSFORMACIÓN

CONJUGACIÓN

Bacteriófagos

Conocidos también como "fagos", son parásitosintracelulares (virus) de bacterias.Están constituidos por DNA o RNA y proteínas. Si lisan ala bacteria infectada se habla de una infección lítica; si seintegran al genoma bacteriano y se encuentran en estadoquiescente (profagos con el potencial de producir fagos)se habla de una bacteria en estado lisogénico.

TRANSDUCCION

RELACIÓN HUÉSPED – BACTERIA

CONCEPTOS BÁSICOS SOBRE LAS ENFERMEDADES INFECCIOSAS

MODO DE ENTRADA DE LOS ORGANISMOS ENUN HUESPED

• Mucosas

• Piel

• Vía Parenteral

Entrada, Transmisión y Salida

Entrada, Transmisión y Salida

Los patógenos se pueden clasificar en:• Primarios: producen enfermedad en individuo sano• Oportunistas: necesitan de una condición predisponente• Componentes flora normal del huésped

Flora normal y patógena

Patogenicidad Bacteriana

• Adherenciaadhesinas o ligandos que se fijan especificamentea receptores de superficie.fimbrias

• Mecanismos de evasión de las defensas delhuésped

• Mecanismos de los patógenos bacterianospara dañar las células huésped

Patogenicidad BacterianaMecanismos de evasión de las defensas delhuésped

Cápsulas: resiste las defensas del huésped porque altera lafagocitosis.

Componentes de la pared celular: ej. proteína M en Streptococcus pyogenescontribuye a resistencia bacteriana a la fagocitosis leucocitaria.

Enzimas: exoenzimascoagulasas : coagulan el fibrinógeno en la sangre.quinasas: degradan la fibrina (fibrolisina)hialuronidasa: hidrolizan el ácido hialurónico (polisacárido que une células del tejido

conectivo).colagenasa: degrada el colágeno del tejido conectivo de los músculos.IgA (algunos patógenos producen IgA proteasa)

Variación antigénica

Penetración del citoesqueleto de la célula huésped Invasinas, modificanlos filamentos de actina cercanos al citoesqueleto celular (usan también una glucoproteínacadherina como puente entre células)

Patogenicidad BacterianaMecanismos de Daño de las células del huésped

• Utilización de los nutrientes del huésped: Sideróforos

• Daño directo en la cercanía inmediata de la invasión

• Producción de toxinas

• Inducción de reacciones de hipersensibilidad

Factores: toxinas, exoezimas

Producidos por la bacteria

DAÑOEvasión Signos y síntomas

Producidos por el huésped

Inflamación

Hipersensibilidad

Autoinmunidad

ENFERMEDAD

Infección vs. Enfermedad Infecciosa

FISIOLOGÍABACTERIANA

Requerimientos nutritivos

Macronutrientes:Carbono, Nitrógeno, Fósforo, Azufre,Potasio, Magnesio, Hierro, Agua

Micronutrientes:Cobalto, Zinc, Cobre, Manganeso

Factores de crecimiento:Aminoácidos, Vitaminas y Bases

nitrogenadas

GRUPOS NUTRICIONALESGrupo

nutricionalFuente decarbono

Fuente deenergía

Fotoautótrofos CO2 Luz

Fotoheterótrofos Compuestoorgánico Luz

Quimioautótrofos CO2Sales

inorgánicas

Quimioheterótrofos Compuestoorgánico

Compuestoorgánico

TIPOS DE REACCIONES METABÓLICAS

Reacciones energéticas

Reacciones de biosíntesis

Reacciones de polimerización

Reacciones de ensamblaje

REACCIONES ENERGÉTICAS:FASES

Digestión extracelular

Paso a través de la envoltura: Difusión simple Difusión facilitada Transporte activo

Degradación y obtención de energía

REACCIONES ENERGÉTICAS

Vía glucolítica de EmbderMeyerhof

Vía pentosa fosfato Ciclo de Krebs

Vía de Entner Doudoroff

REACCIONES ENERGÉTICAS

Fermentación: Aceptor final de e- compuesto orgánico 1 glucosa/2 ATP

Respiración: Aceptor final de e- compuesto inorgánico 1 glucosa/38 ATP

Tipo debacteria

Crecimiento ProducciónCatalasa

Superoxidodismutasa

(SOD)

VíametabólicaAerobio Anaerobio

Aerobiaestricta

+ - + Respiración

Anaerobiaestricta

- + - Fermentación

Facultativo + + +Respiración/Fermentación

Indiferente/Aerotolerante

+ + + Fermentación

Microaerófilo (+) + (+) Fermentación

REACCIONES DE BIOSÍNTESIS

Formación de elementos estructurales:

Ácidos grasos

Azúcares

Aminoácidos

Nucleótidos

REACCIONES DE POLIMERIZACIÓN YENSAMBLAJE

Formación de macromoléculas:ADN, ARN, proteínas,

peptidoglicano, fosfolípidos,LPS

Formación de las distintasestructuras celulares

REGULACIÓN DEL METABOLISMO

Regulación de la actividadenzimática

Regulación de la síntesisenzimática:

Represión Inducción

Supervivencia Bacteriana:por procesos de esporulación,motilidad y quimiotaxis

ESPORAS

• Más pequeñas quecélula vegetativa

• Metabolismo limitado• No se reproducen• Más resistentes a la

acción de agentesfísicos y químicos

ESPORULACIÓNBacteria

vegetativa

Septación

asimétricaENDOCITOSIS

FORMACIÓN DELA ENDOSPORA

Formación delcortex

Síntesis dela cubierta

Lisis célular.Liberación de

la espora

CRECIMIENTO BACTERIANO:TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

• Según su estado físico:- Líquidos o caldos- Sólidos (Agar al 1.5-2%)- Semisólidos

• Según crecimiento que permitan:- Enriquecidos- De enriquecimiento- Selectivos- Diferenciales

CRECIMIENTO BACTERIANO:FACTORES

1. Temperatura2. pH3. Medio de cultivo4. Inóculo

TEMPERATURA

pH

A. Acidófilos

B. Neutrófilos

C. Alcalófilos

ESTUDIO CUALITATIVO DELCRECIMIENTO BACTERIANO

• Medios líquidos:

Turbidez

• Medios sólidos:

Colonias

COLONIAS BACTERIANAS. TIPOS

Forma

Superficie

Bordes

CIRCULAR IRREGULAR FILAMENTOSA RIZOIDE

CONVEXA PLANA UMBILICADA CRATERIFORME

REDONDEADO ONDULADO FILAMENTOSO ESPICULADO LOBULADO

1: alfa-hemólisis

alfa-hemólisis

Cultivo cofluente

Colonias aisladas

beta-hemólisis

2: beta-hemólisis

Colonias aisladas

DIAGNOSTICOBACTERIOLOGICO

Para realizar un diagnostico microbiológico, sedeben seguir secuencialmente los siguientes pasos:

1- Toma de muestra

2- Microscopía

3- Aislamiento en cultivo del agente etiológico

4- Identificación

5- Prueba de sensibilidad a los ATB

TOMA DE MUESTRA• Muestra directa: se extrae directamente del órgano o

cavidad infectada. Son sitios que en condicionesnormales son estériles como pulmón, LCR, pleura.

• Muestra indirecta: orina, esputo, que se emiten demanera espontánea y que atraviesan una región quecontiene flora normal.

• Muestra en sitios con flora normal: intestino yfaringe. Se investigan bacterias que normalmente no seencuentran en personas sanas. Ej: Salmonella, Shigella,S.pyogenes.

Seleccionar medio de transporteadecuado y conservación de la muestra !!!

MICROSCOPIA

• Observación en fresco• Extendidos Teñidos

• Tinción de Gram• Tinción de Ziehl Neelsen

• Microscopio de fluorescencia• Microscopio de contraste de fase• Microscopio de campo oscuro

Tinción de Gram

Tinción de Ziehl Neelsen Microscopia de Fluorescencia

Microscopia de campo oscuroMicroscopia de contraste de fase

CULTIVO

• Medios sólidos (agar)• Medios líquidos (caldos)

El objetivo es recuperar y aislar elmicroorganismo responsable de la patogenia

Tener en cuenta los siguientes parámetros:temperatura, pH, Oxigeno

Identificación por pruebasbioquímicasConsiste en baterías de pruebas bioquímicas que determinan lacapacidad de un aislamiento bacteriano de utilizar determinadossustrato, de producir un metabolito particular, de fermentar

azucares,descarboxilar, hidrolizar o desaminar aminoácidos

• Prueba de oxidasa• Prueba de catalasa• Prueba de manitol• Reacción de CAMP• Prueba de ureasa• Prueba de coagulasa

Identificación por pruebasserológicasConsiste en detectar antígenos especificos de las bacterias

Permiten diferenciar entre especies microbianas y entrecepas dentro de una misma especie

Cepas con diferentes antígenos se denominanSEROTIPOS,

SEROVARIEDADES (serovares) o BIOVARIEDADES(biovares)

Se puede detectar por ELISA, Aglutinación, Western Blot

Identificación por Fagotipia

Consiste en enfrentar la bacteria aislada adiferentes bacteriófagos

Se producen áreas de lisis

• Perfiles de ácidos grasos• Citometria de flujo• Composición de bases del ADN• Huellas del ADN (Fingerprint) Microbiología forense• PCR• RFLP (polimorfismo de longitud de fragmentos de restriccion)• Hibridación del acido nucleico (Southern Blot)• Micromatrices (chips) del ADN• Ribotipificacion y secuenciación del ARN ribosómico (rRNA)• Hibridación fluorescente in situ (FISH)• Claves dicotómicas• Cladogramas• Bioinformatica

Pruebas de sensibilidad a ATB(Antibiograma)

• Métodos de difusión en agar (Método Kirby Bauer)(Cualitativo)

• Métodos de dilución de antimicrobiano(cuantitativo)

Concentración Inhibitoria Minima (CIM): minimaconcentración de ATB que inhibe el crecimiento bacteriano

Concentración Bactericida Minima (CBM): minimaconcentración de ATB para eliminar el 99.9% de bacterias en24hs.

Kirby Bauer

CIM

SEROLOGIA

La serología nos permite determinar el título deanticuerpos presentes en el suero del paciente

Se emplea generalmente cuando:• El agente etiológico no es cultivable• Requiere cultivos específicos no disponibles en la

mayoría de los laboratorios• El paciente se encuentra en una etapa de la infección

en la cual el agente etiológico no es viable.

Bioseguridad

Bioseguridad“doctrina de comportamiento encaminada a lograr actitudes yconductas que disminuyan el riesgo del trabajador de la salud deadquirir infecciones en el medio laboral”

Puntos Clave

• Compete a todas las personas que seencuentran en el ambiente sanitario.

• Práctica Rutinaria• Deben ser cumplidas por todo el

personal de salud.• Independiente del riesgo.

Principios de la Bioseguridad1) Universal: Aplicadas a todas las personas independiente de presentar o noenfermedad.

Involucra a todos los pacientes, independiente de conocer o no suserología.

Todo el personal debe seguir las precauciones estándares para prevenirla exposición de la piel y de las membranas mucosas, en todas las situaciones quepuedan dar origen a accidentes, estando o no previsto el contacto con sangre ocualquier otro fluido corporal.

2) Uso de Barreras: evitar la exposición directa a sangre y otros fluidos orgánicospotencialmente contaminantes, mediante la utilización de materiales adecuados.

3) Medios de eliminación de material contaminado: conjunto de dispositivos yprocedimientos.

InfeccionesAsociadas a losCuidados de la

Salud(IACS)

IACS:

1.Infección Intrahospitalaria

2. Hemodiálisis

3. Hospital de Día

4. Rehabilitación

5. Internaciones Domiciliaras

6. Geriátricos

30 díasposteriores alinicio de la

terapia

Infecciones Hospitalarias/NosocomialesToda infección adquirida durante la internación y que no estuviese presente oincubándose al momento de la admisión del paciente (…) En el caso de lasheridas quirúrgicas la infección puede manifestarse luego del alta del paciente,hasta 30 días o un año dependiendo de la colocación o no de prótesis.

2°guias prácticas, OMS, 2002

Afecta 10% de lospacientes internados

Ejemplos de Infecciones Nosocomiales

ITU: Infección Tracto UrinarioISQ: Infección Sitio QuirúrgicoIRB: Infecciones RespiratoriasBajas

Prevención1.Lavado de Manos2.Guías de prevención3.Precauciones estándar4.Aislamiento5.Uso correcto de Antibióticos6.Inmunización del Personal7.Higiene Hospitalaria8.Educación.

Lavado deManos

¿Porqué es importante?Disminución del 30% de Infecciones Intrahospitalarias

Disminución de la Morbimortalidad

Disminución de la inversión pública para el tratamiento delas infecciones nosocomiales

2002,OMS

Día Mundial delLavado de Manos:

18 de octubre.

Flora Colonizante - Residente• Aislados en la piel de la mayoría de los individuos

• Residentes Permanentes

• NO REMOVIBLES por fricción mecánica

Microorganismos

Estafilococo coagulasa negativa,Corynebacterium spp.Propionibacterium spp.Enterobacterias

Flora Transitoria• No presente en todos los individuos (con respecto a sus especies)

• Transmisibles por contacto

• REMOVIBLES por fricción mecánica

• DESTRUCCIÓN con Antisépticos

Microorganismos

Staphylococcus aureus,Streptococcus pyogenesBacilos gram negativos (ej.E. Coli)Candida spp

Clasificación de Lavados de Manos

1. Lavado Social

• REMUEVE Flora Transitoria

• Remueve suciedad

• Material: Jabón de tocador o Detergente

• Duración: 10-15 segundos.

• Usos: inicio del día, salida de sala, alimentación, al estornudar y toser.

• NO PARA ATENCIÓN DE PACIENTES.

2. Antiséptico

• REMOVER y DESTRUIR Flora Transitoria

• Materiales: Jabón o Detergente antimicrobiano. Preparación alcohólica.

• Duración: 10-15 segundos.

• Usos: Antes y después de realizar procedimientos invasivos, curaciones,aspirar secreciones, manipuleo de catéteres o Asistencia MecánicaVentilatoria, extraer sangre, entrar en sala y aislamientos y al salir.

Procedimiento

2°guias prácticas, OMS, 2002

2°guias prácticas, OMS, 2002

Uso del “Alcohol en Gel”

Boletín Informativo N° 210 , Centro de Información de Medicamentos – CIM, Universidad de Rosario, 2014

3. Quirúrgico

• REMOVER y DESTRUIR Flora Transitoria

• REDUCIR Flora Residente

• Material: Jabón o detergente antimicrobiano + Esponja para friccionar

• Duración: > 120 segundos.

• Usos: Antes y después de cada cirugía.

• Retirar joyas.• NO usar uñas postizas.• Quirúrgico: mangas por encima del codo.

Usar agua tibia. Aplicar 5 cc de jabón antimicrobiano

Humedecer las manos

Siempre con las manos hacia arriba

Friccionar y hacer espuma sobre manos ymuñecasFrotar entre los dedos.Quirúrgico: Usar esponja estéril

Friccionar hasta encima delpliegue de codo

Enjuagar siempre con manos hacia arribaCon abundante agua

Secar a conciencia con toalla descartableQuirúrgico: A conciencia con papel otela estériles.

Cerrar la canilla sin tocarla con la mano,use la toalla de papel.Quirúrgico: cerrar con el codo.

PrecaucionesEstándares

Son las precauciones que deben aplicarse atodos los pacientes independientemente de sudiagnóstico, a fin de minimizar el riesgo detransmisión de cualquier tipo demicroorganismo, del paciente al trabajador de lasalud y viceversa.

Precauciones Estándares

HIGIENE de MANOS

SIEMPRE• Antes y después delcontacto con 1

paciente• Entre pacientes• Antes y después deluso de guantes.

CUBRA su TOS

• Si tose o estornudacubra su boca y nariz

con pañuelo descartable.

GUANTES

• Antes del contacto conmucosas, piel no intacta,

fluidos corporales.• Retirar inmediatamente luego

del uso.

CAMISOLIN

Usar duranteprocedimientos que

puedan causarsalpicaduras o

aerosoles.

BARBIJO QUIRURGICO YPROTECCION OCULAR

Usar durante procedimientos quepuedan causar salpicaduras o

aerosoles.

ISTRUMENTAL NO CRÍTICO

Manejar equipo no estéril con cuidado paraevitar contaminación del personal y de otros

pacientes. Retirar en forma inmediata yprocesar (según normas) los elementos

contaminados

SALUD DEL PERSONAL

No encapuchar ni manipularelementos punzo-cortantes.

Desechar endescartadores rígidos.

AISLAMIENTO

No indicadoSolo para pacientes enaislamiento específico.

NO USAR

Varios anillos,pulseras, relojes.

Uñas largas, postizas opintadas.

Pelo suelto.

Precauciones:Aislamientos

• Ayudan a prevenir la propagación de microorganismos en el hospital

• Basados en la Transmisión del patógeno

Precauciones: Aislamientos

Asilamiento de Contacto

Aislamiento Por Gotas

Aislamiento Por Aerosoles

1. Aislamiento por Contacto• Sospecha o certeza de infección por patógeno muy transmisible.

• Asociado a Patógeno Multiresistente:1. SARM de la Comunidad2. Klebsiella carbapenem resistente3. Acinetobacter4. Pseudomona5. Enterobacter kpc6. Virus sincial Respiratorio7. Herpes Virus8. Ébola.

• Procedimiento:Lavado de Manos ---- Camisolín ---- Guantes

• Material crítico solo para el uso de ese paciente.

• Habitación individual o cohorte.

2. Aislamiento por Gotas

• Patógeno que se transmite por hablar, toser, estornudar, procedimiento Vías Aéreas

• Microorganismos: H. influenzae, N. meningitidis, Neumococo B-láctamicoResistente, Nuemonia por Mycoplasma, Influenza, VSR, B. pertusis, C. diphterea,Parvo B19, Fiebres hemorrágicas.

• No Neumonía por Neumococo. Porque?

• Procedimiento:Lavado de Manos --- Barbijo quirúrgico --- Antiparras para procedimiento

• Habitación individual. Puerta cerrada.

3. Aislamiento por Aerosoles

• Patógeno se transmite por el aire, recorren grandes distancias por corrientes.

• Microorganismos: M. tuberculosis, Mycobacterias no tuberculosas, Varicela zóster,Sarampión, Herpes Zóster diseminado, Influenza H1N1 cuando aerosoliza.

• Patógeno < 1 micrón.

• Procedimiento:Antes de ingresar: Barbijo N95 --- Lavado de Manos --- Reutilizable con el mismo

paciente hasta su externación.

• Habitación individual

• Aire filtrado: EPA N95.

Sospecha para Aislamiento

-Infección respiratoria en niños(*)

-Meningitis

-Fiebre + petequias o equimosis.

-Tos persistente severa o paroxística en época de coqueluche

-Epiglotitis

Aislamiento de Gota Barbijo quirúrgico

-Vesículas (*)-Fiebre + erupción máculo-papular + catarro.

-Fiebre/tos/infiltrado pulmonar con antecedentes o contacto con TBC.

-Fiebre/tos/infiltrado pulmonar sugestivos de TBC.

-Infiltrados pulmonares en pacientes HIV (+).

-Patología respiratoria crónica sin diagnóstico.

Aislamiento de Aerosoles Barbijo N95

-Infección respiratoria en niño(*)

-Vesículas (*)

-Diarrea aguda.

-Infección o colonización por gérmenes multiresistentes.

-Abscesos cutáneos o heridas abiertas.

-Gripe

Aislamiento de Contacto

RESIDUOS

DESCARTADORES

• Se considera descartadores al recipiente donde sedepositan, con destino a su eliminación porincineración, todos los materiales corto punzantes. Nodeben ser reutilizados.

• Debe estar hecho con material resistente a lospinchazos y compatible con el procedimiento deincineración sin afección del medio ambiente.

RESIDUOSBOLSA ROJA

Guantes, algodón, gasa, venda.

Material descartable.

Contenedor de material punzo-cortante.

Frasco de remedio parenteral

Material con restos orgánicos.

Restos de quirófano y anatomía patológica.

Residuos de laboratorio.

Pañales.

Todo lo usado en aislamientos

BOLSA NEGRA(Residuos domiciliarios)

Toalla de papel.

Caja de remedios, blister

Papeles, cartones.

Material administrativo.

Latas, botellas.

Restos de alimentos.

DESECHO DE RESIDUOS LÍQUIDOS

Los residuos líquidos (sangre, heces, vómitos, orina,secreciones y otros líquidos corporales ) pueden desecharsepor el inodoro, Chatero y/o equipo sanitario similar. Esto esposible cuando los efluentes son vertidos a la red sanitaria: siel establecimiento no cuenta con conexión a la red sanitariadeben ser tratados previamente.

NO DEBEN DESECHARSE POR EL INODORO PORNINGÚN MOTIVO: materiales como: restos de suturas,gasas, algodón, agujas, papel, cartón, material de polietilenoetc. (Estos ocluyen las tuberías de desagote, impidiendo lanormal circulación de los efluentes)

Guía de prevención deinfecciones hospitalarias,2° edición, OMS, 2002

• ANTES O DURANTE EL USO : 15%

• DESPUÉS DEL USO, ANTES DE DESECHAR: 68%

• DURANTE O DESPUÉS DE DESECHAR: 14%

REENFUNDAR LA AGUJA ES LA CAUSA DE 2/3 DELOS ACCIDENTES

NO reencapuchar las agujas