avances en los protocolos para diagnóstico de la leucodistrofia metacromática isidro arévalo

1

Auditorio Ligia Aguirre de Sánchez

3° piso, Fundación Cardiovascular.

29 de septiembre de 2012, Bucaramanga , Colombia.

Centro de Medicina

Genómicade la FCV

PRIMER DÍA MUNDIAL

DE LAS LEUCODISTROFIASEN COLOMBIA

http://www.fundacionlaes.org/

Isidro Arévalo Vargas M. Sc

Departamento de Ciencias Biológicas

Centro de Investigaciones en Bioquímica

Universidad de los Andes

Bogotá, Colombia 2

Las enfermedades de depósito lisosomal (EDL) pertenecen a un grupo

de errores innatos del metabolismo que se caracterizan por el bloqueo en

una ruta metabólica de una o varias enzimas lisosomales.

PRIMER DÍA MUNDIAL DE LAS LEUCODISTROFIAS EN COLOMBIA. 29 de septiembre de 2012, Bucaramanga , Colombia.3

(Hayashi, Nakamura et al. 2011).

(Figura modificada el día 14 de mayo de 2012 de Pollitt et.al., 1997)

Figura tomada el dia 16 de mayo de de gauchercare.com

Acumulación

No producciónAusencia

Clasificación ruta

afectada:

Mucopolisacaridosis

Esfingolipidosis

Glucoproteinosis

(Martins 1999; Mehta, Beck et al. 2006)

Modo de herencia:

Autosómico dominante

Autosómico recesivo

Ligado al cromosoma X.


Frecuencia

Muy baja

Gaucher 1:57000

Sialidosis 1:4.2 Mill.

• Distrofia muscular de Duchene

• Hunter (MPS II)/ Fabry• Gaucher

(Marsden and Levy 2010). (Staretz, et al., 2009).

Alta incidencia entre 1:5000-7000 recién

nacidos


(Kohlschütter & Eichler, 2011)

DETERIORO

SUSTANCIA

BLANCA.

Enfermedades geneticas

Perdida de habilidades

adquiridas.

Devastación

neurologica.

Degeneración

mielina vainas

SNC.

Defecto: Sintesis

y mantenimiento

de mielina.

Progresivo deterioro


Desmielinización

(Pérdida de mielina

formada previamente

normal tanto morfológica

como funcionalmente)

Dismielinización

(Anormalidades en la

formación y mantenimiento

de mielina).

Sustancia blanca del CNS.

CLASIFICACIÓN BIOQUIMICA

1) Metabolismo lipídico.

2) Proteínas

3) Ácidos orgánicos

4) Otras causas

(Tsuji, 2007; Kanekar and Gustas, 2011).

METABOLISMO LIPIDICO DESORDEN PROTEÍNA

MIELINA

DESORDENES ACIDOS

ORGANICOS

OTRAS

LEUCODISTROFIAS

Adrenoleucodistrofia Pelizaeus-Merzbacher

(Ligado-X).

Def. Proteolipido proteico.

Canavan (AR).

Def. Aspartoacilasa

Alexander.

Def. Proteína gliofibrilar

ácida (GFAP)

Krabbe Desvanecimiento de la

sustancia blanca.

Síndrome de Sjögren-

Larsson (AR).

Def. Lipoaldehído

deshidrogenasa

Arteriopatía cerebral

autosómica dominante

con infartos subcorticales

y leucoencefalopatía

Xantomatosis

cerebrotendinosa (AR).

Def. Esterol 27-hidroxilasa.


(Tsuji, 2007.)

Alteración en la ruta de los esfingolípidos

en el metabolismo lisosomal.


Enzima Arilsulfatasa A (ASA)

Cofactor Saposin B (SapB)

(Kolter and Sandhoff , 2006)

(Figura tomada de Huwiler, Kolter et al. 2000)

(Natowicz, Prence et al. 1996;

Cesani, Capotondo et al. 2009)

(Deconincka, Messaaoui et al. 2008).

Deficiencia


Imagen tomada de internet el día 15 de mayo de 2012 de http://www.glycoforum.gr.jp/index.html

(Saravanan, Büssow et al. 2007).

(Baumann, Turpin et al. 2002; Colsch, Afonso et al.

2008; Faust, Kaye et al. 2010)

Sulfatidios.

DesmielinizaciónOligodendrocitos (SNC).

Células de Schwan (SNP).

Enzima ASA / Cofactor SapB.

Catalizan cerebrósido 3-sulfato (Sulfatidio).

Componente principal en la formación de la mielina

4%. (Riñón, epitelio ducto biliar).

(Gieselmann, 2008)

La desmielinización generalizada es lo que conlleva a presentar un deterioro en la

función neurológica y por último la muerte.


(Tan, Fuller et al. 2010).

Tres etapas (infantil, juvenil y adulta)

Deterioro progresivo de

varias destrezas

adquiridas.

•Hipotonía

•Marcha inestable

•Retraso mental

(Wang, 2007)(Von Figura, Gieselmann et al. 2001)

Deterioro rendimiento:

laboral o escolar.

Trastornos emocionales,

comportamiento.

Síntomas psiquiátricos

Estado vegetativo en todas las fases de la

enfermedad(Kolter and Sandhoff 2006).

Cromatografía capa fina (CCF)

• Valoración de sulfatidios en la orina.

Actividad de ASA en

leucocitos.

• Colorimétrico.

• Fluorométrico.

Biología Molecular.

• Mutaciones.

• Pseudodeficiencias (PD-ASA).

Deficiencia Múltilple de Sulfatasas

• Fluorométrico.


(Rafi, Coppola et al. 2003)

(Baum, Dodgson et al. 1959; Cordoba 1991)

(Shapira, Blitzer et al. 1989)

(Gieselmann, Polten et al. 1989; Qu, Miller

et al. 1997; Pedron, Gaspar et al. 1999)

(Artigalás, Roberto da Silva et al. 2009)

Limitaciones en cuanto al acceso de los pacientes a los procesos de diagnóstico.


Estudios aislamientos leucocitarios.

Son muy difíciles de cumplir en algunas ciudades intermedias, lo que genera una

serie de inconvenientes que en un buen número de casos dejan las muestras

inservibles para procesos de análisis bioquímico.

Estandarizar.

Protocolo fluorométrico mas sensible.

Establecer y comparar valores.


Resolución No. 008430 de 1993 de

la República de Colombia.

Consentimiento informado.

85 muestras de sangre total de

pacientes control (1-68 años).

(2009-2012) 85 muestras de

individuos TND (0.15-47 años).


Pacientes remitidos. Daño

sustancia blanca.

Neuroimágen.

Muestras de orina.

Extracción sulfatidios –

Cromatografía (Rafi, Coppola et

al., 2003).

POSITIVO.

Muestra sangre total.

Aislamiento leucocitos

(Shapira et al., 1989)

Prueba FL (Shapira et al., 1989).

4-metilumberilferona sulfato (4-MUS)

Análisis estadístico.

SPSS

Prueba COL (Baum, et al 1954 y Córdoba, 1995)

p-nitrocatecol sulfato (p-NCS)

Prueba β-GAL (Shapira et al., 1989.)

4-metilumbeliferona-β-D-galactosidasa

Prueba FL ASA B GSSPF

Valoración proteína. FL-

BCA

NEGATIVO.

Otra enfermedad neurodegenerativa.


CCF. Prueba sulfatidios diagnostico

diferencial de la LM.

Cofactor SapB.

PD-ASA.

Método de tamizaje.


4 Pacientes detectados ASA.

4 Pacientes confirmados LM.

2 Pacientes confirmados GM1. 7.05 % alto riesgo.

Es importante concluir que ante casos en los cuales se tengan la prueba FL

positiva de ASA y la presencia de sulfatidios es necesario que se haga al menos

una prueba de una sulfatasa diferente, con el fin de poder descartar una posible

DMS.

Método tamizaje GSSPF. Ventajas sobre los leucocitos con respecto al manejo,

transporte y mantenimiento de la muestra.


Es importante que nosotros como laboratorio de referencia a nivel nacional e

internacional tengamos las técnicas apropiadas para la detección temprana y de

esta manera que el paciente y la familia tengan la oportunidad de recibir

tratamiento oportuno y mejorar su calidad de vida, que en últimas es nuestro

principal objetivo.



Dedicación especial a todas las familias y

pacientes que fueron participes de este estudio.

Familia Zapata Moncada, Medellín.

Familia Henao García, Bogotá.

Centro de Medicina

Genómicade la FCV

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“No pretendamos que las cosas cambien, si siempre hacemos lo mismo.

La crisis es la mejor bendición que puede sucederle a personas y países, porque

la crisis trae progresos. La verdadera crisis es la crisis de la incompetencia.

El inconveniente de las personas y los países es la pereza para encontrar las

salidas y soluciones. Hablar de crisis es promoverla, y callar en la crisis es

exaltar el conformismo. En vez de esto, trabajemos duro. Acabemos de una vez

con la única crisis amenazadora, que es la tragedia de no querer luchar por

superarla”.

Albert Einstein

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avances en los protocolos para diagnóstico de la leucodistrofia metacromática isidro arévalo

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