REACCIONES DE NEUTRALIZACION

ANTIESTREPTOLISINAS

EQUIPO 8

Batalla Gonzlez Eder AlexisBolaos Rosales Diana AlejandraContreras Arroyo Nubia AmishaeEspinoza Ramrez IsmaelRangel Garca Gabriela ElenaUNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICOFACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZALABORATORIO DE INMUNOLOGIA

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Estreptococos

Flora normal de los seres humanos

Cocos Gram (+)

No mviles, pueden presentar cpsula de cido hialurnico

Catalasa y Oxidasa negativa

Crecen en medios de cultivo enriquecidos con sangre.

Anaerobios facultativos

Habitan Zonas del cuerpo, capsula representa factor de virulencia importante las especies que poseen capsula son mas virulentas, catalasa y oxidasa diferencia la familia estreptococacea de la de estafilococacea. Son mas exignetes por eso crecen en medios enriquecidos con ssangre 2

Cocos teidos cadenas cortas o largas depende de la especie3

Fermentadores de glucosa c. Lctico El crecimiento y la hemlisis se favorecen con 10 % de CO2 a 35 C

Son menos resistentes que los estafilococos

Va a ser favorecido con ambiente de microaerofilia 4

Composicin Antignica YFactores de Virulencia

Menebramna celular, parede de petido glicano, acido lipoteicoico, CHS sustanica C importante para clasf . Dependiendeo del CHS sera el espreptococo especifico.Proteina M protege a bacteria de fagocitosis, fimbria ayuda a la herencia. Capsula ABC, acido hialurinico, cialico, sust. extracelualres factores de virulencia libera al medio exteriro estreptolisisna, ANDasa, hialuronidasa, exotoxina pirogenica.}Pared ceulra: cont. Acido lipoteicoico, proteinas R, T; la proteina asocioada a la proteina M (MAP) y el factor de opacidad (SOF) Proteina M: factor de virulencia, antigenica y de resistencia a la fagocitosis.La parte intermedia contiene el carbohidrato C Peptidoglicano respnsable de la rigidez6

Clasificacin

Patrones de HemlisisAlfa hemolticos: hemlisis totalBeta hemolticos: hemlisis parcial No hemolticos

Tipo de estructura antignicaGrupos de Lancefield

Propiedades bioqumicas

GURPOS DE LANCEFIELD; EN FUNCION DE ANTIGENOS DE HIDRATOAS DE CARBONO 7

El sistema de Lancefield es un sistema de clasificacin serolgica de los estreptococos. Est basado en la naturaleza antignica de los hidratos de carbono de su pared celular.

Grupo A, Grupo B, Grupo C, Grupo D, Grupo E, Grupo F, etc.

hemolticos usado internacionalmente . Grupo A - Streptococcus pyogenes Grupo B - Streptococcus agalactiae Grupo C - Streptococcus equisimilis, Streptococcus equi, Streptococcus zooepidemicus, Streptococcus dysgalactiae Grupo D - Enterococcus, Streptococcus bovis Grupo E - Streptococcus milleri y Streptococcus mutans Grupo F - Streptococcus anginosus Grupo G - Streptococcus canis, Streptococcus dysgalactiae Grupo H - Streptococus sanguis Grupo L - Streptococcus dysgalactiae Grupo N - Lactococcus lactis Grupo R&S - Streptococcus suis

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Estreptococos de importancia medica

A, amigdalitis, celulitis, D: heridas, enterococus faecalis s bovis 9

Estreptococos de importancia mdica

Estreptococos del grupo A ( S. pyogenes)

Es el grupo ms importante que interviene en la mayora de los procesos patgenos.

Beta hemolticos Antgeno polisacrido especficoPuede presentar cpsulaPortadores farngeos (nios y jvenes) 15 20 %Transmisin va area.

En la pared celular y membrana citoplasmtica se encuentran antgenos que presentan reactividad cruzada con antgenos tisulares humanos 11

La protena M: se libera de la pared bacteriana y forma agregados enormes en la sangre y tejidos debido a su habilidad para unirse al fibringeno.

Cuando se forman los agregados fibringeno protena M, estos se unen a las integrinas presentes en la superficie de los PMN y plaquetas.

Esta unin produce la activacin de las clulas y la liberacin de metabolitos txicos del oxgeno, varias enzimas proteolticas y glicolticas, produciendo una reaccin inflamatoria.

Proteina m forma agregados con fibrinogeno que se van a unir a integrinas de clulas polimorfonucleares causando la activacin de este. Causando la de granulacin Y dae al tejido en el cuAL SE ENCUENTRE. 13

TOXINAS Y ENZIMAS

Estreptocinasas: transforma el plasmingeno del plasma humano en plasmina enzima proteoltica activa que acta digiriendo la fibrina.Estreptodornasa: despolimeriza al ADN

Hialuronidasa: despolimeriza al cido hialurnico componente importante de la sustancia fundamental de tejido conectivo, para diseminarse por continuidad.

Peptidasa de C5a : protege a los estreptococos al degradar a C5a que se produce por la va del complemento por va clsica o alterna.

Usada de manera terapeutica 14

Estreptolisinas O y S La estreptolisina O hemolisina lbil frente al oxgeno, causa una respuesta inmune, la deteccin de anticuerpos en el suero sanguneo.Antiestreptolisina O (ALSO) puede usarse clnicamente para confirmar una reciente infeccin.

La estreptolisina S es una hemolisina adherida a la clula y estable frente al oxgeno, no es inmunognica, es capaz de lisar eritrocitos, as como leucocitos y plaquetas tras contacto directo.

S. Pyogenes (grupoA) Cuadros clnicos

Infecciones pigenas o supurativas

Infecciones respiratorias e Infecciones de piel y tejidos blandos

FaringitisPiodermaEndocarditisSinusitis Otitis ImptigoEscarlatina (toxina eritrognica)ErisipelaCelulitisFascitis necrotizante

Enfermedades estreptoccicas del grupo A.NO SUPURATIVAS.Fiebre reumtica aguda y crnicaGlomerulonefritis.MEDIADA POR TOXINASSndrome estreptoccico similar al shock

REACCIONES DE NEUTRALIZACIN

Reacciones Ag-Ac que inactivan una exotoxina bacteriana o un microorganismo (generalmente un virus). Ej. -toxina de Clostridium perfringens o -toxina de Staphylococcus aureus.

Se emplean frecuentemente para la identificacin de virus desconocidos y medir el ttulo de Ac especficos en sueros (Seroneutralizacin vrica) mediante diluciones.

Este mtodo est considerado de referencia para cualquier estudio serolgico pues es el que ms se correlaciona entre la respuesta "in vitro" y la respuesta "in vivo".

En esta prueba se puede valorar la capacidad que tienen los anticuerpos presentes en un suero problema para neutralizar la actividad biolgica de un antgeno.

Modalidades de las pruebas de neutralizacin

La mayora de las pruebas de neutralizacin que tienen utilidad clnica se pueden agrupar en 3 modalidades:Neutralizacin de toxinas (exotoxinas) y productos extracelulares secretados por bacterias.Neutralizacin de enzimasNeutralizacin Viral

Fundamento

Fiebre reumtica

La fiebre reumtica es una enfermedad inflamatoria que afecta el tejido conectivo de diversas zonas del cuerpo humano.Puede afectar cualquier parte del organismo.

Cuadro clnicoSe observa entre la 2 y 5 semana despus de la faringitis estreptoccicaSe evidencian en forma de soplos, agrandamientos cardacos, insuficiencia cardiaca congestiva y en casos raros, paro cardiaco intratable y muerte.Inflamacin articular, enrojecimiento o calorHemorragias nasales(epistaxis)

Cuadro clnicoErupcin en la piel (eritema marginado)Astenia (sensacin de debilidad)Adinamia (falta de fuerza o movimiento) Erupcin cutnea en el tronco y en la parte superior de brazos o piernasErupciones que pueden tener apariencia de anillo o parecido a una serpienteCorea de Sydenham (inestabilidad emocional, debilidad muscular y movimientos convulsivos espasmdicos descoordinados y rpidos que afectan principalmente la cara, los pies y las manos)

Ndulos cutneosCuadro clnicoLos ndulos subcutneos son raros (menos del 2%) y altamente especficos de fiebre reumtica.

Miden de 0.5 a 2.0 cm de dimetro, son ndulos redondos, firmes, libremente mviles e indoloros que se agrupan sobre los codos, muecas, rodillas, tobillos, el tendn de Aquiles, el occipucio y las apfisis vertebrales posteriores.

Diagnstico para fiebre reumtica

Criterios de Jones modificados (1984)Criterios mayoresCarditisArtritis migratoriaCora de SydenhamNdulos subcutneosEritema marginado Criterios menoresFiebre Artralgia Palidez Antecedentes de ataque previo de FR Velocidad de sedimentacin acelera da, protena C reactiva positiva, intervalo PR prolongado Establecimiento del contacto de estreptococo beta hemoltico del grupo A.Dos criterios mayores o uno mayor y dos menores tienen alta probabilidad de FR. Es necesario adems comprobar el

El diagnstico de la fiebre reumtica se inicia con la historia clnica y exmen fsicoCriterios de JonesCriterios mayoresCarditisArtritis migratoriaCora de SydenhamNdulos subcutneosEritema marginado Criterios menoresFiebre Artralgia Palidez Antecedentes de ataque previo de FRVelocidad de sedimentacin aceleradaProtena C reactiva positivaIntervalo PR prolongado Establecimiento del contacto de estreptococo beta hemoltico del grupo A.Dos criterios mayores o uno mayor y dos menores tienen alta probabilidad de FR. Es necesario adems comprobar el contacto con EbhA.

TratamientoReposo en cama de 6 a 8 semanas.

Se basa en medidas de control del proceso inflamatorio con antiinflamatorios no esteroideos (AINES), aunque en los casos de carditis grave con fallo cardaco deben utilizarse corticoides como tratamiento de sostn.

Penicilina V.

Penicilina G benzatnica IM 600.000 U (nio) y 1.200.000 U (adolescentes y adultos).

En caso de alergia a la penicilina, utilizar Eritromicina va oral.

Azitromicina por va oral

Cefadrxilo por va oral

Analgsicos

Corticosteroides

Salicilatos

1. Pancarditis reumtica , cuando la insuficiencia cardaca es importante debida al proceso inflamatorio. 2. Actividad reumtica grave con gran ataque al estado general. 3. Actividad reumtica prolongada pese a un tratamiento correcto.

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FundamentoSi se agrega estreptolisina O a glbulos rojos se producir hemlisis. Cuando el suero del paciente contiene Ac (antiestreptolisinas O) se pone en presencia de la estreptolisina (Ag), se producir una reaccin AgAc, hasta neutralizar todo el Ag.

Los resultados se expresan en Unidades Todd.

31Si se encuentra una cantidad constante de anticuerpo mientras sea suficiente se producir la neutralizacin del antgeno y no aparecer hemlisis.

32APLICACIONES DE LA ASLOPara el Dx y Tx:

Fiebre reumtica(80-85%)Glomerulonefritis aguda (95%)Otras infecciones por estreptococo b hemoltico.

EQUIPO 83232

Ttulos elevados = infeccin estreptoccica presente.

procedimiento

Antiestreptolisinas en sueroDiluir suero de la muestra 1:50 ( 0.1mL suero + 4.9mL solucin amortiguadora)1.- Colocar 7 tubos y adicionar los siguientes volmenesTubo1234567Solucin Amortiguadora (mL)0.60.50.50.50.51.01.252.- Realizar diluciones al doble con volmenes de 0.5 a partir del tubo 1 y desechar el volumen de 0.5mL del tubo 5, los tubos 6 y 7 son testigos de la pruebaSuero (dil. 1:50) mL0.40.50.50.50.5--1:1251:2501:5001:10001:20003.- Adicionar estreptolisina O activada (reducida)Estreptolisina O (mL)0.250.250.250.250.250.25-4.- Incubar a 37C por 15 minutos

ASO.- conjunto de anticuerpos especficos frente a estreptolisina O, una enzima extra medular producida por estreptococos del grupo A de Lancefield -hemoltico (Streptococcus pyogenes)34

Antiestreptolisinas en suero5.- Adicionar glbulos rojos grupo sanguneo O positivoGR al 5% (mL)0.250.250.250.250.250.250.256.- Incubar a 37 C por 45 minutos agitando suavemente cada 10 minutos7.- Centrifugar a 1500 rpm por 1 minuto y realice la lectura tomando la ltima dilucin donde no hay hemlisisEl tubo 6 es testigo positivo de hemlisis y el tubo 7 es testigo negativo de hemlisisEl resultado se da en unidades Todd y corresponde a la inversa de la dilucin en donde no se presenta hemlisis

Expresin de resultados 500 U Todd = Son muy sugestivas de infeccin reciente y activa por estreptococo. ANTIESTREPTOLISINA O (ASLO)Unidades Todd: cantidad de suero capaz de neutralizar 2.5 dosis hemolticas mnimas de una estreptolisina estandarizada.

EQUIPO 83737

Lo mejor es llevar a cabo 2 pruebas con 1 semana de intervalo para ver si el ttulo est aumentado o disminuido.La dosificacin se verifica en suero. No es preciso estar en ayunas.

Factores que intervienenFalsos positivos

-lipoprotenas sricas producidas en enfermedades hepticas , acta como inhibidor de estreptolisinas, asemejando la actividad de anticuerpos . Productos de crecimiento provenientes del desarrollo de bateras como Bacillus cereus y especies de Pseudomonas en la muestra de suero.

Falsos negativos.

Enzima ASO inactivada La sensibilidad de la ASO al oxigeno puede producir inactivacin de la enzima en ausencia de componentes sulfhdricos .Suero viejo o contaminado.

Valores de referenciaSe expresan en unidades Todd /mL (U/mL)

Adultos