anticuerpos monoclonales
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OBTENCION DE OBTENCION DE
ANTICUERPOS ANTICUERPOS
MONOCLONALESMONOCLONALES
Esmeralda MurciaEsmeralda Murcia
TOPICOSTOPICOS
1. Antecedentes1. Antecedentes
2. Aspectos técnicos2. Aspectos técnicos
3. Aplicaciones3. Aplicaciones
TEORIA DE LA SELECCION TEORIA DE LA SELECCION CLONALCLONAL
El Ag activa un clon específico preexistente de El Ag activa un clon específico preexistente de linfocitos B induciendo proliferación linfocitos B induciendo proliferación
Cada linfocito B sintetiza unicamente una clase Cada linfocito B sintetiza unicamente una clase de inmunoglobulina específicica para el antígenode inmunoglobulina específicica para el antígeno
Burnet, F.M. Australian Journal of Science 20:67-69, 1957.Burnet, F.M. Australian Journal of Science 20:67-69, 1957.
SE BUSCASE BUSCA
Fuente contínua de Ac
Especificidad pre-definida
ANTECEDENTESANTECEDENTES
1962 Fusión por el virus Sendai1962 Fusión por el virus Sendai OkadaOkada
1962 Inducción de plasmacitomas1962 Inducción de plasmacitomas Potter y BoycePotter y Boyce
1964 Medios selectivos HAT1964 Medios selectivos HAT LittlefieldLittlefield
1970 Cultivo continuo de plasmacitomas1970 Cultivo continuo de plasmacitomas Horibata y HarrisHoribata y Harris
1973 Fusión de células de mieloma1973 Fusión de células de mieloma Cotton y MilsteinCotton y Milstein
INMORTALIZACION DE INMORTALIZACION DE CELULAS BCELULAS B
Cultivo continuo de células fusionadas Cultivo continuo de células fusionadas secretoras de anticuerpos con secretoras de anticuerpos con especificidad predefinida especificidad predefinida
Köhler, G. Milstein,C. Nature 256 :1 495-7. 1975
TOPICOSTOPICOS
1. Antecedentes1. Antecedentes
2. Aspectos técnicos2. Aspectos técnicos
3. Aplicaciones3. Aplicaciones
ASPECTOS TECNICOSASPECTOS TECNICOS
InmunizaciónInmunización FusiónFusión
TamizajeTamizaje
ClonaciónClonación
CaracterizaciónCaracterización
PurificaciónPurificación
INMUNIZACIONINMUNIZACION
Inmunización primariaInmunización primaria Inmunización secundariaInmunización secundaria Inmunización in vitroInmunización in vitro
Ag
FUSIONFUSION
Biológica: Biológica: Virus SendaiVirus Sendai
Química:Química: PolietilenglicolPolietilenglicol
Física:Física: ElectrofusiónElectrofusión
CELULASCELULAS
LINFOCITO BLINFOCITO B
BALB/cBALB/c Crecimiento limitadoCrecimiento limitado AnticuerposAnticuerpos HGPRTHGPRT++
ESPECIFICIDADESPECIFICIDAD
P3 X63 Ag8.653P3 X63 Ag8.653
Tumoral plasmáticaTumoral plasmática Crecen in vitro Crecen in vitro c-mycc-myc HGPRTHGPRT--
INMORTALIDADINMORTALIDAD
SINTESIS DE NOVO
5- aminoimidazol 4-carboxinucleótido UMP
DHFR DHFR
Acidos Acidos
GMP IMP AMP TMP
Nucleicos Nucleicos
HGPRT HGPRT APRT TK
G H A T
VIA DE SALVAMENTO
A A
TAMIZAJETAMIZAJE
ELISAELISA
RIARIA
InmunofluorescenciaInmunofluorescencia
InmunoblotInmunoblot
CLONAJECLONAJE
Agar semi sólidoAgar semi sólido
Dilución límiteDilución límite
Sorter (Citómetro Sorter (Citómetro de flujo) de flujo)
EXPANSIONEXPANSION
IN VITROIN VITRO
Cultivo celularCultivo celular
Larga escalaLarga escala
Mayor costoMayor costo
AdaptaciónAdaptación
10-6010-60g/ml g/ml
IN VIVOIN VIVO
AscitisAscitis
ManipulaciónManipulación
Menor costoMenor costo
PurificaciónPurificación
1-10 mg/ml1-10 mg/ml
CARACTERIZACIONCARACTERIZACION
OuchterlonyOuchterlony
ELISA isotypingELISA isotyping
PURIFICACIONPURIFICACION
APLICACIONESAPLICACIONES
MOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIEMOLECULAS ASOCIADAS A SUPERFICIE
Diagnostico de infecciones.Diagnostico de infecciones. Diagnóstico e inmunolocalización de tumores.Diagnóstico e inmunolocalización de tumores. Determinación de tipos celulares.Determinación de tipos celulares.
APLICACIONESAPLICACIONES
MOLECULAS SOLUBLESMOLECULAS SOLUBLES
Determinación y/o cuantificación de proteínas, Determinación y/o cuantificación de proteínas, hormonas, enzimas medicamentos y drogas hormonas, enzimas medicamentos y drogas entre otros.entre otros.
CONJUGACIONCONJUGACION
AcMo anti - AcMo anti - tubulina tubulina
AcMo anti-FNTAcMo anti-FNT