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Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Modalidad de Investigación
Tema:
IDENTIFICACIÓN DE AGENTES BACTERIANOS Y PERFILES DE RESISTENCIA INVOLUCRADOS EN LAS INFECCIONES DEL TRACTO RESPIRATORIO EN LOS PACIENTES CON FIBROSIS QUÍSTICA (FQ)
QUE SON ATENDIDOS EN EL LABORATORIO CLÍNICO BACTERIOLÓGICO DRA. GLENDA CASTRO, EN EL PERIODO DE
DICIEMBRE (2014) A MARZO (2015).
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICOS Y FARMACÉUTICOS
Autores:
Cyntia Juliana Betancourt Pizarro
Kenny David Oleas Luna
Tutora Interna:
Q.F. María Auxiliadora Alarcón Perasso. Mg.
Asesora Externa:
Dra. Glenda Jackeline Castro Cañarte M.Sc.
GUAYAQUIL – ECUADOR
2015
III
APROBACIÓN DEL TUTOR
En calidad de tutora del Trabajo de Titulación, Certifico: Que he asesorado,
guiado y revisado el trabajo de titulación en la modalidad de investigación, cuyo
título es: “Identificación de agentes bacterianos y perfiles de resistencia
involucrados en las infecciones del tracto respiratorio en los pacientes con
Fibrosis Quística (FQ) que son atendidos en el laboratorio Clínico bacteriológico
Dra. Glenda Castro, en el periodo de Diciembre (2014) a Marzo (2015)”,
presentado por Kenny David Oleas Luna con cédula de ciudadanía
N°0927276923 y Cyntia Juliana Betancourt Pizarro con cédula de ciudadanía
N°0706388659, previo a la obtención del título de Químico y Farmacéutico.
Este trabajo ha sido aprobado en su totalidad y se adjunta el informe de Anti-
plagio del programa URKUND. Lo Certifico.-
Guayaquil, 27 de Noviembre 2015
IV
El plagio encontrado durante la revisión del Trabajo de Titulación
denominado: “Identificación de agentes bacterianos y perfiles de resistencia
involucrados en las infecciones del tracto respiratorio en los pacientes con
Fibrosis Quística (FQ) que son atendidos en el laboratorio clínico bacteriológico
Dra. Glenda Castro, en el periodo de diciembre (2014) a marzo (2015)” llevado
a cabo por el Urkund, fue de 3%.
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V
VI
CARTA DE AUTORÍA DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
27 de Noviembre del 2015.
Yo, Kenny David Oleas Luna, autor de este trabajo declaro ante las
autoridades de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad de
Guayaquil, que la responsabilidad del contenido de este TRABAJO DE
TITULACIÓN, corresponde exclusivamente a datos otorgados y
trabajados bajo la Asesoría y responsabilidad de la Dra. Glenda
Jackeline Castro Cañarte M.Sc.; y el patrimonio intelectual de la misma
a la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad de Guayaquil.
Declaro también es de mi autoría, que todo el material escrito, salvo el
que está debidamente referenciado en el texto. Además ratifico que
este trabajo no ha sido parcial ni totalmente presentado para la
obtención de un título, ni en una Universidad Nacional, ni en una
Extranjera.
VII
CARTA DE AUTORÍA DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
27 de Noviembre del 2015.
Yo, Cyntia Juliana Betancourt Pizarro, autor de este trabajo declaro
ante las autoridades de la Facultad de Ciencias Químicas de la
Universidad de Guayaquil, que la responsabilidad del contenido de
este TRABAJO DE TITULACIÓN, corresponde exclusivamente a datos
otorgados y trabajados bajo la Asesoría y responsabilidad de la Dra.
Glenda Jackeline Castro Cañarte M.Sc.; y el patrimonio intelectual de
la misma a la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad de
Guayaquil.
Declaro también es de mi autoría, que todo el material escrito, salvo el
que está debidamente referenciado en el texto. Además ratifico que
este trabajo no ha sido parcial ni totalmente presentado para la
obtención de un título, ni en una Universidad Nacional, ni en una
Extranjera.
VIII
AGRADECIMIENTO
Agradezco principalmente a Dios porque todo esto es posible gracias a sus
bendiciones y esta tesis va dedicada principalmente a mi difunto abuelo Carlos
Luna Maridueña ya que siempre fue tu sueño verme triunfar.
A mis padres que con su apoyo y sacrificio incondicional por ser ese pilar
fundamental en mi vida y motivo de orgullo e inspiración.
A mi Tutora, María Auxiliadora Alarcón, por la ayuda que me brindó, su gran
sabiduría, comprensión y una calidad humana que no he visto en mucho tiempo.
A mi compañera de tesis Cyntia Betancourt ya que este estudio no fue sencillo y
tuvimos muchos obstáculos y a pesar de diferencias siempre estuvimos
apoyándonos mutuamente demostrando que es más fuerte ese lazo fraternal que
nos une.
A mis hermanos del alma Jefferson y Jonathan, a mis grandes amigos Lourdes
Puig, Grace Borbor, Alejandra Rueda, Fernando Lara, Catherine Peña, Lizbeth
Criollo y Kleber Coloma por seguir en pie de nuestros sueños desde el pre
universitarios y terminamos juntos.
Finalmente a Henry Espinoza por convertirse en la persona que me ha brindado
su apoyo incondicional, por ser parte fundamental de mi vida y demostrarme esa
sencillez de la vida y darme el ánimo para no dejarme caer.
Kenny Oleas
IX
AGRADECIMIENTO
Agradezco a Dios por ser parte de mi vida y la estrella que ilumina mi camino,
por ser mi fortaleza para cumplir esta meta, porque sin él nada de esto hubiera
sido posible.
A mis padres por ser mi motor y bases para converger mis proyectos propuestos,
a mis hermanos Joe, Johanna, Jessica y Andy; así como a mis demás familiares
que con su cariño y palabras de aliento han apoyado la consecución de este
importante objetivo profesional en mi vida.
A mi Tutora, Dra. María Auxiliadora Alarcón quien nos ha brindado su soporte,
tiempo y fiel consejo para culminar con el presente trabajo de tesis.
A mi amigo y compañero de tesis, Kenny Oleas, por el esfuerzo y sacrificio
mutuo, que hemos demandado en aras de esta preponderante investigación
para nuestra lid profesional.
A Lourdes, Cinthya y Grace por su amistad imperecedera a lo largo del trajinar
de los años de estudio.
A Erik, mi novio por caminar junto a mí y brindarme su amor, paciencia y
comprensión.
Cyntia Betancourt
X
AGRADECIMIENTO ESPECIAL
.
De una manera muy especial agradecemos a la Dra. Glenda Castro Cañarte por
toda la atención y apoyo brindado en la tesis, quien con su experiencia hemos
podido dar un mayor realce a esta investigación.
Se agradece a los familiares de los pacientes con Fibrosis Quística de la
Fundación de Guayaquil que son atendidos en el Lab. Bacteriológico Dra.
Glenda Castro, quienes nos brindaron su tiempo, para poder realizar las
encuestas a cada paciente.
A la Dra. Mariana Rendón, por haber sido nuestra tutora de anteproyecto, quien
nos brindó su apoyo y sus conocimientos necesarios para culminar con éxito
nuestro trabajo.
XI
INDICE GENERAL
CONTENIDO
PAGINA
RESUMEN…………………………………………………………………..……......XIV
ABSTRACT……………………………………………………………………………XVI
INTRODUCCIÓN……………………………………………………………….…….…1
PROBLEMA……………………………………………………………………………...3
OBJETIVOS………………………………………………………………………...……4
JUSTIFICACIÓN…………………………………………………………………….......5
HIPOTESIS……………………………………………………………………………....6
VARIABLES……………………………………………………………………………...6
CAPÍTULO I: MARCO TEÓRICO………………………………………………....….7
1.1 Antecedentes…………………………………………………………………...7
1.2 Estado del arte…...…………………………………………...…… ……… .10
1.3 Fundamentos Teóricos……………………………………………..............11
1.3.1 Fibrosis Quística……………...……………………………………....11
1.3.2 Gen CFTR……………………………………………...……………...12
1.3.3 Mutaciones del Gen CFTR………………………………..…….…...13
1.3.4 Criterios de Diagnóstico………………………………………...…...14
1.3.5 Tipos de Microorganismos…………………………………….……..16
1.3.5.1 Staphylococcus aureus……………………………...……...16
1.3.5.2 Pseudomonas aeruginosa…………………………………..17
1.3.5.3 Burkholderia cepacia………………………………………...18
1.3.5.4 Klebsiella pneumoniae……………………………………....19
1.3.5.5 Escherichia coli……………………………………………..…19
1.3.5.6 Stenotrophoma malthopilia………………………………….20
XII
1.3.5.7 Acinetobacter
baumannii………………………..……………………….…....20
1.3.5.8 Haemophilus influenzae…………………………….………..21
1.3.6 Muestras para el estudio de la
colonización……………………………………………………..……21
1.3.6.1 Exudados Faríngeos…………………………….………. ....21
1.3.6.2 Esputos……………………………………………….….…….21
1.3.7 Mecanismos de Resistencia………………………………………...22
1.3.8 Modificación enzimática de
Antibiótico………………….………………………………...............23
1.4 Glosario…………………………………………………………………….…..26
CAPÍTULO II: METODOLOGÍA DE LA
INVESTIGACIÓN………………..28
2.1 Métodos científicos empleados en la
investigación……………….......28
2.1.1 Métodos Teóricos…………………………..………………………...28
2.1.2 Métodos Empíricos………………………..………………………....28
2.1.3 Métodos Matemáticos o Estadísticos……………………………...29
2.2 Metodología…………………………………………………………………..30
2.3 Tipos de Investigación……………………………………………………...30
2.3.1 Método Descriptivo……………..…………………………………....30
2.3.2 Método Correlacional……………..………………………………….31
2.4 Diseño Experimental de la Investigación………………………………..31
2.5 Procedimientos y Técnicas……………………………………………......31
2.6 Población y Muestra…………………………………………………….......39
XIII
CAPITULO III: RECOLECCIÓN DE DATOS – ANÁLISIS E
INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS………………………...……………………………………....40
3.1 Recolección de Datos……………..………………………………….40
3.2 Calculo de Resultados……………..…………………………………40
3.3 Análisis de Resultados……………..…………………………………41
CAPITULO V: CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES……………..56
5.1 Conclusiones……………………..…..………………………………..56
5.2 Recomendaciones………………….………………………...……….57
BIBLIOGRAFÍA……………………………………………………………..…59
ANEXO 1: CARTA EMITIDA A LA DRA. GLENDA CASTRO………..….64
ANEXO 2: CARTA DE ACEPTACIÓN PARA EL DESARROLLO DE LA
TESIS……………………………………………………………………….…..65
ANEXO 3: TABLAS REPRESENTATIVAS……………..…………………..66
ANEXO 4: GRAFICOS DEL ESTUDIO……………………………………..70
ANEXO 5: DOCTORES QUE INTEGRAN LA FUNDACIÓN DE FIBROSIS
QUISTICA………….………………………………….………………………..75
ANEXO 6: ENTREVISTA…………………………………………………… .76
XIV
ÍNDICE DE GRÁFICOS
CONTENIDO PAGINA
Gráfico I: Tipos de muestras en niños con Fibrosis Quística utilizados durante
los 4 meses de
estudio…………………………………………………………………….41
Gráfico II: Cantidad de pacientes con Fibrosis Quística entre Diciembre 2014 a
Marzo 2015……………………………………………………………………………..42
Gráfico III: Pacientes con Fibrosis Quística según el
sexo……………………………………………………………………………………...43
Gráfico IV: Aislamientos bacterianos de Diciembre 2014 a Marzo
2015……………………………………………………………………………………..43
Gráfico V: Mecanismo de resistencia Metilasa Inducible a la Clindamicina en
Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa
negativa…………………………………………………………………………………44
Gráfico VI: Mecanismo de resistencia BLEE presentado en
Enterobacterias……………………………………………………………………..….45
Gráfico VII: Mecanismo de Resistencia al Imipenem por Impermeabilidad y
Meropenem por Bomba de
Flujo…………………………………………………………………………..…46
XV
Gráfico VIII: Aislamientos de los microorganismos encontrados en el estudio
según el programa Whonet…………………………………………………...………47
Gráfico IX: Aislamientos de Acinetobacter baumanii en muestras respiratorias de
los pacientes según el programa
Whonet…………………………………………………………………………..……..47
Gráfico X: Aislamientos de Burkholderia cepacia en muestras respiratorias de
los pacientes según el programa Whonet…………………………………………..48
Gráfico XI: Aislamientos de Escherichia coli en muestras respiratorias según el
programa Whonet.…………………………..…………………………………………48
Gráfico XII: Aislamientos de Pseudomonas stutzeri en muestras respiratorias
según el programa Whonet………………………………………………………..….49
Gráfico XIII: Pseudomonas aeruginosa en muestras respiratorias según el
programa Whonet……………………………………………...………………………49
Gráfico XIV: Aislamientos de Staphylococcus aureus en muestras respiratorias
según el programa Whonet…………………………………………………………...50
Gráfico XV: Staphylococcus coagulasa negativa en muestras respiratorias
según el programa
Whonet…………………………………………………………………...50
XVI
Gráfico XVI: Aislamientos de Stenotrophomonas maltophilia en muestras
respiratorias según el programa Whonet…………,,,,,,,,,,………………………….51
Gráfico XVII: Representación estadística de los antibióticos resistentes en los
Staphylococcus aureus y coagulasa negativa según el programa
Whonet………………………………………………………………………………….51
Gráfico XVIII: Representación estadística de los antibióticos intermedios en los
Staphylococcus aureus y coagulasa negativa según el programa
Whonet………………………………………………………………………………….52
Gráfico XIX: Representación estadística de los antibióticos sensibles en los
Staphylococcus aureus y coagulasa negativa según el programa
Whonet……………………………………………………………………………….…52
Gráfico XX: Representación estadística de los antibióticos resistentes en las
Pseudomonas aeruginosa según el programa
Whonet………………………………………………………………………………….53
Gráfico XXI: Representación estadística de los antibióticos sensibles en la
Pseudomonas aeruginosa según el programa
Whonet………………………………………………………………………………….53
XVII
RESUMEN EJECUTIVO
La fibrosis quística es una enfermedad autosómica recesiva de origen genético,
producida por la mutación del brazo 7 del cromosoma que regula la conductancia
de la transmembrana (CFTR) cuya función principal es el transporte de iones
sodio a las células epiteliales, afecta directamente a los pulmones haciendo que
los fluidos bronquiales sean más espesos, convirtiéndose en un habitad de
colonización para muchos microorganismos ocasionando infecciones crónicas en
estos pacientes, y cambios de susceptibilidad a los antimicrobianos. Esta
investigación tuvo como finalidad conocer los agentes bacterianos y los
mecanismos de resistencia que se encuentran presentes en los pacientes con
Fibrosis Quística. Se trabajó con 38 pacientes que pertenecen a la fundación de
Fibrosis Quística, se inició desde la toma de muestra en el laboratorio, se
procedió a realizar el procesamiento de las muestras, diagnostico microbiológico
y pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos según los protocolos
establecidos por el Laboratorio Clínico Bacteriológico Dra. Glenda Castro
evaluados con normas Internacionales ya establecidas. Este estudio, demostró
que de los 38 pacientes el microorganismo más frecuente fue la Pseudomonas
aeruginosa con 35 aislados (39%), muy seguido del Staphylococcus aureus con
29 casos (32%), Acinetobacter baumannii (7%) y Staphylococcus coagulasa
negativa (7%) con 6 aislados cada uno, Klebsiella pneumoniae con 5 aislados,
(6%) Burkholderia cepacia, (2%) Enterobacter cloacae, (2%) Pseudomonas
stutzeri (2%) y Stenotrophomonas maltophilia (2%) con 2 aislados y finalmente la
Escherichia coli con tan solo un aislado (1%). El mecanismo de resistencia a los
Betalactamicos fue más persistente en los 2 microorganismos frecuentes
aislados de nuestro estudio para el Staphylococcus aureus un 65.5% y para la
Pseudomonas aeruginosa un 34.5%. Además encontramos resistencia a otros
grupos de antimicrobianos como quinolonas (17.1%), y Aminoglucósidos
(47.06%).
Palabras Claves: Fibrosis Quística, Antimicrobianos, CFTR, Susceptibilidad,
Aislamiento.
XVIII
ABSTRACT.
Cystic fibrosis is an autosomal recessive genetic disease, caused by mutation of
the chromosome arm 7 which regulates transmembrane conductance (CFTR)
whose main function is the transport of sodium ions epithelial cells directly affects
the lungs causing bronchial fluids are thicker, becoming a habitat for many
organisms colonization causing chronic infections in these patients, and changes
in antimicrobial susceptibility. This research aimed to identify the bacterial agents
and resistance mechanisms that are present in patients with Cystic Fibrosis. We
worked with 38 patients belonging to the Cystic Fibrosis Foundation, started from
the sample in the laboratory, we proceeded to perform the processing of the
samples, microbiological diagnosis and susceptibility testing antimicrobial
according to protocols established by the Dr. Clinical Bacteriological Laboratory.
Glenda Castro evaluated with established international standards. This study
showed that of the 38 patients the most common organism was Pseudomonas
aeruginosa with 35 isolates (39%), followed by Staphylococcus aureus very with
29 cases (32%), Acinetobacter baumannii (7%) and coagulase-negative
Staphylococcus (7 %) with 6 isolates each isolated Klebsiella pneumoniae 5,
(6%) Burkholderia cepacia (2%) Enterobacter cloacae (2%) Pseudomonas
stutzeri (2%) and Stenotrophomonas maltophilia (2%) and finally with 2 isolates
Escherichia coli with only one isolate (1%). The mechanism of resistance to beta-
lactam was more persistent in the 2 common organisms isolated from our study
for 65.5% Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa for 34.5%. We
also found resistance to other classes of antimicrobials as quinolones (17.1%),
and aminoglycosides (47.06%).
Keywords: Cystic Fibrosis, Antimicrobial, CFTR, Susceptibility isolation.
- 1 -
INTRODUCCIÓN
La Fibrosis Quística es una enfermedad hereditaria, de origen autosómico
recesivo que produce mucosidades espesas dando origen a un nicho para la
colonización, infección y desarrollo de microrganismos patógenos que al no
ser tratados a tiempo y al no estar en un control permanente puede
desarrollar resistencia a los antimicrobianos.
Esta enfermedad es de mayor prevalencia en personas de origen
caucásico, con una incidencia entre 1:2.500 a 1:3.000 recién nacidos (RN)
vivos; en la población negra una incidencia de 1:17.000 recién nacidos vivos,
en la población de medio oriente, 1:90.000 RN vivos, en los países de
Latinoamérica, se estima una incidencia de 1:6.000 RN. Y en Ecuador la
incidencia es de 1:11.252 (González, 2015).
El estudio más reciente se dio en el año 2011, que fue realizado en dos
hospitales de la Ciudad de Guayaquil, en que se determinó el aislamiento de
patógenos bacterianos indicado que el microorganismo de mayor incidencia
fue la Pseudomonas aeruginosa.
El objetivo principal de la presente investigación es determinar los agentes
bacterianos y perfiles de resistencia que están involucrados en los pacientes
con Fibrosis Quística en el Laboratorio Clínico Bacteriológico Dra. Glenda
Castro.
Para cumplir con este propósito se llevó a cabo procedimientos
microbiológicos, que nos permitieron identificar los distintos microrganismos
patógenos que se encuentran presentes en cada paciente, utilizando el
método de Kirby Bauer en donde se evaluó la sensibilidad y resistencia que
- 2 -
presenta cada microorganismo, utilizando la Norma del manual M100-S25 del
Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI).
La investigación permitió colaborar y/o proporcionar la información
necesaria, otorgando al médico conocer el perfil de sensibilidad y resistencia
de los microorganismos encontrados en los pacientes Fibroquísticos y su
adecuada vigilancia a la resistencia.
- 3 -
PROBLEMA
Planteamiento del problema
En nuestro país la Fibrosis Quística es una enfermedad poco conocida, los
pacientes que la padecen son tan vulnerables por su dolencia que requieren
de un control permanente y continuo, ya que existen una gran diversidad de
microorganismos que pueden colonizarse, infectarse y desarrollar resistencia
a varios antimicrobianos.
La Fundación Ecuatoriana de Fibrosis Quística que se encuentra ubicada
en la Ciudad de Guayaquil agrupa una población alrededor de 50 pacientes
con esta enfermedad, los cuales son diagnosticados mediante la realización
de una prueba de test de sudor, en la cual las personas que sufren esta
afección presentan una concentración de cloruro sódico en el sudor más alta
que las personas sanas.
Los pacientes con Fibrosis Quística que son atendidos en el Laboratorio
Clínico Bacteriológico Dra. Glenda Castro abarcan desde los dos meses de
edad en adelante pero quienes por motivo de su enfermedad tienen una vida
limitada a diferencia de una persona normal. Debido a su dolencia se
producen secreciones que afectan a su cuerpo, causando un taponamiento
en los canales de sodio y potasio ocasionando un nicho para el
almacenamiento de los diferentes microorganismos.
Es por ello que se demostró los diferentes aislados de microorganismos,
que pueden causar infecciones en las vías respiratorias de los pacientes que
padecen Fibrosis Quística (FQ).
- 4 -
Debido a las infecciones crónicas a nivel pulmonar que afectan a estos
pacientes es de gran importancia verificar los mecanismos de resistencia
encontrados.
FORMULACIÓN DEL PROBLEMA:
¿La vigilancia de los microorganismos en las infecciones pulmonares
crónicas y lo referente a su perfil de susceptibilidad podrá mejorar la
calidad de vida de los pacientes Fibroquísticos?
OBJETIVOS:
Objetivo General:
Identificar los agentes bacterianos y perfiles de resistencia involucrados
en las infecciones del tracto respiratorio en los pacientes con Fibrosis
Quística (FQ) que son atendidos en el laboratorio Clínico bacteriológico
Dra. Glenda Castro, en el periodo de Diciembre (2014) a Marzo (2015).
Objetivos Específicos:
Determinar los agentes bacterianos patógenos que colonizan
frecuentemente el tracto respiratorio en pacientes con Fibrosis Quística
(FQ).
Identificar los mecanismos de resistencia fenotípica en pacientes con
Fibrosis Quística (FQ) mediante el método de difusión de Disco de Kirby
Bauer.
- 5 -
Demostrar mediante pruebas de susceptibilidad la sensibilidad o
resistencia de bacterias patógenas a los antimicrobianos mediante la
mediación del halo de acuerdo a lo citado en el CSLI.
Evaluar los patrones de resistencia en los pacientes de estudio.
JUSTIFICACIÓN
En Ecuador existen pocos estudios que nos proporcionen datos significativos
de la resistencia a los antimicrobianos causado por microorganismos presentes
en estos pacientes con Fibrosis Quística, por lo que este estudio investigativo
pretende identificar los agentes bacterianos involucrados en las infecciones del
tracto respiratorio en los pacientes con Fibrosis Quística (FQ) que llevan un
seguimiento de rutina por sufrir de esta enfermedad y que son atendidos en el
laboratorio bacteriológico Dra. Glenda Castro “Se estima que la incidencia de
Fibrosis Quística en el Ecuador es de 1 individuo por cada 11.252
habitantes siendo un país en el que la Fibrosis Quística no ha sido
profundamente estudiada” (Ministerio de Salud Pública, 2013).
A través de este estudio experimental se aspira demostrar mediante pruebas
de susceptibilidad la sensibilidad o resistencia de bacterias patógenas aerobias y
anaerobias facultativas en pacientes con Fibrosis Quística (FQ) empleando el
método de difusión de Disco de Kirby Bauer, y proporcionar una información que
garantice un mejor tratamiento ayudando a tener una mejor calidad de vida a
estos pacientes “Algunas cepas de bacterias, como Escherichia
coli y Klebsiella pneumoniae, muestran resistencia a los principales tipos
de antibióticos, incluso a los carbapenémicos, que durante mucho tiempo
fueron el último recurso contra las infecciones pulmonares” (Sommer &
Dantas, 2014).
- 6 -
HIPÓTESIS:
Si se establece los microorganismos bacterianos patógenos y los
mecanismos de resistencia a los antimicrobianos se podrán controlar las
infecciones bacterianas en pacientes con fibrosis quística (FQ) mejorando su
calidad de vida.
VARIABLES:
Variable dependiente:
Perfiles de resistencia. (Antibióticos)
Variable independiente:
Microorganismos patógenos
Operacionalización de las variables
Variables Conceptualización Indicadores
Dependiente
Perfiles de resistencia.
(Antibióticos)
Capacidad de los microorganismos para soportar el
efecto de los antimicrobianos destinados para
eliminarlos.
Método de Kirby Bauer
Independiente
Microorganismos patógenos
Seres microscópicos que desencadenan una
serie de enfermedades
Pruebas de Susceptibilidad
- 7 -
CAPÍTULO I
MARCO TEÓRICO
1.1 Antecedentes:
El servicio de Neumología del Hospital materno infantil Gregorio Marañón, en
España realizó un estudio en el 2011, sobre el tratamiento de antibióticos por
aerosol alcanzando una alta concentración en la vía área y una baja toxicidad,
entre los aprobados para su uso están la tobramicina en solución para inhalación
y el colistimetato de sodio; usándolo principalmente para combatir la colonización
bronquial crónica por Pseudomonas aeruginosa, pero también existen
antibióticos en aerosol para otros patógenos Staphylococcus aureus resistente a
la meticilina, Mycobacterium abscessus o Aspergillus fumigatus “La infección
bronquial crónica especialmente, por Pseudomonas aeruginosa, es la
principal causa de mortalidad en esta patología” (Girón Moreno, Salcedo
Posadas & Gómez Punter, 2011).
La Federación Española de fibrosis Quística en el 2010, realizó varios
estudios en diferentes distritos, uno de ellos dirigido por José Antonio
Bengoechea, muestra como las células epiteliales de pulmón infectadas con la
bacteria Acinetobacter baumannii activan el sistema inmune para acabar con el
patógeno; produciendo factores antimicrobianos activando la producción de la
quimioquina IL-8, la cual recluta a los fagocitos para enviarlos al lugar de la
infección “Las infecciones que provoca la Acinetobacter baumannii
constituye un grave peligro para los pacientes ingresados en las unidades
de cuidados intensivos, donde llega a producir un 100 por cien de
mortalidad debido a su resistencia a múltiples antibióticos” (Bengoechea,
2010).
- 8 -
Un estudio realizado en el año 2005 hasta el 2006 con 18 pacientes de
Fibrosis Quística atendidos en el Laboratorio Clínico Bacteriológico Dra. Glenda
Castro demostró el crecimiento y susceptibilidad en Bacilos Gram negativos No
fermentadores, obteniendo como resultado un total de 22 aislamientos de
Pseudomonas aeruginosa no morfotipo mucoide (43.14%), 20 aislamientos
Pseudomonas aeruginosa morfotipo mucoide (39.22%) y otros bacilos no
fermentadores en menor porcentaje (17.61%). Además se realizó una
comparación de la sensibilidad a los antibióticos, obteniendo ligeras diferencias
en el caso de la Pseudomonas aeruginosa no morfotipo mucoide se obtuvo un
90.91% a la Piperacilina + Tazobactam, 86.36% a la Ciprofloxacina, 81.82% a la
Ceftazidima, 86.36% al Imipenem, mientras que la gentamicina solo presento un
36.36% de sensibilidad. En el caso de la Pseudomonas aeruginosa morfotipo
mucoide se obtuvieron las siguientes sensibilidades: Piperacilina + Tazobactam
100%, Ciprofloxacina 85%, Ceftazidima 84%, Imipenem 80%, mientras que la
sensibilidad disminuyo para la Cefepima 23% y Gentamicina y Amikacina con un
30% “Las cepas de Pseudomonas aeruginosa morfotipo mucoide
presentaron menor sensibilidad que las cepas no morfotipo mucoide”
(Miño, L. 2005).
En el 2010 se realizó un proyecto en el Hospital General de Málaga en
España a cargo de profesionales del Servicio de Endocrinología y Nutrición y la
Unidad de Gestión Clínica de Enfermedades Respiratorias abordo el tema de
fibrosis quística en adultos demostrando como la depresión y la ansiedad influye
directamente en la calidad de vida de los pacientes, siendo independiente de su
función pulmonar “Los pacientes de estudio mostraron una prevalencia
elevada de síntomas ansiosos (el 21,5%) y depresivos (el 31%). Estos
pacientes manifestaron tener una peor calidad de vida que las personas
con fibrosis quística que no presentan depresión o ansiedad” (Hospital
Regional de Málaga, 2010).
- 9 -
En el Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí” La Habana, Cuba se realizó
un proyecto en el departamento de Microbiología en el año 2010 a 2011 sobre
los mecanismos de resistencia en bacterias Gram negativas a los
betalactámicos, de gran interés clínico estudiándose aislamientos de Escherichia
coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter spp y Pseudomonas aeruginosa “En
raras ocasiones la Pseudomonas aeruginosa causa procesos infecciosos
en los individuos inmunocompetentes, comportándose como un agente
oportunista en aquellos que presentan diversos factores predisponentes:
quemados, inmunodeprimidos y enfermos con fibrosis quística” (García
Castellanos, Castillo Marshal, & Salazar Rodríguez, 2014).
Un proyecto realizado por la Dra. Mariela Martínez Neumóloga – Pediatra en
Ecuador, nos otorga una información detallada que en el año 1990 se reportó el
primer caso de Fibrosis quística en una niña de 6 meses de edad y tuvo que
viajar a Estados Unidos para realizarle un tratamiento. Ya en 1993 se da inicio a
la Asociación Ecuatoriana de Fibrosis Quística.
En el periodo del 2003 y el 2005 se realiza un estudio genético
con 60 familias de niños con FQ en Guayaquil y Quito
realizado en el Laboratorio de Biogenética de la Universidad
Católica de Guayaquil bajo la supervisión del Dr. Juan Carlos
Ruiz arrojando como resultados Delta F508 (37.1%); G85E
(8.9%); G542 (2.4%); N1303k (2.4%); G551D (1.6%); R334W
(0.8%); WT (46.8%). Estos pacientes no han tenido un acceso
a la medicación adecuada, han sido manejados con solución
salina hipertónica, enzimas, aminoglucósidos inhalados y
antibióticos intravenosos” (Martínez, 2008).
- 10 -
En dos hospitales diferentes de la ciudad de Guayaquil como son: el Hospital
de Niños Dr. Roberto Gilbert Elizalde y el Hospital de Niños Dr. Francisco de
Icaza Bustamante, evaluaron el comportamiento de los patógenos bacterianos
presentes en las infecciones por Fibrosis Quística mediante un estudio
epidemiológico, observacional y descriptivo de 45 pacientes con Fibrosis
Quística durante los años 2005 – 2011.
Los gérmenes aislados en el primer cultivo fueron:
Pseudomonas aeruginosa 48%, Estafilococo meticilino
resistente 14.7%, Burkholderia cepacia 10.7%; en el segundo
cultivo: Pseudomonas aeruginosa34,6%, Estafilococo
meticilino resistente 10.%, Burkholderia cepacia 6.4; en el
tercer cultivo: Pseudomonas aeruginosa 39.8%, Estafilococo
meticilino resistente 10,4%, Burkholderia cepacia 10.4% y
Klebsiella pneumoniae 5.3%; y en el último cultivo:
Pseudomonas aeruginosa 37.5%, Estafilococo meticilino
resistente 8.9% y Stenotrophomonas maltophilia 7.1%,
llegando como conclusión que el patógeno bacteriano más
frecuente en los pacientes fue Pseudomonas aeruginosa”
(Briones, Castro, Martínez, Tapia, Salazar, 2011).
1.2 Estado del Arte:
En el Hospital de niños “Dr. Orlando Alassia” en la ciudad de Santa Fe,
Argentina, se realizó un estudio en el 2013 basados en muestras respiratorias de
50 pacientes pediátricos con fibrosis quística, se investigaron los
microorganismos, se examinó la resistencia a los antimicrobianos y la
intermitencia de los aislamientos, dando como resultado un 72% de
Staphylococcus aureus en los pacientes, seguido con un 58% de Pseudomonas
aeruginosa, un 56% de Haemophilus influenzae y un 12% de Burkholderia
cepacia. Se pudo determinar un 13.8% de resistencia de la P. aeruginosa a los
- 11 -
antibióticos 𝛃-lactámicos, el 50% de S. aureus fue resistente a la meticilina y el
57,1% del H. influenzae fue resistente a la ampicilina por producción de 𝛃-
lactamasas “Se determinó finalmente una gran variedad de especies
bacterianas en las muestras respiratorias de pacientes con fibrosis
quística, recomendando realizar estudios más intensivos” (Busquets et al.
2013).
Una investigación realizada entre el 2013 y 2014 por Javier A. Baena del
Valle y otros colaboradores en Cartagena Colombia demuestra la susceptibilidad
antimicrobiana y el genotipo de la Pseudomonas aeruginosa en pacientes con
fibrosis quística. Se analizaron 20 muestras de pacientes con fibrosis quística y
20 de pacientes con otras enfermedades, observándose como resultado que los
Fibroquísticos presentan una mayor resistencia a la Pseudomonas aeruginosa
con un 56% en comparación a los pacientes sin fibrosis quística que poseen solo
un 25%. Entre los antimicrobianos que fueron más efectivos están cefepima,
ceftriaxona y meropenem “Finalmente se pudo concluir que los porcentajes
de resistencia a la Pseudomonas aeruginosa son altas, lo cual deja muy
pocas opciones para el tratamiento” (Baena del Valle, Gómez Alegría,
Gómez Camargo, 2014).
1.3 Fundamentos Teóricos
1.3.1 Fibrosis Quística
La Fibrosis Quística es una enfermedad autosómica recesiva que afecta
principalmente a los pulmones y páncreas, los pacientes que padecen de esta
enfermedad requieren de un control permanente y continuo, ya que existe una
gran diversidad de microorganismos que pueden colonizarse, infectarse y
desarrollar resistencia a varios antimicrobianos.
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Este padecimiento se debe a una mutación en el brazo 7 del cromosoma, gen
que regula la conductancia de la transmembrana de la fibrosis quística. (CFTR),
la cual es una glucoproteína transportadora de membrada que es dependiente
de AMPc y cuya función principal es la del transporte de iones de sodio a las
células epiteliales.
Cuando esta proteína no cumple con aquella función se produce un daño en
el transporte de electrolitos hacia las células epiteliales lo que conlleva a que la
función secretora sea alterada en diferentes órganos y tejidos.
Además la deficiencia y falta de esta proteína produce una modificación en
los fluidos epiteliales provocando que las secreciones bronquiales sean más
espesas obstruyendo los canales donde pasan las mismas, ocasionando que
esto sea un nicho para el crecimiento de gérmenes no habituales los cuales
deben ser seguir un tratamiento y seguimiento continuo.
Herencia: La FQ es una enfermedad que afecta a ambos sexos por igual
siendo de modo de herencia autosómica recesiva, en este tipo de personas con
fibrosis quística FQ las mutaciones se localizan en ambos alelos del gen CFTR
los cuales son denominados a homocigotos a aquellos que portan con
mutaciones genéticas idénticas pero heterocigotos aquellos en el cual la
mutación genética es diferente en los alelos “Según el Ministerio de Salud de
Chile en el 2012 indica que este patrón de herencia implica que una pareja
de portadores tiene una probabilidad de 25% de tener un hijo con FQ en
cada embarazo”.
1.3.2 Gen CFTR
El gen CFTR es localizado en la banda q31 del cromosoma 7, tiene un
tamaño de 250 kilobases, comprende 27 exones y codifica para una proteína de
- 13 -
1,480 aminoácidos, que se localiza en la membrana apical de las células
epiteliales normales.
Esta glucoproteína está formada por dos regiones de transmembrana que son
hidrofobias las cuales son separada por una región de unión al ATP y una
subunidad de la región R que es hidrófila seguida de otra región BNF.
1.3.3 Mutaciones en el gen CFTR
Las mutaciones varían de acuerdo a la raza étnica y al área geográfica donde
se está estudiando el padecimiento de la enfermedad, las mutaciones de el gen
de la fibrosis quística FQ se extiende a lo largo de todo el gen. Mediante la
identificación del gen se ha podido estudiar la relación entre fenotipo/genotipo
mediante el análisis de la relación de las diferentes mutaciones.
Mutaciones de Clase I: No producción de la proteína CFTR (la más común:
G542X), es decir tiene la ausencia parcial o total de la proteína. Muchas veces la
no producción de la proteína se debe a la no formación de la proteína de ARN m
formado es inestable y muchas veces si se forma la proteína es tan inestable
que se degrada fácilmente.
Mutaciones de Clase II: Procesamiento defectuoso de la proteína (DF508,
NN1303K,..). Debido a que la alteran la maduración de la proteína y su
transporte a la membrana plasmática, lo que hace que la proteína está presente
pero en muy bajas cantidades.
Mutaciones de Clase III: Regulación defectuosa del canal de cloro (G551D).
Las mutaciones se encuentran frecuentemente en el dominio de unión al ATP.
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Mutaciones de Clase IV: Transporte defectuoso de la corriente de Cl-
(R117H, R334W,...) las mutaciones atraviesas la membrana en la formación de
un poro de iones.
Mutaciones de Clase V: Reducción de la síntesis de ARNm. Las proteínas
que son mutadas tienen una actividad normal tanto en la regulación como en
conductancia; sin embargo su procesamiento postaduccional es ineficiente.
1.3.4 Criterios de Diagnóstico:
El diagnóstico de FQ es fundamentalmente clínico, confirmado por diversas
técnicas diagnósticas en centros con experiencia en FQ.
Diagnóstico Prenatal: Es realizado a través del estudio del DNA del líquido
amniótico, para diagnosticar si los padres son portadores.
Screening Neonatal: Esta prueba se realiza en base del nivel sérico de la
tripsina en pacientes con insuficiencia pancreática, llegando a ser 8 veces su
valor normal con un tiempo determinado de estudio hasta 8 semanas.
Test De Sudor: Es la iontoforesis de pilocarpina por el método de Gibson y
Cooke, el cual permite medir los valores de sodio y cloro a través del sudor de
los pacientes, diagnosticado de la manera en que el túbulo de la glándula
sudorípara, se encuentra bloqueado por el reingreso de cloro a la célula de esta
manera impide que el sodio haga lo mismo dando como resultado que los
electrolitos en el sudor sean mayores.
Pero este TEST DE SUDOR solo puede ser solicitado a partir de la 4 semana
del recién nacido, teniendo como síntomas específicos una tos crónica sin
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ninguna especificación, neumonía recurrente, desnutrición crónica, retardo en su
crecimiento o una ictericia neonatal prolongada, entre otros.
Estudio Del DNA: Con este estudio se logra determinar las mutaciones que
tiene el paciente, para poder determinar la gravedad de la enfermedad y su
pronóstico de sobrevida.
A través de los estudios mencionados se puede determinar la presencia de la
FQ en los pacientes, pero es indispensable también realizar estudios
contemporáneos que sirvan como guía en la investigación como:
Hemograma
PCR
Perfil bioquímico y lipídico
Inmunoglobulinas séricas
Muy seguido se realizan evaluaciones a nivel respiratorio que comprendan
radiografía y tomografía de tórax, estudios pancreáticos, de absorción intestinal,
la saturación arterial del oxígeno, un examen bacteriológico de las secreciones
bronquiales, evaluación del estado nutricional, densitometría ósea y evaluación
de la fertilidad masculina.
Es importante identificar los gérmenes que están afectando al paciente
fibroquístico para recomendarle un tratamiento con antibióticos y en el caso de
que estos sean multiresistentes se asocian varios antimicrobianos para disminuir
la población bacteriana, entre los más recurrentes encontramos al
Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa morfotipo y no morfotipo
mucoide, Pseudomonas stutzeri, Escherichia coli, Haemophilus influenzae,
Burkholderia cepacia, Acinetobacter baumannii otros bacilos gramnegativos y,
con menor frecuencia, bacilos ácido alcohol resistentes, virus respiratorios y
hongos, en especial Aspergillus.
- 16 -
1.3.5 TIPOS DE MICROORGANISMOS
1.3.5.1 Staphylococcus aureus
Es una bacteria Gram positiva inmóvil, aeróbico o anaeróbico facultativo,
alojado en la nariz y en la piel del 10% de los individuos sanos. Se asocia a los
pacientes con FQ debido a su alto contenido de electrolitos, a la composición de
los lípidos en las secreciones.
En los pacientes Fibroquísticos se presenta de manera frecuente debido a su
alta osmolaridad, su fácil adhesión al epitelio respiratorio y debido al que el
sistema inmune no posee la capacidad para eliminarlo una vez que ya se ha
producido su colonización.
Al principio de la enfermedad es frecuente la infección intermitente, pero
después se obtiene un desarrollo de infección crónica con Staphylococcus
aureus. Son meticilino-sensibles, de fácil tratamiento, aunque también según el
cuadro clínico del paciente pueden desencadenarse como Staphylococcus
aureus meticilino – resistente de difícil tratamiento.
Existen dos factores de virulencia del Staphylococcus aureus:
1.- Su capacidad para adherirse al epitelio respiratorio.
2.- Habilidad para evadir el sistema inmune a través de la producción de
factores de virulencia como leucocidinas, catalasa, coagulasa y varias
exotoxinas.
“Según González Melina mediante un estudio realizado en Quito demostró
que las bacterias más frecuentes fueron la Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus”
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1.3.5.2 Pseudomonas aeruginosa.
Son bacterias Gram negativas perteneciente a la familia
Pseudomonadaceae, aeróbicas, móviles, no fermentadoras, no esporuladas,
viven en el suelo, el agua, los animales y las plantas, en especial en la superficie
de frutas crudas y vegetales. Producen catalasa y oxidasa positiva, pueden
utilizar el citrato como única fuente de carbono, además son causantes de
infecciones con una alta mortalidad y morbilidad. Tienen la facilidad de producir
un pigmento verde fluorescente conocido como pioverdina, mientras que otras
cepas pueden producir un pigmento rojo conocido como piorrubina o
piomelanina de color rojo-marrón.
La inmensa mayoría de los aislamientos clínicos o ambientales de P.
aeruginosa son cepas no mucoides, ya que producen cantidades muy pequeñas
del exopolisacárido llamado alginato. Sin embargo, en los pulmones de los
enfermos con fibrosis quística se seleccionan muy frecuentemente cepas
mucoides, que son el factor principal de morbilidad y mortalidad en estos
pacientes.
La colonización inicial se da en forma de cepas no mucoides. Una vez que el
paciente presenta una colonización crónica aparece la Pseudomonas aeruginosa
mucoide debido a la producción de grandes cantidades de polisacáridos que
rodean la cédula, este material designado como exopolisacárido mucoide se
denomina alginato, determinando un mayor deterioro pulmonar y peor
pronóstico.
Por ello se deben realizar todos los esfuerzos posibles para evitar o postergar
su instalación. De ahí la importancia de esta cepa presente en niños menores a
5 año en donde el aislamiento de este microorganismo requeriría un mayor
control para los mismos, ya que representan un riesgo mayor de mortalidad a
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diferencia de los pacientes con FQ no colonizados. “En la actualidad, el uso de
macrólidos en diferentes enfermedades de carácter inflamatorio crónico ha
aumentado significativamente. En la fibrosis quística, el asma, entre otras, se
han observado mejoras clínicas asociadas a la administración de macrólidos”
(Sánchez, Soy-Mueller, Soler, 2010).
El desarrollo de la infección crónica por la Pseudomonas aeruginosa
constituye también un proceso de adaptación genética que le permitirá resistir
las condiciones ambientales adversas, incluyendo la respuesta inmunitaria y los
tratamientos a antibióticos.
Las diversas características que esta cepa presenta favorecen el desarrollo y
selección de cepas multirresistentes presentando un alto nivel de resistencia a
varios antibióticos, teniendo como consecuencia el uso prolongado de los
mismos.
1.3.5.3 Burkholderia cepacia.
Es una bacteria Gram negativos rectos no fermentadora muy parecida a la
Pseudomonas aeruginosa, son catalasas y oxidasa positivos a la vez son motiles
y de metabolismo aerobio y usan como sustancia de reserva el polihidroxibutirato
y poseen un gran genoma con el doble de material genético de la E. coli.
Es una bacteria problemática para pacientes con Fibrosis Quística y puede
ser transmitida de un paciente a otro produciendo una infección de pulmón
progresiva y en los últimos años se ha encontrado una multiresistencia a los
antibióticos especialmente los Aminoglucósidos.
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B.cepacia puede ser transmitida de paciente a paciente por el aire, o con un
objeto que haya estado en contacto con secreciones del tracto respiratorio.
Parece probable, por tanto, que la bacteria podría ser transmitida por el aire
entre pacientes en un espacio pequeño y mal ventilado o sobre una superficie
sólida. La mejor precaución para prevenir a los pacientes con FQ de contraer
B.cepacia es separar a los que están infectados de los que no.
Los pacientes pueden presentar una colonización intermitente o transitoria
pero la infección pulmonar producida por estas bacterias, es con frecuencia
crónica, difícil de tratar con antimicrobianos ya que posee una multiresistencia y
se encuentra asociado con un alto rango de morbilidad y mortalidad en más del
62% de los pacientes con este aislado bacteriano.
1.3.5.4 Klebsiella pneumoniae
Forman parte de la familia de las Enterobacterias, siendo bacilos Gram
negativos, inmóviles al no tener flagelos, pueden o no presentar una capsula,
son anaerobios facultativos; son capaces de fermentar la lactosa y por eso
forman ácidos fuertes en el proceso metabólico.
Su importancia médica se radica en que son bacterias oportunistas
apareciendo en las personas con un sistema inmunológico debilitado,
produciendo infecciones respiratorias, urinarias y neumonías.
1.3.5.5 Escherichia coli.
Es una bacteria Gram negativa, que habita normalmente en los intestinos de
seres humanos y animales, es más frecuente de infecciones urinarias, pero
también puede producir meningitis en el neonato o infecciones respiratorias.
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Estas Enterobacterias raramente colonizan el árbol bronquial, siendo
colonizadores transitorios y generalmente no están asociados con la gravedad
de la enfermedad, su mayor frecuencia se encuentra en niños menores de 5
años no mayor al 4% de aislamientos bacterianos.
1.3.5.6 Stenotrophomonas malthopilia
Es un bacilo Gram negativo no fermentador de característica pequeña
aerobio, oxidasa negativa y su crecimiento son colonias rugosas de color
amarillo en el agar MacConkey y un olor característico a amoniaco.
Es un microorganismo poco patógeno, pero la importancia de su estudio se
encuentra en la patología nosocomial y la alta resistencia a los antimicrobianos
que presenta esta se puede dar por un largo tratamiento con carbapenémicos y
cefalosporinas principalmente en los pacientes UCI.
1.3.5.7 Acinetobacter baumannii
Es un gramnegativo aerobio, pleomorfo y no motil, es oportunista presente en
la infecciones nosocomiales presentando últimamente una multiresistencia a
muchos antibióticos.
Se aprovecha principalmente de los pacientes inmunocomprometidos
generalmente los que tienen una larga estadía hospitalaria, se lo aísla de
muchas secreciones respiratorias y es catalogado por la OMS como una de las
bacterias multiresistentes más patógenas últimamente.
- 21 -
1.3.5.8 Haemophilus influenzae.
Es uno de los microorganismos más frecuentes y aislados en los
pacientes con fibrosis quística, ya que puede colonizar más del 30% de
los pacientes, afectando más a los niños menores de 5 años. Los
pacientes que presentan aislamientos repetidos de estos
microorganismos tienen la posibilidad de una aceleración para la
colonización de la Pseudomonas aeruginosa
1.3.6 MUESTRAS PARA EL ESTUDIO DE LA COLONIZACIÓN
Las muestras más habituales para un estudio con pacientes Fibroquísticos es
el esputo. En los niños pequeños también se recomienda, en ausencia de
secreciones de vías bajas, la toma de exudados faríngeos, los hallazgos en esta
localización suelen considerarse representativos de los microorganismos
presentes en el espacio bronquial.
1.3.6.1 EXUDADOS FARÍNGEOS.
Se utilizan particularmente cuando se aísla Pseudomonas aeruginosa y
Staphylococcus aureus.
En el caso de Pseudomonas aeruginosa y en los pacientes menores de cinco
años, el valor positivo es cercano al 95% y el valor negativo del 40%, siendo algo
inferior para Staphylococcus aureus. En los pacientes jóvenes sin expectoración
el valor positivo para Pseudomonas aeruginosa es inferior al 83% y algo mayor
el valor negativo al 70%, siendo los valores correspondientes para
Staphylococcus aureus del 91% a 80% respectivamente.
- 22 -
1.3.6.2 ESPUTO
Es la muestra que mejor refleja la naturaleza microbiana del tracto respiratorio
del paciente con FQ. En algunos trabajos el cultivo de esputo se considera
superior al lavado bronco alveolar debido a que es más representativo de las
diferentes localizaciones de la colonización pulmonar, a temperatura ambiente la
vida media del Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa no se ve
comprometida en las primeras 24-48 horas. En el caso de Haemophilus
influenzae y Streptococcus pneumoniae los recuentos disminuyen con el tiempo
y los cultivos pueden ser negativos.
El control del paciente Fibroquístico debe realizarse cada mes o mínimo uno
cada tres meses debido a la colonización.
1.3.7 MECANISMOS DE RESISTENCIA:
Las bacterias tienen una excelente capacidad para poder desarrollar una
diversidad de mecanismos de resistencia frente a los antibióticos. Existen tres
tipos de resistencia entre ellas están:
Resistencia natural o intrínseca: Este tipo de resistencia se da cuando
la bacteria carece de diana para un antibiótico.
Resistencia adquirida: Esta resistencia es la más importante de
acuerdo al punto clínico y esto es debido a la modificación de la carga
genética que presenta la bacteria la cual puede aparecer por algún tipo
de mutación genética o por mecanismos de transferencia genética.
Resistencia transmisible: Mediada por plásmidos, transposones o
integrones, que pueden pasar de una bacteria a otra.
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En muchas especies la resistencia antimicrobiana es una propiedad intrínsica
o innata, esta resistencia se debe por uno o varios mecanismos que puede
desarrollar el microorganismo. Como por ejemplo, E.coli presenta resistencia a la
vancomicina esto se debe a que la vancomicina es demasiado grande para
pasar los canales de porinas en su membrana externa.
Las bacterias Gram-negativas pueden desarrollar varios mecanismos de
resistencia dentro de los cuales se encuentran cuatro mecanismos más
relevantes entre ellos están:
1. Modificación enzimática del antibiótico: Muchas bacterias presentan la
capacidad de sufrir cambios en la estructura del antibiótico lo que permite
que este pierda su función. Un ejemplo son las lactamasas que son
capaces de hidrolizar el anillo β lactámico.
2. Bombas de salida: Las bacterias toman el antibiótico y lo expulsan al
exterior con el fin de que este no llegue a su sitio de acción.
3. Cambios de permeabilidad de la membrana externa: Muchas
bacterias presentan un cambio en la permeabilidad de la membrana la
cual se debe por el cambio en las porinas, las cuales forman canales de
agua que les permite regular la entrada de muchos antibióticos.
4. Alteraciones del sitio de acción: Las bacterias causan una alteración
de su sitio de acción al no permitir que el antibiótico se una a la bacteria
para que este cumpla con su función.
- 24 -
1.3.8 Modificación enzimática del antibiótico:
Β lactamasas
Los antibióticos β-lactámicos presentan en su estructura un anillo β-lactámico
que es el responsable de cumplir con su actividad antimicrobiana. Las enzimas
β-lactamasas tienen la capacidad de romper este anillo β-lactámico.
β-lactamasas tipo AmpC.
Son enzimas que hidrolizan generalmente las cefalosporinas que presentan
un espectro reducido, cefalosporinas de tercera generación e inhibidores de β-
lactamasas.
Se encuentran codificadas por una enzima AmpC la cual puede estar
presente tanto en los plásmidos como en el cromosoma.
β-lactamasas de espectro extendido (BLEE)
Este tipo de enzimas β-lactamasas de espectro extendido (BLEE)
fenotípicamente se caracterizan por otorgar resistencia a penicilinas y
cefalosporinas entre ellas son incluidas las de tercera y cuarta generación.
En su mayoría las Enterobacterias como Klebsiella pneumoniae y Escherichia
coli son cepas productoras de BLEE frecuentemente implicadas, debido a su
resistencia a los β-lactámicos entre ellas las cefalosporinas de tercera
generación) con excepción a los carbapenem, cefamicinas (cefoxitin) y
combinaciones de β-lactámicos con inhibidores de β-lactamasas como el
sulbactam, ácido clavulánico y tazobactam.
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Existen Enterobacterias que producen BLEE de forma natural entre ellas
están Yersinia enterocolitica, Klebsiella oxytoca, Citrobacter diversus y distintas
especies del género Kluyvera.
Carbapenemasas
Las carbapenemasas son betaláctimos que en la actualidad tienen una
amplia actividad, espectro y resistencia a las β-lactamasas. Debido a su amplio
espectro son antibióticos altamente potentes contra bacterias Gram negativas y
Gram positivas, por ello son imprescindibles para el tratamiento de sospecha de
patógenos multiresistentes.
Según la clasificación de Ambler las carbapenemasas pertenecen a cuatro
clases de β-lactamasas grupo A, B, C, y D. entre ellas el grupo A, C y D son
enzimas en cuyo centro activo es una serina (serinoproteasas) y el grupo B
metaloenzimas.
Clase A: Las enzimas clínicamente más comunes en este grupo son las de
tipo KPC que frecuente son expresadas por aislamientos de Klebsiella
pneumoniae, pero también pueden ser encontradas en “Escherichia coli,
Klebsiella oxytoca, Salmonella enterica, Citrobacter freundii, Enterobacter
aerogenes, Enterobacter cloacae, Proteus mirabilis, Serratia marcescens”,
así como en Gram negativos no fermentadores, como “Pseudomonas
aeruginosa y Acinetobacter spp” (Levy et al. 2012).
Clase B: En este grupo se encuentran las metalo β-lactamasas se
denominan así por su dependencia al zinc para lograr su funcionamiento, debido
a que los átomos de zinc interactúan con un residuo de cisteína y tres de histina
en su sitio activo.
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Clase D: Dentro de este clase se destacan las betalactamasas tipo OXA y
otros antibióticos como quinolonas y aminoglucósidos en el que “Se presenta A.
baumannii, habitualmente dentro de integrones situados en plásmidos o
transposones, aunque ciertos casos se han asociado a secuencias de
inserción” (Moreno, K. 2013).
Resistencia al Imipenem por Impermeabilidad: Es un problema
muy común para cepas de Enterobacterias y Pseudomonas aeruginosa,
el Imipenem es un potente inductor de cefalosporinasas cromosómicas,
que son producidas por bacilos gramnegativos en presencia de
antibióticos beta-lactamicos y capaz de hidrolizar una gran cantidad de
agentes betalactámicos, pero se ha podido observar una resistencia
intratamiento por cepas productoras de algunas betalactamasas.
Resistencia al Meropenem por Bomba de flujo: Las Bombas de
flujos son estructuras proteicas capaces de expulsar del citoplasma
bacteriano compuestos tóxicos. Para su funcionamiento utilizan la
hidrolisis del ATP o un mecanismo de Contra transporte como sustrato de
energía, por lo general este mecanismo se ve asociado con la
Pseudomonas aeruginosa.
1.4 Glosario: Definición de términos básicos.
Betalactamasas: Son enzimas que tienen la capacidad de romper el
anillo betalactámico, inhibiendo la acción del antibiótico.
Cefalosporinas: Son antibióticos betalactámicos naturales producidas
por el hongo Cephalosporium acremonium que tienen una capacidad
bactericida frente a las diferentes bacterias.
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CFTR: Gen regulador de la transconductancia de la Fibrosis quística.
Colonización: Entrada y persistencia de bacterias sin causar
enfermedad en el hospedero.
Fenotipo: Manifestación visible del genotipo en un determinado
ambiente.
Genotipo: Conjunto de los genes de un individuo, incluido en su
composición alélica.
Glicoproteína: Proteína conjugada cuyos componentes no proteicos son
hidratos de carbono.
Gram-negativa: La pared celular de las bacterias Gram negativas
contiene poco peptidoglicano.
Gram-positiva: Característica de bacterias cuya pared consta
principalmente de varias capas de peptidoglicano.
Lavado bronco alveolar: Proceso en el cual se inyectan cantidades de
solución para obtener el líquido del revestimiento del parénquima
pulmonar.
Pleomórficos: Bacterias que forman varias formas en determinadas
circunstancias.
Sabouraud: Medio de cultivo que contiene peptona y dextrosa.
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CAPÍTULO II
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
2.1 Métodos científicos empleados en la investigación:
Consecución de la idea de la investigación
Carta emitida a la Dra. Glenda Castro por parte de la Facultad de
Ciencias Químicas. (Anexo 1)
Carta de autorización para uso del Laboratorio Clínico Bacteriológico Dra.
Glenda Castro. (Anexo 2)
Planteamiento del problema de investigación
Realización del marco teórico
Establecer el diseño de la investigación
Formulación de la hipótesis
Seleccionar el diseño
Determinar la población y la muestra
Recolección de datos
Analizar datos
Presentación de los resultados.
2.1.1. Métodos teóricos:
El estudio se basa en un método teórico de carácter Cualitativo el cual nos
permitió identificar y aislar los diferentes microorganismos presentes en
pacientes con Fibrosis Quística y con ello establecer la sensibilidad o resistencia
a los antimicrobianos, comprobando la presencia de mecanismos de resistencia.
- 29 -
2.1.3 Métodos empíricos:
Observacional: Este estudio se basa en esta parte del método desde la
siembra de la muestra, su incubación y la observación del crecimiento
bacteriano de manera macroscópica, su morfología principalmente para
poder tener un indicio del microorganismo a tratar.
Encuestas: Se realizó una detallada encuesta a cada paciente y en los casos
que sean menores de edad se le realiza las preguntas a un familiar responsable.
Esta base de preguntas está conformada desde su sintomatología, hasta el
conocimiento que ellos tienen sobre la enfermedad.
Entrevista: Esta parte del trabajo solo podía ser respondida por un
Neumólogo profesional con conocimiento del tema y que a su vez tenga una
experiencia con pacientes Fibroquísticos, esta experiencia nos guio en las
directrices de nuestro trabajo.
Test o Pruebas: Se realizaron pruebas de susceptibilidad para cada
microorganismo aislado con el fin de identificar si es una Enterobacteria, bacilo
no fermentador o un gram positivo, luego se establece la sensibilidad y
resistencia a cada antibiótico y la observación de la presencia o ausencia de los
diferentes mecanismos de resistencia a través del método de Kirby Bauer.
2.1.3 Métodos matemáticos o estadísticos.
Los gráficos estadísticos se realizaron empleando dos métodos diferentes; la
primera parte mediante el programa Excel en donde solo se estableció por un
código de barras de manera general el tipo de muestra, la cantidad de pacientes
- 30 -
atendidos, los microorganismos encontrados y sus diferentes mecanismos de
resistencia.
La segunda parte del análisis se realizó mediante el programa estadístico
para microbiología clínica WHONET donde obtuvimos graficas representativas
separadas por mes de cada microorganismo y la resistencia y sensibilidad de
cada antibiótico.
2.2 Metodología:
2.3 Tipo de Investigación:
2.3.1 Método descriptivo:
En el cual se basó en la medición y recolección de diferentes datos a los
pacientes con Fibrosis Quística atendidos en el Laboratorio Clínico
Bacteriológico Dra. Glenda Castro utilizando como técnica de estudio la
entrevista a los mismos.
Conseción de la idea de investigación
Planteamiento del tema
Realización del marco
teórico
Formulación de la
hipótesis
Metodología de la
investigación
Procedimiento y técnicas
Toma de muestra y siembra
Aislamiento y pruebas de
susceptibilidad
Antibiograma
Población y muestra
Recolección de datos
Entrevista - encuesta
Análisis de datos
Presentación de
resultados
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2.3.2 Método correlacional:
Se basó en la relación de variables mediante el uso de una herramienta
estadística y con el ello el programa Whonet para el análisis de los resultados de
las pruebas de susceptibilidad a los antimicrobianos.
2.4 Diseño Experimental de la investigación:
Debido a que en nuestro estudio no existe un grupo control, se realizó la
medición de la variable de perfiles de resistencia basándose en el método de
disco.
2.5 Procedimientos Y Técnicas
TOMA DE MUESTRA:
Exudado Faríngeo:
Para realizar la toma de muestra se utilizó un hisopo estéril para la
investigación de Streptococcus beta-hemolíticos y un medio de transporte
AMIES o STUART para la investigación de las bacterias patógenas.
Esputo Inducido:
Se induce la terapia de nebulización al paciente en el que se coloca un
volumen de 3 a 5 cm3 de solución salina hiperconcentrada y se adicionó a esta
solución de 3 a 4 gotas de Atrovent (Bromuro de ipratropio 0,025%) en el interior
- 32 -
del envase del equipo de nebulización, el cual estimula el deseo de toser al
paciente desgarrando la flema que contiene los pulmones.
Esputo espontáneo:
El paciente debe estar de pie y con los brazos estirados expandiendo su tórax
de 3 a 5 veces y después de la última inspiración deberá toser con fuerza y
depositar la muestra en un envase estéril de boca ancha el cual destapará
solamente cuando deposite la muestra.
Aspirado Traqueal y Secreción Bronquial
Estas muestras ya vienen recolectadas por el médico.
SIEMBRA
Las muestras tomadas fueron sembradas en los siguientes medios de cultivo:
Agar Sangre de cordero al 5% (Anexo 4; Gráfico 1)
Agar Chocolate al 5% (Anexo 4; Gráfico 2)
Agar MacConkey (Anexo 4; Gráfico 3)
Agar Manitol Salado (Anexo 4; Gráfico 4)
Agar Burkholderia (Anexo 4; Gráfico 5)
Agar ORSAB (Anexo 4; Gráfico 7)
En caso de Enterobacterias y Bacterias no fermentadoras o BNF se
procederá a sembrar en medio de KPC o BLEE que es un medio específico para
comprobar si tiene cualquiera de los dos mecanismos de resistencia. (Anexo 4;
Gráfico 6).
- 33 -
CRECIMIENTO, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN BACTERIANA
AGAR SANGRE: Es un medio universal con el objetivo de investigar la
hemólisis ya sea alfa, beta o gamma.
Nota: En nuestro estudio no se aisló ningún tipo de hemólisis.
Hemólisis beta: Se observará una lisis total de los glóbulos rojos y un halo
transparente alrededor de la colonia. Se investigará Streptococcus del Grupo A
(S. pyogenes),Grupo B (S. agalactiae), Grupo D (Enterococcus), Grupo E
(Streptococcus milleri y Streptococcus mutans) y Grupo F (Streptococcus
anginosus).
Hemólisis alfa: Se observará una lisis parcial de los glóbulos rojos y un halo
verdoso alrededor de la colonia.
Se investigará Streptococcus Neumoniae o Viridans mediante la prueba de la
optoquina.
Hemólisis gama: No se observará una hemólisis debido a que el
microorganismo no es capaz de realizar la hemolisis y por lo tanto no se
observará halo alrededor de la colonia.
AGAR CHOCOLATE: Este tipo de agar exige el crecimiento de bacterias
respiratorias utilizado para la investigación de Haemophilus influenzae se
incubará por 24 horas a 35 – 37°C y en anaerobiosis.
AGAR ORSAB: Es un medio cromogénico selectivo que permite aislar
colonias las cuales se tiñen de color azul intenso, debido al componente azul de
- 34 -
anilina (indicador de pH) que reacciona a los ácidos producidos por la
fermentación del manitol por parte de las cepas SARM.(Anexo 4; Gráfico 7)
AGAR MACCONKEY: Este medio es diferencial para el desarrollo de
Enterobacterias y gérmenes no fermentadores. En caso de crecimiento de
Enterobacterias las colonias utilizarán la lactosa del medio tornándose de color
rojo o rosado como en el caso de las Escherichia coli (Anexo 4; Gráfico 8) y
Klebsiella pneumoniae (Anexo 4; Gráfico 9), pero en caso de gérmenes como
Pseudomonas aeruginosa (Anexo 4; Gráfico 10), Burkholderia cepacia,
Stenotrophomonas maltophilia (Anexo 4; Gráfico 11) y Acinetobacter baumannii
(Anexo 4; Gráfico 12) estos no fermentan la lactosa adquieren un pigmento
que produce el mismo microorganismo de estudio.
Aislamiento: Se realizó un aislamiento haciendo una siembra por
agotamiento con el fin de tener colonias separadas en cada uno de los pases
que se realiza, se incubó por 24 horas a 35-37°C.
Identificación: De los aislamientos realizados después de 24 horas de
incubación se realizó las pruebas bioquímicas de estas colonias en Agar Citrato,
TSI, Urea, Motilidad (SIM) y Lisina (Anexo 4; Gráfico 13), de las mismas
colonias se realizó un antibiograma por el Método de Difusión de discos de Kirby
Bauer en agar Mueller Hinton (Anexo 4; Gráfico 14), dependiendo si es una
enterobacteria, un bacilo no fermentador o cocos Gram negativos, utilizando el
protocolo establecido por el laboratorio. (Anexo 4; Gráfico 15) para cada caso
(Anexo 3: Tablas I, II, III, IV y V).
AGAR BURKHOLDERIA: Es un agar específico para la identificación de
Burkholderia cepacia ya que a este medio se le agrega el suplemento de
Burkholderia para hacerlo especifico. Son colonias grises que viran el color del
medio a amarillo o rosado.
- 35 -
Aislamiento: Después de un cultivo de 24 horas de incubación se hará un
pase respectivo de este medo a otro de agar de Burkholderia de las colonias
que podemos diferenciar ya que muchas veces puede existir una subpoblación
de la misma bacteria.
Identificación: Se realizará el antibiograma por el Método de Difusión de
discos de Kirby Bauer en agar Mueller Hilton colocando los siguientes discos de
antibióticos. Meropenem (MRP), Sulfatrimetoprim (SXT), Levofloxacina (LEV),
Ceftazidima (CAZ), y Colistin que es resistente natural (CS) (Anexo 3; Tabla III).
AGAR MANITOL: Es un agar específico y diferencial solo para el desarrollo
de Staphylococcus aureus (si fermenta el manitol) cambiando el medio a
amarillo/dorado o coagulasa negativa (no fermenta el manitol), las colonias de
Staphylococcus aureus son pequeñas amarillas (Anexo 4; Gráfico 16) y las de
coagulasa negativa son colonias blancas (Anexo 4; Gráfico 17).
Aislamiento: En caso de que exista la presencia de dos tipos de esta
Staphylococcus se realizará un correcto aislamiento de las colonias en agar
manitol salado incubar por 24 horas a 35-37°C.
Identificación: Para la identificación de la especia del género de
Staphylococcus se trabajará a partir del aislamiento y se procederá de la
siguiente manera.
- 36 -
Positiva Negativa
Positiva Negativa
MÉTODO DE DIFUSIÓN EN AGAR SEGÚN KIRBY BAUER
El método de difusión de disco se basa en depositar sobre la superficie del
Agar Mueller Hilton que ya está inoculada con el microorganismo a identificar,
discos de papel filtro impregnado con concentración determinada de antibióticos
(Anexo 4; Gráfico 18).
Esta metodología está estandarizada para el estudio de Enterobacterias,
Pseudomonas, Acinetobacter spp, Sthaphylococcus spp, Burkholderia cepacia,
entre otros. Las cajas de Agar Mueller Hilton deberán tener un control de
esterilidad, un pH de 7.2 a 7.4 y una altura de 4mm.
Nota: El agar Mueller Hilton debe tener un control de esterilidad como: pH y
altura, además de las cepas ATCC correspondientes.
Staphylococcus
Catalasa
Coagulasa
Staphylococcus aureus Staphylococcus
coagulasa negativa
- 37 -
Preparación del inóculo:
Se toma de 3 a 4 colonias del microorganismo a investigar, se realiza una
suspensión en 2 a 3ml solución salina y se mide la turbidez de la misma junto a
la escala de McFarland que debe estar a 0.5 de turbidez.
Una vez preparada la suspensión del inoculo se debe inocular la placa en tres
direcciones distintas en un ángulo de 60 °C y se procede a colocar los discos en
forma separada, se debe incubar a 35 ± 2°C por 16 a 18 horas, al cabo de este
tiempo se procede a realizar las lecturas de los halos que presenta cada
antibiótico según lo establece el CSLI 2015 para saber si el mismo esta sensible,
intermedio o resistente.
Nota: Los discos que se utilizaron están basados según como lo dice el CSLI
2015 cabe recalcar que el mismo indica que no deben de exceder 6 antibióticos
por caja.
En el caso del Staphylococcus sea Aureus o coagulasa negativa los discos de
Clindamicina y Eritromicina deben ir juntos con el fin de observar la acción de
metilasa (Anexo 4; Gráfico 19).
NOTA: La sensibilidad de la Oxacilina por el método de difusión de discos de
Kirby Bauer en agar Mueller Hilton lo da el disco de Cefoxitin (FOX) valorando el
gen Mec A. (Anexo 4; Gráfico 20).
Después de las lecturas de los halos de inhibición de cada antibiótico se
procede a probar los discos correspondientes a cada mecanismo de resistencia.
- 38 -
β-lactámicos
β-lactamasas de espectro extendido (BLEE): Este mecanismo de
resistencia fue probado en todos los aislamientos bacterianos, aunque
este mecanismo es probado cuando las cefalosporinas están resistente,
para ello se coloca la amoxicilina + ácido clavulánico en el centro y a una
distancia de 2,5 del centro de antibiótico la Ceftazidina y la ceftriaxona
(Anexo 4; Gráfico 21).
Carbapenemasas
KPC: Se prueba este mecanismo de resistencia cuando los
carbapenémicos se encuentran resistentes en el caso del Imipenem,
Meropenem y Ertapenem.
Para ello se prepara una suspensión de 0,5 McFarland y se inocula la placa
en tres direcciones distintas en un ángulo de 60 °C con una ATCC E. coli 25922,
luego en el centro de la caja de Mueller Hilton se coloca el disco de Ertapenem y
muy cerca se realiza una pase de la colonia a estudiar (Anexo 4; Gráfico 22 y
23)
Nota: El control que se realiza al Mueller Hilton se lo hace con las ATCC
control.
Métalo β-lactamasas
Es un tipo de resistencia a los carbapenémicos, el cual se comprueba
probando el IMP solo y a una distancia el IMP + EDTA, lo mismo con el MRP y el
MRP + EDTA.
- 39 -
Metilasa inducible a la Clindamicina
Mecanismo utilizado para comprobar la metilasa inducible a la Clindamicina,
en Staphylococcus aureus y coagulasa negativa, mediante la utilización de la
Clindamicina y Eritomicina juntos de esta manera se observara un azotamiento
entre ambos discos. (Anexo 4; Gráfico 19)
2.6 POBLACIÓN Y MUESTRA
Población: Fundación Ecuatoriana de Fibrosis Quística que se encuentra
ubicada en la Ciudad de Guayaquil, agrupa una población alrededor de 50
pacientes con esta enfermedad.
Muestra: El número de estudio es de 38 pacientes diagnosticados con
fibrosis quística (FQ) de todo tipo de edades atendidos en el Laboratorio
Bacteriológico Dra. Glenda Castro en la ciudad de Guayaquil entre Diciembre
(2014) a Marzo (2015).
Criterios de Inclusión:
Personas con fibrosis quística diagnosticado por médico especialista
(neumólogo).
Criterios de Exclusión:
Personas sin patología fibroquística.
- 40 -
CAPÍTULO III
RECOLECCION DE DATOS. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
3.1 Recolección de Datos
La recolección de los datos desde Diciembre 2014 a Marzo 2015 fue
mediante la realización de encuestas a los pacientes en estudio, basado en una
serie de preguntas sobre el padecimiento que presentan, que nos permiten dar
realce a la investigación por el diagnóstico que cada uno presenta. Ese
documento es solo propiedad del laboratorio bacteriológico Dra. Glenda Castro y
su uso es información confidencial.
También se realizó una entrevista a un profesional neumólogo experto en el
tema la Dra. Mireya Rodas, quien nos permitió conocer un poco más de la
Fibrosis Quística. (Anexo 5).
Además este trabajo investigativo tuvo también conversaciones informales
con los médicos pertenecientes a la Fundación de Fibrosis Quística Dra. Mariela
Martínez, Dra. Rosa Briones, Dra. Isabel Salazar, Dr. Luis Tapia, lo que permitió
conocer la situación clínica particular de estos pacientes y mejorar la
comprensión de esta enfermedad para nosotros (Anexo 6).
3.2 Cálculos de los resultados
A los resultados obtenidos en nuestro estudio no se les realizó un cálculo
debido a que nuestro universo de pacientes Fibroquísticos es muy pequeño al
tratarse de una enfermedad no muy común y solo constamos con 38 pacientes a
los cuales se les aisló los microorganismos y se les realizaron las pruebas de
- 41 -
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
ExudadoFaringeo
EsputoEspontáne
o
EsputoInducido
Aspiradotraqueal
Secreciónbronquial
Series1 12 20 4 1 1
NU
ME
RO
DE
MU
ES
TR
AS
Tipos de muestras en niños con Fibrosis Quística
susceptibilidad a los antimicrobianos y la búsqueda de los mecanismos de
resistencia que estos poseen.
3.3 Análisis de los resultados
Se realizó un análisis estadístico con el programa WHONET el cual es
específico para microbiología clínica arrojando porcentajes por meses, por
microrganismo, por resistencias y sensibilidades.
Tipos de muestras en pacientes con Fibrosis Quística utilizados durante los 4 meses de estudio.
52.6%
10.5%
2.6%
31.6%
2.6%
- 42 -
Gráfico I: El gráfico representa los tipos de muestra en pacientes con fibrosis quística
que fueron recolectadas durante los 4 meses de estudio, en el que se observa que de los
38 pacientes la muestra que se obtuvo en una mayor proporción fue el Esputo
espontáneo con 52.6%, seguido del Exudado faríngeo con 31,6%, Esputo inducido con
19,53%, el Aspirado traqueal y Secreción bronquial con 2,63%; cabe recalcar que las
muestras como Esputo espontáneo, Esputo inducido y Exudado faríngeo fueron tomadas
en el laboratorio, mientras que el Aspirado traqueal y Secreción bronquial fueron
muestras recibidas es decir tomadas por el médico debido a la complejidad y al
padecimiento del paciente. Fuente: Autores.
Cantidad de pacientes con Fibrosis Quística entre Diciembre 2014 a Marzo 2015.
Gráfico II: La grafica muestra la cantidad de pacientes con fibrosis quística al cual se le realizó el estudio durante los meses de Diciembre 2014 – Marzo 2015, teniendo un total de 38 pacientes, en el que podemos citar que en Diciembre 2014 se realizaron el examen asignado por el medico 3 pacientes, en el mes de enero (2015) 14 pacientes, en el ms de febrero 8 pacientes y en el mes de marzo 13 pacientes, concluyendo que en el mes d enero y marzo hubo un mayor porcentaje de pacientes a diferencia del mes de diciembre y febrero. Fuente: Autores.
0
2
4
6
8
10
12
14
Diciembre Enero Febrero Marzo
3
14
8
13
Nú
mer
o d
e P
acie
nte
s
Meses
- 43 -
Pacientes con Fibrosis Quística según el sexo.
Gráfico III: Pacientes con Fibrosis Quística de acuerdo al sexo, durante los meses de Diciembre del 2014 a Marzo del 2015, en el que se demuestra que el sexo femenino la enfermedad está presente en 22 pacientes con un 57,9% a diferencia de los pacientes de sexo masculino en el que se presenta solo 16 pacientes con un 42,1%. Fuente: Autores.
[VALOR] pacientes
42,1%
[VALOR] pacientes
57,9%
Pacientes con Fibrosis Quística segun el sexo
Masculino
Femenino
- 44 -
Aislamientos bacterianos de Diciembre 2014 a Marzo 2015.
Gráfico IV: Número de aislamientos bacterianos durante los cuatro meses de estudio realizado con nuestra población de 38 pacientes, en el que se aprecia que la Pseudomonas aeruginosa presenta una mayor prevalencia sin importar su morfotipo con 35 aislamientos, seguido del Sthaphylococcus aureus con 29 aislamientos, el Acinetobacter baumanii y la Sthaphylococcus coagulasa negativa con 6 aislamientos cada uno, y los demás microorganismos que presentan valores inferiores. Fuente: Autores.
29
6
22
13
6 5
2 1
2 2 2
0
5
10
15
20
25
30
35
Nu
mer
o d
e C
aso
s
Microorganismos
Staphylococcus aureus
Staphylococcus coagulasanegativa
Pseudomonas aeuruginosa nomorfotipo mucoide
Pseudomonas aeuruginosamorfotipo mucoide
Acinetobacter baumanni
Klebsiella pneumoniae
Stenotrophomonas maltophilia
Escherichia coli
Burkloderia cepacea
Enterobacter cloacae
Pseudomonas stutzeri
- 45 -
Mecanismo de resistencia Metilasa Inducible a la Clindamicina en
Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativa.
Gráfico V: Se representa gráficamente los casos positivos en color azul y negativos en
color naranja de metilasa inducible en Staphylococcus aureus y coagulasa negativa,
obteniendo 2 casos de metilasa inducible en Staphylococcus aureus y ninguno en
Staphylococcus coagulasa negativa. Fuente: Autores.
0
5
10
15
20
25
30
2
0
27
6
NU
MER
O D
E C
ASO
S
ST. AUREUS ST. COAGULASA NEGATIVA
MECANISMO METILASA INDUCIBLE A LA CLINDAMICINA
- 46 -
Mecanismo de resistencia BLEE presentado en los diferentes microorganismos hallados.
Gráfico VI: En este gráfico se representan los casos positivos con color azul y negativos
de color naranja del mecanismo BLEE (betalactamasa de espectro extendido), se puede
apreciar que se presenta con mayor frecuencia en la Klebsiella pneumoniae con 4
aislados bacterianos y los otros 3 aislados se distribuyen entre la Pseudomonas
aeruginosa no morfotipo mucoide, la Escherichia coli y el Enterobacter cloacae, mientras
que en los otros bacilos Gram negativos no se encontraron casos con este mecanismo.
Fuente: Autores.
Pseudomonasaeuruginosa nomorfoti
pomucoid
e
Pseudomonasaeurugi
nosamorfoti
pomucoid
e
Acinetobacter
baumanni
Klebsiella
pneumoniae
Stenotrophomo
nasmaltoph
ilia
Escherichia coli
Burkloderia
cepacea
Enterobacter
cloacae
Pseudomonasstutzeri
POSITIVO 1 0 0 4 0 1 0 1 0
NEGATIVO 21 13 6 1 2 0 2 1 2
1 0 0
4
0 1
0 1
0
21
13
6
1 2
0
2 1
2
0
5
10
15
20
25
Títu
lo d
el e
je
MECANISMO BLEE
- 47 -
Mecanismo Métalo Beta Lactamasas. (MBL)
No se encontraron casos positivos con este mecanismo en los microorganismos
hallados durante nuestro periodo de estudio. Fuente: Autores.
Mecanismo Carbapenemasa KPC en los aislados bacterianos.
No se encontraron casos positivos con este mecanismo en los microorganismos
hallados durante nuestro periodo de estudio. Fuente: Autores.
Mecanismo de Resistencia al Imipenem por Impermeabilidad y
Meropenem por Bomba de Flujo
Gráfico VII: En este gráfico se representan el total de casos sensibles y resistentes a los
Carbapenemes, se puede apreciar como el Imipenem presenta un 70% de sensibilidad y
una resistencia de 30%, mientras que el Meropenem tiene un 90.4% de sensibilidad y
una resistencia del 9.6%. Esto se encuentra relacionado al mecanismo de resistencia al
Imipenem por Impermeabilidad y al Meropenem por bomba de flujo. Fuente: Autores
Cabe recalcar que de acuerdo a un estudio realizado en el 2005-2006 los
carbapenemes como el Imipenem, Meropenem y Ertapenem presentaron una
sensibilidad del 100%, pero en nuestro estudio los Carbapenemes presentan un
19.8% de resistencia y un 80.2% de sensibilidad observando que su resistencia
va en aumento de ahí la importancia del estudio con estos pacientes
Fibroquísticos.
- 48 -
GRÁFICOS CON EL PROGRAMA WHONET
(Programa estadístico para microbiología)
Aislamientos de los microorganismos encontrados en el estudio según el programa Whonet.
Gráfico VIII.- Microorganismos aislados durante el mes de Diciembre (2014) a Marzo
(2015) mostrados a través del programa Whonet. Fuente: Autores.
Aislamientos de Acinetobacter baumannii en muestras respiratorias de los
pacientes según el programa Whonet.
Gráfico IX. - Representación estadística de los aislamientos de Acinetobacter baumannii
en muestras respiratorias de los pacientes Fibroquísticos en los meses de Enero con 3
aislados, febrero con 1 aislado y Marzo con 2 aislados. Fuente: Autores.
- 49 -
Aislamientos de Burkholderia cepacia en muestras respiratorias de los
pacientes según el programa Whonet.
Gráfico X.- Representación estadística de los aislamientos de Burkholderia cepacia en
muestras respiratorias de los pacientes Fibroquísticos en el cual solo se realizaron 2
aislados en el mes de febrero. Fuente: Autores.
Aislamientos de Escherichia coli en muestras respiratorias de los
pacientes según el programa Whonet.
Gráfico XI. - Representación estadística de los aislamientos de Escherichia coli en
muestras respiratorias de los pacientes Fibroquísticos, encontrándose 1 aislado en el
mes de Enero. Fuente: Autores.
- 50 -
Aislamientos de Pseudomonas stutzeri en muestras respiratorias según el programa Whonet.
Gráfico XII. - Representación estadística de los aislamientos de Pseudomonas stutzeri
en muestras respiratorias de los pacientes Fibroquísticos, asilándose 2 aislados en el
mes de Marzo. Fuente: Autores.
Aislamientos de Pseudomonas aeruginosa en muestras respiratorias según el programa Whonet.
Gráfico XIII. - Representación estadística de los aislamientos de Pseudomonas
aeruginosa en muestras respiratorias de los pacientes Fibroquísticos dentro del tiempo
establecido en el estudio, encontrando en el mes de Diciembre 2 aislados, Enero con 13
aislados, febrero con 8 aislados y Marzo con 12 aislados Fuente: Autores.
- 51 -
Aislamientos de Staphylococcus aureus en muestras respiratorias según el programa Whonet.
Gráfico XIV. - Representación estadística de los aislamientos de Staphylococcus aureus
en muestras respiratorias de los pacientes Fibroquísticos dentro del tiempo establecido
en el estudio; encontrando en el mes de Diciembre 4 aislados, en enero 10 aislados,
febrero con 6 aislados y marzo con 9 aislados. Fuente: Autores.
Aislamiento de Staphylococcus coagulasa negativa en muestras
respiratorias según el programa Whonet.
Gráfico XV.- Representación estadística de los aislamientos de Staphylococcus
coagulasa negativa en muestras respiratorias de los pacientes Fibroquísticos dentro del
tiempo establecido en el estudio; encontrando en Enero 2 aislados, Febrero 3 aislados y
Marzo con 1 aislado. Fuente: Autores.
- 52 -
Aislamientos de Stenotrophomonas maltophilia en muestras respiratorias según el programa Whonet.
Gráfico XVI.- Representación estadística de los aislamientos de Stenotrophomonas
maltophilia en muestras respiratorias de los pacientes Fibroquísticos dentro del tiempo
establecido en el estudio; encontrando solo 1 aislado en el mes de Diciembre y 1 en el
mes de Enero. Fuente: Autores.
Representación estadística de los antibióticos resistentes en los
Staphylocoocus aureus y coagulasa negativa según el programa Whonet.
Gráfico XVII.- Representación estadística de los antibióticos resistentes en los
Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativa durante nuestro tiempo de
estudio, donde podemos observar una resistencia del 60% en la Oxacilina, Cefoxitin y
Tetraciclina, alrededor del 55% resistencia a la Eritromicina, mientras que el
Cloranfenicol posee una baja resistencia en estos aislados. Fuente: Autores.
- 53 -
Representación estadística de los antibióticos intermedios en los Staphylococcus aureus y coagulasa negativa según el programa Whonet.
Gráfico XVIII: Representación estadística de los antibióticos intermedios en los
Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativa durante nuestro tiempo de
estudio, en el que se puede apreciar un rango intermedio en la Gentamicina muy seguido
de la Clindamicina. Fuente: Autores.
Representación estadística de los antibióticos sensibles en los Staphylococcus aureus y coagulasa negativa según el programa Whonet.
Gráfico XIX.- Representación estadística de los antibióticos sensibles en los Staphylococcus aureus y Staphylococcus coagulasa negativa durante nuestro tiempo de estudio, en donde podemos observar que la mayoría de los antibióticos poseen un 100% de sensibilidad, a diferencia de la Oxacilina, Cefoxitin y Tetraciclina. Fuente: Autores.
- 54 -
Representación estadística de los antibióticos resistentes en las Pseudomonas aeruginosa según el programa Whonet.
Gráfico XX.- Representación estadística de los antibióticos resistentes en las
Pseudomonas aeruginosa durante nuestro tiempo de estudio, en el que se puede
observar una mayor resistencia a los Aminoglucósidos (Amikacina 51.4%, Gentamicina
45.7% y Tobramicina 44.1%) y a los Carbapenemicos (Imipenem 42.9% y Meropenem
17.1%) el resto de antibióticos poseen un bajo porcentaje en resistencia. Fuente:
Autores.
Representación estadística de los antibióticos Sensibles en las Pseudomonas aeruginosa según el programa Whonet.
Gráfico XXI.- Representación estadística de los antibióticos sensibles en las
Pseudomonas aeruginosa durante nuestro tiempo de estudio, en el que se puede
observar una mayor sensibilidad a las Fluoroquinolonas (Ciprofloxacina y Levofloxacina
con un 80% cada una) Las cefalosporinas (Ceftazidima 68,6% y Cefepima 62.9%)
Carbapenémicos (Meropenem 82.9%), LOS Combinados de Inhibidores de
Betalactamasas (Piperacilina Tazobactan 74.3%), Monobactámicos (Aztreonam 65.7%)
el resto de antibióticos poseen un bajo porcentaje en sensibilidad. Fuente: Autores.
- 55 -
Discusión
Mediante el análisis realizado a los 38 pacientes con Fibrosis Quística se determinó
que el microrganismo de mayor prevalencia y colonizante fue la Pseudomonas
aeruginosa presente en 35 aislados bacterianos, 22 no morfotipo mucoide y 13 morfotipo
mucoide, seguido del Staphylococcus aureus con 29 aislados, Acinetobacter baumannii y
Staphyloccus coagulasa negativa con 6 aislados, Klebsiella pneumoniae con 5 aislados,
Burkholderia cepacia, Enterobacter cloacae, Pseudomonas Stutzeri y Stenotrophomonas
maltophilia con 2 casos cada uno y finalmente una Escherichia coli en solo 1 aislado.
También se pudo determinar que de acuerdo al sexo el género femenino presentó
una mayor prevalencia de la enfermedad a diferencia del género masculino.
De acuerdo a los mecanismos de resistencia en el que se logró a apreciar con mayor
frecuencia el mecanismo de Betalactamasa de espectro extendido (BLEE) comprobado
mediante el método de Kirby Bauer presentándose en 7 aislados y el mecanismos de
resistencia a Metilasa inducible a Clindamicina presentado en 2 aislados, además de
observarse un resistencia del 60% de la Oxacilina.
Una investigación realizada en los años 2005-2006 en pacientes con Fibrosis Quística
por la Bióloga Lorena Miño Zúñiga donde se obtuvo en 18 pacientes estudiados 51
aislados de Bacilos no fermentadores dentro de un año de estudio, mientras que en
nuestro universo de 38 pacientes se obtuvieron 38 aislados en tan solo 4 meses,
observando un incremento de aislados en un corto tiempo de estudio. Además se pudo
evidenciar como la sensibilidad de los carbapenemes se ha visto reducida en estos 10
años, siendo en el 2005 los antibióticos de primera opción con un 100% de sensibilidad,
en comparación a la actualidad con solo un 80.3% de sensibilidad en los aislados
microbianos.
Dentro de las familias de antibióticos se observó mayor resistencia a los
cefalosporinas de III generación como la Cefotaxima, Ceftazidima y Ceftriaxona, además
del grupo de penicilinas como la Oxacilina en Staphylococcus aureus y Staphyloccus
coagulasa negativo.
- 56 -
CAPÍTULO V
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
5.1 Conclusiones
Como resultado de la investigación, se identificó y se aisló los
microorganismos patógenos en los pacientes con fibrosis quística (FQ) entre
Diciembre 2014 – Marzo 2015, en el cual se demostró que en los 38 pacientes
de estudio el microorganismo de colonización más frecuente es la Pseudomonas
aeruginosa presente en 35 aislados bacterianos sin importar su morfotipo,
seguido del Staphylococcus aureus con 29 aislados, Acinetobacter baumannii y
Staphylococcus coagulasa negativa con 6 aislados, Klebsiella pneumoniae con 5
aislados, Burkholderia cepacia, Enterobacter cloacae, Pseudomonas stutzeri y
Stenotrophomonas maltophilia con 2 casos cada uno y finalmente una
Escherichia coli en solo 1 aislado.
Entre los mecanismos de resistencia involucrados en pacientes con fibrosis
quística se encontraron mecanismo tipo GUESS y tipo BLEE (beta lactamasas
de espectro extendido) mecanismo que otorga resistencia a todas las
cefalosporinas y a Monobactámicos como el Aztreonam, 4 aislados en Klebsiella
pneumoniae, en Enterobacter cloacae, Pseudomonas aeruginosa y Escherichia
coli 1 aislado cada uno, también se obtuvo 2 casos con metilasa inducible a
macrólidos - lincosamida en Staphylococcus aureus mediante el método de
difusión de Disco de Kirby Bauer.
Con el método de difusión de discos Kirby Bauer y basándose en las normas
internacionales de la CLSI 2015 se demostró la resistencia que adquieren
muchos de estos microorganismos a diferentes familias de antibióticos
especialmente a las Quinolonas y Aminoglucósidos.
Finalmente se realizó una evaluación de los mecanismos involucrados en los
pacientes con fibrosis quística, encontrando un aumento del mecanismo BLEE y
tipo GESS y esto es significativos de una alerta para el médico tratante y que
tome las consideraciones adecuadas para tratar al paciente.
- 57 -
5.2 Recomendaciones
Se recomienda seguir con este tipo de investigación y extenderlo en un
periodo de un año ya que la fibrosis quística es una enfermedad no muy
estudiada en nuestro país, además se sugiere que los controles que deben
realizarse los pacientes Fibroquísticos sean trimestrales obteniendo resultados
más avanzados.
Se recomienda siempre comprobar el potencial de efectividad de los discos
antes de trabajar con el método de difusión de Kirby Bauer, mediante la
realización de control de calidad rigurosos frente a las cepas ATCC respectivas
debido a que un disco con carga disminuida nos arrojara una falsa resistencia.
Una recomendación importante otorgada a través de la entrevista con la
neumóloga Mireya Rodas, es que la enfermedad no solo sea estudiada en
pacientes pediátricos ya que últimamente se ve una evolución del paciente y
están avanzando a la etapa adulta.
En el caso de las resistencias que adquieren los microorganismos es
recomendable abarcar hacia las cefalosporinas de Quinta Generación ya que no
es un campo muy estudiado.
Se recomienda en este tipo de pacientes la realización del control trimestral o
cuando el medico crea que el tratamiento no está funcionando con el fin de evitar
una colonización crónica, en el caso de la Pseudomonas aeruginosa es
importante tener presente si la misma se desarrolla en niños menores de 5 años
debido a que representan un riesgo mayor de mortalidad a diferencia de los
pacientes con FQ no colonizados.
- 58 -
Por último es importante recalcar que no siempre los aislados son
monomicrobianos ya que solo en nuestro estudio se encontró un 21% y un 79 %
es polimicrobiano.
Se recomienda estudiar a fondo los mecanismos de resistencias ya que estos
no actúan solos y o hacen de manera combinada.
- 59 -
Bibliografía
Alabau, E. (2010). Fibrosis Quística: Lucha contra enfermedad desconocida.
Enfermería Global. 20. 1695-6141.
Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas, Asociación Argentina de
Microbiología. (2010). Revista Argentina de Microbiología, 43 (1). 136-153.
Baena del Valle, J., Gómez, C., & Gómez, D. (2014). Susceptibilidad
antimicrobiana y genotipificación de Pseudomonas aeruginosa en pacientes con
fibrosis quística y otras patologías en Cartagena (Colombia). Salud Uninorte.
Barranquilla: 104-120.
Briones, R., Castro, G., Martínez, M., Tapia, L., Salazar, I., (2011). Epidemiología
de la infección – colonización respiratoria de la Fibrosis Quística en el Ecuador.
Busquests, N., Baroni, M., Ochoteco, M., Zurbriggen, N., Virgolini, S. &
Meneghetti, F. (2013). Aislamientos bacterianos en muestras respiratorias de
pacientes pediátricos con fibrosis quística y su distribución por edades. Revista
Argentina de Microbiología, 45(1), 0325-7541.
Cantón, R., Maiz, l., Escribano, A., Olveira, C., Oliver, A., & et al. (2015).
Consenso español para la prevención y tratamiento de la infección bronquial por
Pseudomonas aeruginosa en el paciente con fibrosis quística. Archivos de
Bronconeumonía, 51(3), 140-150. Recuperado de:
doi:10.1016/j.arbres.2014.09.021.
- 60 -
Castellanos García, T., Castillo Marshal, A., & Salazar Rodríguez, D. (2014).
Mecanismos de resistencia a betalactámicos en bacterias gramnegativas.
Revista Cubana de Salud Pública, 40 (1) 129-135.
Fariñas, M., & Martínez, L. (2013). Infecciones causadas por bacterias Gram
negativas multiresistentes: Enterobacterias, Pseudomonas aeruginosa,
Acinetobacter baumannii y otros bacilos no fermentadores. Enfermedades
Infecciones y Microbiología Clínica, 31(6), 402-409. Recuperado de:
DOI:10.1016/j.eimc.2013.03.016.
Fernández, A., García, M., Morosini, M., Lamas, A., Maiz, L., & et al. (2012).
MALDI-TOF MS mejora la identificación rutinaria de no fermentadores Gram
negativos aislados en pacientes con Fibrosis Quística. Journal of Crystic
Fibrosis, 11(1), 59-62. Recuperado de:
http.//dx.doi.org/10.1016/j.jcf.2011.09.001.
Fielbaum, O. (2011). Avances en Fibrosis Quística. Revista Médica Clínica
Condes, 22(2), 150-159.
Fuentes, G., Abreu, G., Pérez, A., González, J., & Portuondo, R. (2014).
Caracterización de la fibrosis quística en el primer año de vida. Revista Cubana
Pediátrica, 86 (4).
- 61 -
Girón Moreno, R., Salcedo Posadas, A., & Gómez Punter, R. (2011). Arch
Bronconeumol. Antibioterapia inhalada en la fibrosis quística. 47(6) ,14-8.
Recuperado de http://www.archbronconeumol.org/es/antibioterapia-inhalada-
fibrosis-quistica/articulo/90023593/
Glosario. Universidad Autómica Nacional de México (2015). Recuperado de:
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/glosario.html
Gómez, V., Hernández, H., Napoleón, G., Castañeda, José., Rosas, A., & et al.
(2013). Bacteremia por B. cepacia. ¿Un signo de alarma para la presencia de un
brote? Acta Pedriática de México. 34 (1), 16-20.
González, A., Abreu, g., & Rodríguez, F. (2014). Reseña histórica de la fibrosis
quística y su estudio y tratamiento en Cuba. Revista Cubana Pediátrica, 86(4).
González, M. (2015). Evaluación del estado nutricional mediante índices
Antropométricos y la coexistencia con Gérmenes Causantes de infección
pulmonar, en pacientes con Diagnóstico de fibrosis quística, en el Hospital
Eugenio Espejo en la ciudad de Guayaquil en el periodo de Octubre 2014-abril
2015. (Tesis inédita para medicina interna). Universidad Central del Ecuador,
Quito.
Hernández, P., & Martínez, M. (2008). Fibrosis Quística en Ecuador. Revista
Neumología Pediátrica, 5(1), 1-93. 0718-3321
Howard, A., O´Donoghue, M., Feeney, A., & Sleator, R. (2012). Acinetobacter
baumannii un patógeno oportunista. EE.UU. Biblioteca Nacional de Medicina de
los Institutos de la Salud, 3 (3). 243-250. 3442836.
- 62 -
Jain, K., Wainwright, C., & Smyth, A. (2013).Tratamiento antimicrobiano guiado
por broncoscopia para la fibrosis quística. Cochrane Database of Systematic
Recuperado de http://www.update-
software.com/BCP/BCPMainFrame.asp?DocumentID=CD009530&SessionID=0
Lerín, M., Martínez, M., Maíz, L., Girón, R., Solé, A., & et al. (2014). Fibrosis
quística diagnosticada en edad adulta. Revista Clínica Española, 214(6), 289-
295. Recuperado de: doi:10.1016/j.rce.2014.05.001.
Ministerio de Salud Pública. (2013). Fibrosis Quística: Guía práctica clínica y
manual de procedimientos. Disponible en: http://salud.gob.ec
Miño, L., (2005) Estudio de infecciones respiratorias en pacientes con fibrosis
Quística año 2005 – 2006. (Tesis de maestría). Universidad de Guayaquil.
Guayaquil.
Moreno, Y., Ramón, D., Alemán, P., & Vizzuett, R. (2013). Fibrosis Quística
neonatal. Revista de Especialidades Médico-Quirúrgicas. 18 (1), 85-90. 1665-
7330.
Nicolau, C., & Oliver, A. (2010). Carbapenemasas en especies del género
Pseudomonas. Enfermedades Infecciones y Microbiología Clínica, 28(1), 19-28.
Recuperado de: doi: 10.1016/S0213-005X (10)70004-5.
Radice, M., Marin, M., Giovanakis, M., Vay, C., Almuzara, Marisa., & et al.
(2011). Criterios de ensayo, interpretación e informe de las pruebas de
sensibilidad a los antibióticos en los bacilos Gram negativos no fermentadores de
importancia clínica: recomendaciones de la Subcomisión de Antimicrobianos de
la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínicas,
- 63 -
Asociación Argentina de Microbiología. Revista Argentina de Microbiología, 43
(1). 136-153
Romero, M., Sánchez, K., Santamaría, Y., Mendoza, T., & Grimaldos, F. (2015).
Exacerbaciones agudas por agentes infecciosos en pacientes con enfermedad
pulmonar estructural. Revista Argentina de Microbiología, 28(1), 117-223. 0121-
0319.
Sommer, M., Dantas, G. (2014). Genética de la Resistencia microbiana. Revista
Investigación y Ciencia. Edición N°455.
Vega, L. (2010). VII Congreso Latinoamericano de Neumología Pediátrica y XII
Congreso Latinoamericano de Fibrosis Quística. Revista Neumología Pediátrica,
5(1), 1-93. 0718-3321.
- 64 -
ANEXO 1
CARTA EMITIDA A LA DRA. CASTRO POR PARTE DE LA FACULTAD
DE CIENCIAS QUÍMICAS
- 65 -
ANEXO 2
CARTA DE AUTORIZACIÓN PARA EL USO DE LABORATORIO
CLÍNICO BACTEOROLOGICO DRA. GLENDA CASTRO
Guayaquil, 07 de Diciembre del 2015.
Doctora
Leila Prias M.Sc.
DECANA DE LA FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
Ciudad.-
De mis consideraciones:
Reciba un cordial saludo a quien se suscribe la presente, a la vez me
dirijo a usted, para aprobar la carta de aceptación emitida por la Facultad
de Ciencias Químicas para el trabajo de Titulación sobre “Identificación
Bacteriana y perfiles de Resistencia involucradas en infecciones del tracto
respiratorio en pacientes con Fibrosis Quística que son atendidos en el
Laboratorio Clínico Bacteriológico Dra. Glenda Castro, en el periodo de
Diciembre (2014) a Marzo (2015)” que se encuentran desarrollando los
señores Kenny David Oleas Luna y Cyntia Juliana Betancourt Pizarro,
estudiantes de Quinto Nivel de la entidad.
Sin otro particular, reitero mis sentimientos de consideración y estima.
- 66 -
ANEXO 3
TABLAS
Tabla I: Discos utilizados para Enterobacterias según el CLSI 2015.
FOX 30 ug: Cefoxitín ATM 30ug: Aztreonam IMP 10 ug: Imipenem
CIP 6ug: Ciprofloxacina CS 10ug: Colistin
sulfato
TPZ 110ug: Piperazilina
tazobactam
CN 10 ug: Gentamicina AK 30ug: Amikacina MN 30ug: Minociclina
FEP 30ug: Cefepima TOB: Tobramicina CAZ 30ug: Ceftazidima
CTX 30ug: Cefotaxima LEV 5ug: Levofloxacina MRP 30ug: Meropenem
AMC 30ug: Amoxicilina + Ácido clavulánico
Fuente: CLSI (Clinical Laboratory and Standards Institute) 2015.
Tabla II: Discos utilizados para Bacilos no fermentadores según el CLSI 2015.
IMP 10ug: Imipenem AK 30ug: Amikacina
MRP 30ug: Meropenem
CN 10ug: Gentamicina TOB: Tobramicina ATM 30ug: Aztreonam
CAZ 30ug: Ceftazidima LEV 5ug: Levofloxacina MN 30ug: Minociclina
FEP 30ug: Cefepima SXT 25ug:
Sulfatrimetoprim
TPZ 110ug:
Piperacilina/ tazobactam
CTX 30ug: Cefotaxima CIP 6ug: Ciprofloxacina AMC 30mcg:
Amoxicilina+ Ácido
clavulánico
Fuente: CLSI (Clinical Laboratory and Standards Institute) 2015.
- 67 -
Tabla III: Discos utilizados para Burkholderia cepacia según el CLSI 2015.
MRP 30ug: Meropenem
CAZ 30mcg: Ceftazidima
CTX 30ug: Cefotaxima
LEV 5ug: Levofloxacina
CS 10ug: Colistin sulfato
Fuente: CLSI (Clinical Laboratory and Standards Institute) 2015
Tabla IV: Discos utilizados para Acinetobacter baumannii según el CLSI
2015.
AK 30mcg: Amikacina IMP 10ug: Imipenem
CN 10ug: Gentamicina MRP 30ug: Meropenem
TOB 10ug: Tobramicina TPZ 110ug: Piperacilina/tazobactam
CIP 6mcg: Ciprofloxacina MN 30mcg: Minociclina
LEV 5ug: Levofloxacina CS 10ug: Colistin sulfato
FEP 30ug: Cefepima AMC 30mcg: Amoxicilina+ Ácido
clavulánico
CAZ 30mcg: Ceftazidima SXT 25ug: Sulfatrimetoprim
CTX 30ug: Cefotaxima
Fuente: CLSI (Clinical Laboratory and Standards Institute) del 2015.
- 68 -
Tabla V: Discos utilizados para Stenotrophomonas maltophilia según el
CLSI 2015.
SXT 25ug: Sultatrimetoprim
LEV 5ug: Levofloxacina
MN 30mcg: Minociclina
Fuente: CLSI (Clinical Laboratory and Standards Institute) 2015.
Tabla VI: Familia de antibióticos usados en el estudio según el CLSI 2015.
FAMILIA DE ANTIBIÓTICO
NOMBRE DEL ANTIBIÓTICO
ABREVIATURA CONTENIDO DEL DISCO
Glicopeptidos Vancomicina VA 30 ug
Aminoglicósidos Amikacina AK 30 ug
Gentamicina CN 10 ug
Tobramicina TOB 10 ug
Eritromicina E 15 ug
Tetraciclinas Tetraciclina TE 30 ug
Minociclina MH 30 ug
Fluoroquinolonas Levofloxacina LEV 5 ug
Ciprofloxacina CIP 5 ug
Clindamicina DA 2 ug
Trimetroprim-sulfamethoxalone
SXT 25 ug
Fenicoles
Chloramphenicol C 30 ug
Ansamicinas
Rifampicina RA 30 ug
- 69 -
Oxazolidinones
Linezolid LNZ 30 ug
Inhibidores combinados β
Lactamicos
Amoxicilina + Acido Clavulanico
AMC 30 ug
Ampicilina Sulbactan
SAM
Piperacilina + Tazobactam
TPZ 110 ug
Polimixinas
Colistin Sulfato CS 10 ug
Penicilinas
Oxacilina OX 1 ug
Cefalosporina III
Cefotaxima CTX 30 ug
Ceftazidima CAZ 30 ug
Cefalosporinas IV
Cefepime FEP 30 ug
Cefamicinas
Cefoxitin FOX 30 ug
Carbapenems Meropenem MEM 10 ug
Imipenen IMP 10 ug
Monobactams
Aztronam ATM 30 ug
Fuente: CLSI (Clinical Laboratory and Standards Institute) 2015.
- 70 -
ANEXO 4
GRÁFICOS DEL ESTUDIO
Gráfico 1.- Agar Sangre de Cordero 5% Gráfico 2.- Agar Chocolate
Gráfico 3.- Agar MacConkey Gráfico 4.- Agar Manitol Salt
Gráfico 5.- Agar Burkholderia Gráfico 6.- Agar BLEE y KPC
- 71 -
Gráfico 7.- Agar ORSAB Gráfico 8.- Escherichia coli
Gráfico 9.- Klebsiella pneumoniae
Gráfico 10.- Pseudomonas aeruginosa
Gráfico 11.- Stn. maltophilia Gráfico 12.- Acinetobacter baumannii
- 72 -
Gráfico 13.- Pruebas bioquímicas, Citrato, TSI, lisina, Urea y Motilidad
Gráfico 14.- Agar Muller Hinton Gráfico 15.- Discos de Antibióticos.
Gráfico 16.- Staphylococcus aureus Gráfico 17.- St. coagulasa negativa
- 73 -
Gráfico 18.- Método de difusión de disco según Kirby Bauer
Gráfico 19.- Discos de Clindamicina y Eritromicina.
Gráfico 20.- Discos de Cefoxitin y Oxacilina
- 74 -
Gráfico 21.- Discos para comprobar BLEE
Gráfico 22.- KPC negativo Gráfico 23.- KPC positivo
- 75 -
ANEXO 5
DOCTORES QUE CONFORMAN LA FUNDACIÓN DE FIBROSIS
QUÍSITICA
Doctores que atienden a los pacientes Fibroquísticos.
1. Dra. Mariela Martínez
2. Dra. Rosa Briones
3. Dra. Isabel Salazar
4. Dr. Luis Tapia
5. Dra. Martha Zambrano
6. Dra. Laura Bustos
- 76 -
ANEXO 6
ENTREV ISTA A LA DRA. MIREYA RODAS
- 77 -
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