trabajo fin de carrera
Post on 05-Jan-2016
55 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
TRABAJO FIN DE CARRERATRABAJO FIN DE CARRERA
““CONTROL BIOLÓGICO DE CONTROL BIOLÓGICO DE Fusarium Fusarium
oxysporumoxysporum f. sp. f. sp. melonismelonis RAZA 1.2 CON RAZA 1.2 CON
ANTAGONISTAS”.ANTAGONISTAS”.
ALUMNA: ALUMNA: RAQUEL SOBRINO RUBIO.RAQUEL SOBRINO RUBIO.
DIRECTORES DEL PROYECTO:DIRECTORES DEL PROYECTO:
- Mª LUISA SORIANO MARTÍN- Mª LUISA SORIANO MARTÍN- ANDRÉS PORRAS PIEDRA- ANDRÉS PORRAS PIEDRA
FECHA DE PRESENTACIÓN: FECHA DE PRESENTACIÓN: MAYO 2005.MAYO 2005.
22
IMPORTANCIA ECONÓMICA DEL CULTIVO DEL MELÓN
PRODUCCIÓNPRODUCCIÓN EN EN ESPAÑA DE 1 MILLÓN ESPAÑA DE 1 MILLÓN DE TONELADASDE TONELADAS
SUPERFICIE:SUPERFICIE:-75% CULTIVOS AL -75% CULTIVOS AL AIRE LIBREAIRE LIBRE-25% CULTIVOS -25% CULTIVOS PROTEGIDOSPROTEGIDOS
EN CLMEN CLM90% EN 90% EN CIUDAD REALCIUDAD REAL
33
INTRODUCCIÓN A LA FUSARIOSIS VASCULAR DEL MELÓN
condiciones de desarrollo ~20º C.
primeros trabajos sobre el estado sanitario
de los melonares de Levante y Murcia en
1976.
en 1985 se describe la micosis en cultivos
bajo plástico en Almería.
44
DIFICULTAD DE CONTROL DE LA FUSARIOSIS VASCULARFUSARIOSIS VASCULAR
enfermedad muy virulenta.
reducción de la producción hasta un
90% .
55
INTRODUCCIÓN AL CONTROL BIOLÓGICO
VENTAJASVENTAJAS
respetuoso con el medio respetuoso con el medio ambienteambiente
no existen problemas de no existen problemas de intoxicacionesintoxicaciones
no crea resistenciano crea resistencia
eliminación casi completa eliminación casi completa de la utilización de de la utilización de productos fitosanitariosproductos fitosanitarios
INCONVENIENTESINCONVENIENTES
ignorancia sobre su ignorancia sobre su utilizaciónutilización
falta de apoyo económicofalta de apoyo económico
falta de personal falta de personal especializadoespecializado
enemigos naturales enemigos naturales susceptibles a productos susceptibles a productos fitosanitariosfitosanitarios
66
INTRODUCCIÓN A LOS MICROORGANISMOS ANTAGONISTAS
1. ocurre con frecuencia en la naturaleza.
2. interacción continua entre patógenos potenciales y sus antagonistas.
-equilibrio dinámico en la superficie del suelo-
3. microorganismos antagonistas:
- BACTERIAS: Bacillus y Pseudomonas
- HONGOS: Trichoderma y Micorrizas Arbusculares
77
MECANISMOS DE ACCIÓN DE LOS ANTAGONISTAS
Competencia:Competencia: debe existir “escasez” de un elemento. La debe existir “escasez” de un elemento. La competencia más común es por nutrientes, oxígeno o espacio.competencia más común es por nutrientes, oxígeno o espacio.
Interacción directa con el patógeno:Interacción directa con el patógeno:-Parasitismo: un microorganismo parasita a otro.-Parasitismo: un microorganismo parasita a otro.
- Predación: el antagonista se alimenta de materia orgánica - Predación: el antagonista se alimenta de materia orgánica entre la cual ocasionalmente se encuentra el patógeno.entre la cual ocasionalmente se encuentra el patógeno.
Antibiosis y lisis:Antibiosis y lisis: inhibición del crecimiento de un inhibición del crecimiento de un organismo por la acción de una sustancia producida por otro organismo por la acción de una sustancia producida por otro organismo.organismo.
88
OBJETIVOS
1. ESTUDIAR EL POSIBLE ANTAGONISMO FRENTE A 1. ESTUDIAR EL POSIBLE ANTAGONISMO FRENTE A FomFom
MEDIANTE ENFRENTAMIENTO DUAL MEDIANTE ENFRENTAMIENTO DUAL IN VITROIN VITRO
2. DETERMINAR LA EFICACIA DE LOS ORGANISMOS 2. DETERMINAR LA EFICACIA DE LOS ORGANISMOS
SELECCIONADOS EN EL SELECCIONADOS EN EL CONTROL BIOLÓGICOCONTROL BIOLÓGICO DE DE
FomFom RAZA 1.2 EN PLÁNTULAS DE MELÓNRAZA 1.2 EN PLÁNTULAS DE MELÓN
3. DETERMINAR LA EFICACIA DE LA COLONIZACIÓN DE 3. DETERMINAR LA EFICACIA DE LA COLONIZACIÓN DE
LAS RAÍCES DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN CON LAS RAÍCES DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN CON
MICORRIZAS VESÍCULO-ARBUSCULARESMICORRIZAS VESÍCULO-ARBUSCULARES EN EL EN EL
CONTROL BIOLÓGICO DE CONTROL BIOLÓGICO DE FomFom..
MATERIALES MATERIALES YY
MÉTODOS MÉTODOS
1010
ANTAGONISTAS UTILIZADOS EN EL CONTROL BIOLÓGICO
Trichoderma harzianum Trichoderma harzianum AspergillusAspergillus A5, A5, AspergillusAspergillus A8, A8, Aspergillus terreus, Aspergillus terreus,
Aspergillus flavus, Aspergillus ochraceusAspergillus flavus, Aspergillus ochraceus Penicillum spPenicillum sp Pseudomonas putida, Pseudomonas fluorescensPseudomonas putida, Pseudomonas fluorescens Bacillus subtilisBacillus subtilis
Fusarium oxysporumFusarium oxysporum no patogénicos no patogénicos Glomus mosseae, Glomus intraradices, Glomus Glomus mosseae, Glomus intraradices, Glomus
claroideumclaroideum
1111
MATERIAL VEGETAL Y PATÓGENO
SEMILLAS DE MELÓN DEL CULTIVAR SEMILLAS DE MELÓN DEL CULTIVAR AMARILLO CANARIOAMARILLO CANARIO F1 HÍBRIDO. F1 HÍBRIDO.
Fusarium oxysporumFusarium oxysporum f. sp. f. sp. melonismelonis RAZA 1.2 AISLADO CR 6801RAZA 1.2 AISLADO CR 6801
1212
PRODUCCIÓN DE INÓCULO DEL PATÓGENO
REPICADO DE REPICADO DE FomFom EN EN PDA.PDA.
- repicado del patógeno en - repicado del patógeno en placas de petri con PDA.placas de petri con PDA.
- estufa: 25- estufa: 252º C, 7 días.2º C, 7 días.
REPICADO DE REPICADO DE FomFom EN EN CPD.CPD.
-explante en matraz -explante en matraz erlenmeyer.erlenmeyer.
-agitador orbital (120 rpm), -agitador orbital (120 rpm), 25-27ºC, 16 horas luz, 6 25-27ºC, 16 horas luz, 6 días.días.
-filtrado del hongo.-filtrado del hongo.
-cuantificación de la -cuantificación de la densidad del inóculo.densidad del inóculo.
-ajuste de la concentración -ajuste de la concentración de inóculo.de inóculo.
1313
CULTIVO DUAL IN VITRO
CULTIVO DUALCULTIVO DUAL consiste en el enfrentamiento consiste en el enfrentamiento del patógeno y el antagonista en una placa de del patógeno y el antagonista en una placa de petri, analizando el crecimiento de ambos que se petri, analizando el crecimiento de ambos que se compara con el crecimiento individual de cada compara con el crecimiento individual de cada uno de ellos.uno de ellos.
SEPARACIÓNSEPARACIÓN::- 7 cm (HONGOS)- 7 cm (HONGOS)- 5 cm (BACTERIAS)- 5 cm (BACTERIAS)
ENSAYO:ENSAYO: 3 PLACAS DE PETRI, 4 REPETICIONES 3 PLACAS DE PETRI, 4 REPETICIONES TESTIGOS DE PATÓGENOTESTIGOS DE PATÓGENO
TESTIGOS DE ANTAGONISTATESTIGOS DE ANTAGONISTA
1414
CULTIVO DUAL DE Fom Raza 1.2 CULTIVO DUAL DE Fom Raza 1.2 CON CON Trichoderma harzianumTrichoderma harzianum
pequeña cantidad del preparado de pequeña cantidad del preparado de T. T.
harzianumharzianum con pinzas esterilizadas en con pinzas esterilizadas en
una placa de petri con PDA. una placa de petri con PDA.
enfrentamiento de explantes de 5 mm de enfrentamiento de explantes de 5 mm de
diámetro de diámetro de FomFom y y T. harzianum.T. harzianum.
placa de petri en estufa (27ºC).placa de petri en estufa (27ºC).
mediciones del diámetro de las colonias mediciones del diámetro de las colonias
cada 48 horas.cada 48 horas.
1515
CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON AspergillusAspergillus A5, A5, AspergillusAspergillus A8 y A8 y
PenicillumPenicillum sp. sp.
repicado de los hongos de la placa original repicado de los hongos de la placa original en PDA.en PDA.
enfrentamiento de explantes de 5 mm de enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de diámetro de FomFom con con Aspergillus Aspergillus yy Penicillum.Penicillum.
placa de petri en estufa (27ºC).placa de petri en estufa (27ºC). mediciones del diámetro de las colonias mediciones del diámetro de las colonias
cada 48 horas.cada 48 horas.
1616
CULTIVO DUAL DE FomCULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 RAZA 1.2 CON CON Aspergillus terreus, A. flavus Aspergillus terreus, A. flavus yy A. A.
ochraceus.ochraceus.
recuperación de los hongos recuperación de los hongos liofilizados.liofilizados.
enfrentamiento de explantes de 5 enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de mm de diámetro de FomFom y y Aspergillus.Aspergillus.
placa de petri en estufa (27ºC).placa de petri en estufa (27ºC). mediciones del diámetro de las mediciones del diámetro de las
colonias cada 48 horas.colonias cada 48 horas.
1717
CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON Pseudomonas fluorescensPseudomonas fluorescens y y
Pseudomonas putida.Pseudomonas putida.
1. recuperación de las bacterias liofilizadas.1. recuperación de las bacterias liofilizadas.
2. ensayo en: PDA y AGAR NUTRITIVO2. ensayo en: PDA y AGAR NUTRITIVO
3. enfrentamiento de explantes de 5 mm de 3. enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de diámetro de FomFom y y Pseudomonas Pseudomonas en Agar en Agar Nutritivo (separación de 5 cm).Nutritivo (separación de 5 cm).
4. placa de petri en estufa (27ºC)4. placa de petri en estufa (27ºC)
5. mediciones del diámetro de las colonias cada 5. mediciones del diámetro de las colonias cada 48 horas48 horas
1818
CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON CON Bacillus subtilis.Bacillus subtilis.
ENSAYO EN PDAENSAYO EN PDA
- ENFRENTAMIENTO DE - ENFRENTAMIENTO DE
EXPLANTES DE 5 mm DE EXPLANTES DE 5 mm DE
DIÁMETRO DE DIÁMETRO DE FomFom Y Y Bacillus Bacillus
subtilis subtilis EN PDA (SEPARACIÓN EN PDA (SEPARACIÓN
DE 5 CM).DE 5 CM).
- PLACA DE PETRI EN ESTUFA - PLACA DE PETRI EN ESTUFA
(27ºC)(27ºC)
- MEDICIONES DEL DIÁMETRO - MEDICIONES DEL DIÁMETRO
DE LAS COLONIAS CADA 48 DE LAS COLONIAS CADA 48
HORAS.HORAS.
ENSAYO CONTENIENDO EXUDADO DE ENSAYO CONTENIENDO EXUDADO DE
Bacillus subtilis.Bacillus subtilis.
- ENSAYO CON EXUDADOS DE ENSAYO CON EXUDADOS DE Bacillus Bacillus
subtilis.subtilis.
- 5 EXPLANTES DE 5 mm.- 5 EXPLANTES DE 5 mm.
- MATRAZ ERLENMEYER CON CPD.- MATRAZ ERLENMEYER CON CPD.
- AGITADOR ORBITAL (120 rpm, 7 DÍAS, - AGITADOR ORBITAL (120 rpm, 7 DÍAS,
TOTAL OSCURIDAD, TEMPERATURA TOTAL OSCURIDAD, TEMPERATURA
AMBIENTE).AMBIENTE).
- COMPROBACIÓN DEL CRECIMIENTO.COMPROBACIÓN DEL CRECIMIENTO.
- SE AÑADE AGAR.SE AÑADE AGAR.
- EXPLANTE DE EXPLANTE DE Fom.Fom.
- COMPROBACIÓN DEL DIÁMETRO DE LA COMPROBACIÓN DEL DIÁMETRO DE LA
COLONIA DE FOM CADA 48 HORAS.COLONIA DE FOM CADA 48 HORAS.
1919
CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CULTIVO DUAL DE Fom RAZA 1.2 CON Fo NO PATOGÉNICOCON Fo NO PATOGÉNICO
repicado de los hongos de la placa original repicado de los hongos de la placa original en PDAen PDA
enfrentamiento de explantes de 5 mm de enfrentamiento de explantes de 5 mm de diámetro de diámetro de FomFom con con FoFo NO PATOGÉNICONO PATOGÉNICO..
placa de petri en estufa (27ºC)placa de petri en estufa (27ºC) mediciones del diámetro de las colonias mediciones del diámetro de las colonias
cada 48 horascada 48 horas
CONTROL BIOLÓGICO CONTROL BIOLÓGICO IN VIVOIN VIVO
2121
PRODUCCIÓN DE PRODUCCIÓN DE Trichoderma Trichoderma harzianumharzianum
DETERMINACIÓN DE LA DETERMINACIÓN DE LA DENSIDAD DE INÓCULO DEL DENSIDAD DE INÓCULO DEL
PREPARADO COMERCIALPREPARADO COMERCIAL
““MÉTODO DE LAS MÉTODO DE LAS DILUCIONES”DILUCIONES”
- PDA CON NYSTANINA AL 1%.PDA CON NYSTANINA AL 1%.- DILUCIÓN DEL PREPARADO DILUCIÓN DEL PREPARADO
COMERCIAL EN 9 ml DE AGUA.COMERCIAL EN 9 ml DE AGUA.- DILUCIONES EN 6 VIALES.DILUCIONES EN 6 VIALES.- PLACAS DE PETRI EN ESTUFA (27ºC)PLACAS DE PETRI EN ESTUFA (27ºC)- OBSERVACIÓN DE PLACAS CADA 12 OBSERVACIÓN DE PLACAS CADA 12
HORAS.HORAS.
2222
PRODUCCIÓN DE PRODUCCIÓN DE AspergillusAspergillus A5 A5 repicado del hongo en PDA en placa de petri con repicado del hongo en PDA en placa de petri con
PDA (7 días,25-27ºC, oscuridad)PDA (7 días,25-27ºC, oscuridad)
repicado del hongo en CPDrepicado del hongo en CPD- 5 explantes de 5mm de diámetro en matraz de - 5 explantes de 5mm de diámetro en matraz de CPDCPD- agitador orbital 120 rpm en cámara de - agitador orbital 120 rpm en cámara de crecimiento (6 días, 25-27ºC, 16 horas de luz)crecimiento (6 días, 25-27ºC, 16 horas de luz)
filtrado del hongofiltrado del hongo
cuantificación de la densidad de inóculocuantificación de la densidad de inóculo
ajuste de la concentración de inóculoajuste de la concentración de inóculo
2323
GERMINACIÓN DE SEMILLAS DE MELÓN
germinación en placas de petrigerminación en placas de petri- capa de vermiculita- capa de vermiculita- disco papel secante esterilizado- disco papel secante esterilizado- semillas- semillas- disco de papel secante esterilizado- disco de papel secante esterilizado
cámara de crecimiento (3 días, 25-27ºC, cámara de crecimiento (3 días, 25-27ºC, 16 horas luz)16 horas luz)
plantación en vasos de plástico plantación en vasos de plástico perforados en la base o bandejas de perforados en la base o bandejas de alvéolosalvéolos
Etiquetan y enumeran con el Etiquetan y enumeran con el antagonista utilizado.antagonista utilizado.
cámara de crecimiento (12 días)cámara de crecimiento (12 días)
2424
APLICACIÓN DE LOS ANTAGONISTAS APLICACIÓN DE LOS ANTAGONISTAS AL SUBSTRATOAL SUBSTRATO
CADA ENSAYO:CADA ENSAYO:
- 40 plántulas (4 repeticiones de 10 plántulas cada - 40 plántulas (4 repeticiones de 10 plántulas cada una)una)
- 10 plántulas testigos antagonistas - 10 plántulas testigos antagonistas (control +)(control +)
- 10 plántulas testigo con inóculo del patógeno- 10 plántulas testigo con inóculo del patógeno
(control -)(control -)
- 10 plántulas testigo sin tratar - 10 plántulas testigo sin tratar (control (control ))
SUBTRATO ESTÉRIL Y SUBTRATO NO ESTÉRILSUBTRATO ESTÉRIL Y SUBTRATO NO ESTÉRIL
2525
SUBSTRATOSUBSTRATO
El El substrato estérilsubstrato estéril se utiliza para observar el se utiliza para observar el comportamiento de los microorganismos comportamiento de los microorganismos antagonistas y Fom sin que se encuentre antagonistas y Fom sin que se encuentre sometido a la acción de otros microorganismos sometido a la acción de otros microorganismos que se puedan hallar en el substrato (bacterias, que se puedan hallar en el substrato (bacterias, hongos, etc.).hongos, etc.).
Los ensayos en Los ensayos en substrato no estérilsubstrato no estéril se realizan se realizan para observar el comportamiento de los para observar el comportamiento de los microorganismos antagonistas y Fom en las microorganismos antagonistas y Fom en las condiciones en las que se encontrarían las condiciones en las que se encontrarían las plántulas de melón en el invernadero.plántulas de melón en el invernadero.
2626
TRATAMIENTO DEL SUBSTRATO CON Trichoderma harzianum
Ensayos:Ensayos:a) dosis 55 gr/kg de a) dosis 55 gr/kg de substratosubstratob) dosis 27.5 gr/kg de b) dosis 27.5 gr/kg de substratosubstrato
Mezclar de forma Mezclar de forma homogéneahomogénea
Vasos de plástico Vasos de plástico perforadosperforados
Bandejas de alvéolosBandejas de alvéolos Semilla germinada de Semilla germinada de
melónmelón Cámara de crecimientoCámara de crecimiento
2727
TRATAMIENTO DEL SUBSTRATO CON Aspergillus A5
Suspensión conídica Suspensión conídica concentración 10concentración 1077 conidias/mlconidias/ml
En 100 ml de En 100 ml de substrato se añaden substrato se añaden 10 ml de suspensión 10 ml de suspensión conídicaconídica
Mezcla homogéneaMezcla homogénea Semilla germinada de Semilla germinada de
melónmelón Cámara de Cámara de
crecimientocrecimiento
2828
TRATAMIENTO DEL SUBSTRATO CON MICORRIZAS
En 150 ml de En 150 ml de substrato se añade substrato se añade una cucharilla de una cucharilla de café rasa del café rasa del preparado preparado micorrízicomicorrízico
Semilla de melón Semilla de melón germinadagerminada
Cámara de Cámara de crecimientocrecimiento
2929
INOCULACIÓN DE LAS PLÁNTULAS DE INOCULACIÓN DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN CON EL PATÓGENOMELÓN CON EL PATÓGENO
Suspensión de 5 x 10Suspensión de 5 x 1055 conidias/ml de conidias/ml de FomFom Raza 1.2 Raza 1.2
Se añaden 10 ml de suspensión a Se añaden 10 ml de suspensión a cada vaso que contiene las plántulas cada vaso que contiene las plántulas de melón.de melón.
Cámara de crecimientoCámara de crecimiento
3030
REAISLAMIENTO DEL REAISLAMIENTO DEL PATÓGENO EN PDA.PATÓGENO EN PDA.
REAISLAMIENTO REAISLAMIENTO siembra en PDA de siembra en PDA de fragmentos de raíz, fragmentos de raíz, cuello y tallo cuello y tallo (desinfestados) para (desinfestados) para comprobar si el comprobar si el patógeno ha sido patógeno ha sido capaz de colonizar el capaz de colonizar el sistema vascular de sistema vascular de las plantas tratadas las plantas tratadas con antagonistas e con antagonistas e inoculadas con Fominoculadas con Fom
3131
CÁLCULO DEL PORCENTAJE DE CÁLCULO DEL PORCENTAJE DE MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON
MICORRIZAS ARBUSCULARES.MICORRIZAS ARBUSCULARES.
A los 30 días del tratamiento.A los 30 días del tratamiento. 3 plantas por ensayo3 plantas por ensayo Lavado de raícesLavado de raíces Fragmentos de 2-3 cmFragmentos de 2-3 cm Decoloración de raíces con KOH Decoloración de raíces con KOH
al 10%, temperatura ambienteal 10%, temperatura ambiente Lavado y acidificación con CLH Lavado y acidificación con CLH
0.1N durante 30 minutos.0.1N durante 30 minutos. Tinción con Azul Tripán (4 horas)Tinción con Azul Tripán (4 horas) Intervalos de 15 min, lavado con Intervalos de 15 min, lavado con
aguaagua Colocación de fragmentos en un Colocación de fragmentos en un
porta-objetos de forma paralelaporta-objetos de forma paralela
Con el microscopio se realizan observaciones verticales en el porta-objetos tomando como referencia una distancia constante de 0.2 mm, y se anotan en 100 intersecciones si están o no micorrizadas.
3232
EVALUACIÓN DE LA INCIDENCIA Y SEVERIDAD DE LA ENFERMEDAD
ESCALA DE SEVERIDADESCALA DE SEVERIDAD
00 0% PLANTA SANA 0% PLANTA SANA
11 0-10% SÍNTOMAS LEVES 0-10% SÍNTOMAS LEVES
22 10-50% SÍNTOMAS 10-50% SÍNTOMAS SEVEROS SEVEROS
33 50-75% SÍNTOMAS MUY 50-75% SÍNTOMAS MUY SEVEROS SEVEROS
44 >75% PLANTA MUERTA >75% PLANTA MUERTA
RESULTADOSRESULTADOS
3434
1. RESULTADO DEL ENFRENTAMIENTO 1. RESULTADO DEL ENFRENTAMIENTO DUAL DUAL IN VITROIN VITRO
Finalización del ensayo:Finalización del ensayo:
- Unión física entre las colonias de Unión física entre las colonias de antagonista y patógenoantagonista y patógeno
- Halo de separación constante Halo de separación constante durante varias medicionesdurante varias mediciones
3535
RESULTADO DEL ENFRENTAMIENTO RESULTADO DEL ENFRENTAMIENTO DUAL DUAL IN VITROIN VITRO
Halo de inhibición entre el patógeno y Aspergillus A5
3636
DETERMINACIÓN DE LA DENSIDAD DE DETERMINACIÓN DE LA DENSIDAD DE INÓCULO DEL PREPARADO COMERCIAL INÓCULO DEL PREPARADO COMERCIAL
DE DE Trichoderma harzianumTrichoderma harzianum
conteo a las 48 horas de conteo a las 48 horas de realizarse las dilucionesrealizarse las diluciones
- incontables- incontables
- placas dilución -6 - placas dilución -6 contablescontables
resultado total 16.6 x 10resultado total 16.6 x 1077 u.f.c en el paquete original u.f.c en el paquete original de de Trichoderma harzianumTrichoderma harzianum
3737
RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESPUÉS DE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Trichoderma harzianum Testigo Fom
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 55 g/kg substrato estéril.
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESDE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Trichoderma harzianum Testigo Fom
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 55 g/Kg substrato no estéril.
3838
RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESDE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Trichoderma harzianum Testigo Fom
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 55 g/kg substrato estéril
(transplante).
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESDE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Trichoderma harzianum Testigo Fom
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 27.5 g/kg substrato estéril.
3939
RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESPUES DE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Trichoderma harzianum Tesigo Fom
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 27.5 g/Kg substrato no estéril.
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Trichoderma harzianum dosis 27.5 g/Kg substrato estéril, transplante.
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DÍAS DESDE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Trichoderma harzianum Testigo Fom
4040
RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESDE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Aspergillus A-5 Testigo Fom
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Aspergillus A-5.
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESDE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Glomus mosseae Testigo Fom
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como antagonista Glomus mosseae.
4141
RESULTADO DEL CONTROL BIOLÓGICO IN VIVO
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESDE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Glomus intraradices Testigo Fom
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como
antagonista Glomus intraradices
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESDE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
SE
VE
RID
AD
Glomus claroideum Testigo Fom
Curva de progreso de la enfermedad tras infectar las plantas con el patógeno (testigo control -) y comparación con los valores medios del ensayo utilizando como
antagonista Glomus claroideum.
4242
RESULTADO DEL REAISLAMIENTO DEL PATÓGENO EN PDA
En todas las pruebas de aislamiento se dio En todas las pruebas de aislamiento se dio positivopositivo en cuanto a infestación de las plantas por en cuanto a infestación de las plantas por Fusarium Fusarium oxysporumoxysporum f. sp. f. sp. Melonis.Melonis.
Reaislamiento del patógeno en PDA de plantas tratadas con Glomus intraradices
Reaislamiento del patógeno de planta tratada con Trichoderma harzianum utilizando la
dosis recomendada (substrato no estéril)
4343
REAISLAMIENTO DEL REAISLAMIENTO DEL PATÓGENO EN PDAPATÓGENO EN PDA
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
R C TB TM TA
55 gr/kg (SE) 55 gr/kg (SNE) 27,5 gr/kr (SE) 27,5 gr/kg (SNE)
Porcentajes de reaislamiento de Fom en explantes de plantas tratadas con distintas dosis de Trichoderma harzianum, en substrato estéril (SE) y no estéril (SNE), procedentes de explantes de raíz (R), cuello (C), tallo bajo (TB), tallo medio (TM) y tallo alto (TA).
4444
REAISLAMIENTO DEL REAISLAMIENTO DEL PATÓGENO EN PDAPATÓGENO EN PDA
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
R C TB TM TA
Glomus mosseae Glomus intraradices Glomus claroideum
Porcentajes de reaislamiento de Fom en explantes de plantas tratadas con Micorrizas Arbusculares, en sustrato estéril (SE), procedentes de explantes de raíz (R), cuello (C), tallo bajo (TB), tallo medio (TM) y tallo alto (TA).
4545
3.3. RESULTADO DEL CÁLCULO DEL PORCENTAJE RESULTADO DEL CÁLCULO DEL PORCENTAJE DE MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS DE MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON M.A.PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON M.A.
Los porcentajes de raíz Los porcentajes de raíz micorrizada obtenidos micorrizada obtenidos son los siguientes:son los siguientes:
- - Glomus intraradicesGlomus intraradices: : 10’12 %10’12 %
- - Glomus mosseaeGlomus mosseae: 10’41 : 10’41 %%
- - Glomus claroideumGlomus claroideum: : 10’23 %10’23 %
Resultado del cálculo del porcentaje de micorrización de las raíces de las plántulas de melón tratadas con micorrizas.
0
5
10
15
20
PO
RC
EN
TA
JE D
E
MIC
OR
RIZ
AC
IÓN
Glomus mosseae Glomus intraradices Glomus claroideum
4646
RESULTADO DEL CÁLCULO DEL PORCENTAJE DE RESULTADO DEL CÁLCULO DEL PORCENTAJE DE MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS MICORRIZACIÓN DE LAS RAÍCES DE LAS
PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON M.A.PLÁNTULAS DE MELÓN TRATADAS CON M.A.
Observación de la micorriza por el microscopio, donde se aprecian vesículas dentro de la raíz.
4747
4. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS4. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS
Comparativa de las diferentes Comparativa de las diferentes curvas de progreso de la curvas de progreso de la enfermedadenfermedad de los ensayos realizados de los ensayos realizados
0
1
2
3
4
5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
Nº DE DÍAS DESDE LA INOCULACIÓN
ÍND
ICE
DE
S
EV
ER
IDA
D
Trichoderma harzianum 55 g/kg Substrato estéril
Trichoderma harzianum 55 g/kg Substrato no estéril
Trichoderma harzianum 55g/kg de substrato( transplante)
Trichoderma harzianum 27,5 g/kg Substrato estéril
Trichoderma harzianum 27,5g/kg de substrato no estéril
Trichoderma harzianum 27,5 g/kg Substrato estéril (transplante)
Aspergillus spp. Substrato estéril
Glomus mosseae Substrato estéril
Glomus intraradices Substrato estéril
Glomus Claroideum Substrato estéril
Testigos de Fusarium oxysporum f. sp. melonis ( substrato estéril)
4848
DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS
En los diferentes ensayos realizados, se ha En los diferentes ensayos realizados, se ha podido observar que las plántulas de melón podido observar que las plántulas de melón tratadas con tratadas con Trichoderma harzianumTrichoderma harzianum (55 gr/kg (55 gr/kg substrato estéril) y substrato estéril) y Glomus claroideumGlomus claroideum, han , han conseguido retardar el proceso de infección del conseguido retardar el proceso de infección del patógeno Fom raza 1.2 en 8 días, siendo la media patógeno Fom raza 1.2 en 8 días, siendo la media de los demás ensayos de 5,8 días.de los demás ensayos de 5,8 días.
Se ha comprobado de igual forma que tras el Se ha comprobado de igual forma que tras el reaislamiento del patógeno en PDA en todos los reaislamiento del patógeno en PDA en todos los ensayos realizados, éste se ha desplazado de ensayos realizados, éste se ha desplazado de forma sistémica por toda la plántula produciendo forma sistémica por toda la plántula produciendo la muerte.la muerte.
4949
5. RESULTADO DEL ANÁLISIS 5. RESULTADO DEL ANÁLISIS ESTADÍSTICOESTADÍSTICO
ANOVA Table: En los ensayos realizados ANOVA Table: En los ensayos realizados no hubo diferencias significativas entre las no hubo diferencias significativas entre las variables, con un 95% de nivel de variables, con un 95% de nivel de confianza.confianza.
MULTIPLE RANGE TESTS: En los ensayos MULTIPLE RANGE TESTS: En los ensayos realizados no hubo diferencias realizados no hubo diferencias significativas entre los pares de datos, con significativas entre los pares de datos, con un 95% de nivel de confianza.un 95% de nivel de confianza.
5050
CONCLUSIONES
Los microorganismos que han resultado demostrar Los microorganismos que han resultado demostrar su eficacia antagonista ante el patógeno su eficacia antagonista ante el patógeno Fusarium Fusarium oxysporumoxysporum f. sp. f. sp. melonismelonis raza 1.2 en el control raza 1.2 en el control biológico biológico in vitroin vitro tras realizarse los experimentos tras realizarse los experimentos han sido: han sido: Trichoderma harzianumTrichoderma harzianum y y AspergillusAspergillus A-5. A-5.
En los ensayos realizados, se ha comprobado que la En los ensayos realizados, se ha comprobado que la inoculación con inoculación con Trichoderma harzianumTrichoderma harzianum (empleando la dosis de 55 gr/kg como 27.5 gr/kg) (empleando la dosis de 55 gr/kg como 27.5 gr/kg) estimuló el crecimiento de las plántulas de melón.estimuló el crecimiento de las plántulas de melón.
5151
CONCLUSIONES Ningún hongo o bacteria que se ha utilizado en Ningún hongo o bacteria que se ha utilizado en
este proyecto ha dado como resultado un control este proyecto ha dado como resultado un control total de total de Fusarium oxysporumFusarium oxysporum f. sp. f. sp. melonismelonis, si , si bien se ha demostrado que los hongos bien se ha demostrado que los hongos Trichoderma harzianumTrichoderma harzianum (dosis 55 gr/Kg de (dosis 55 gr/Kg de substrato estéril) y substrato estéril) y Glomus claroideumGlomus claroideum ha ha retardado la aparición de los síntomas del hongo retardado la aparición de los síntomas del hongo patógeno sobre las plántulas que se han tratado.patógeno sobre las plántulas que se han tratado.
Los porcentajes de micorrización de las raíces de Los porcentajes de micorrización de las raíces de las plántulas de melón tratadas con Micorrizas las plántulas de melón tratadas con Micorrizas Arbusculares (MA) han sido bajos, alrededor de Arbusculares (MA) han sido bajos, alrededor de un 10 %, debido a esto su eficacia como un 10 %, debido a esto su eficacia como microorganismo antagonista no ha sido efectivomicroorganismo antagonista no ha sido efectivo
FINAL FINAL PRESENTACIÓNPRESENTACIÓN
top related