tinciÓn fluorescente con auramina-rodamina

TINCIÓN FLUORESCENTE CON AURAMINA-RODAMINA

CHARLES E. PADILLA GÁLVEZ

FUNDAMENTO

Es una tinción muy usada para micobacterias, cuando el volumen de muestras a examinar es elevado. Se fundamenta en la afinidad que poseen los ácidos micólicos de la pared celular de las micobacterias por los colorantes fluorescentes o fluorocromos Auramina y Rodamina.

Estos colorantes se fijan a las bacterias que aparecen de color amarillo o naranja brillante contra un fondo oscuro.

Un aspecto importante de la coloración rodamina-auramina es que luego los frotis pueden ser reteñidos con la coloración de Ziehl-Neelsen o Kinyoun directamente sobre la tinción con el fluorocromo, si se elimina antes el aceite de inmersión.

Técnica

1. Extensión. 2. Desecación. 3. Fijación. Dejar enfriar. 4. Coloración: Cubrir la preparación con el

colorante auramina-rodamina previamente filtrado. Mantenerlo así durante 15 min. No hay que calentar.

5. Lavar con agua destilada. 6. Decoloración con alcohol -HCl. Cubrir la preparación

con el decolorante y dejar actuar de 3 a 4 minutos. 7. Lavar con agua destilada. 8. Añadir permanganato potásico al 0,5% en agua destilada

y dejar actuar de 2 a 4 minutos. El permanganato se utiliza para eliminar la fluorescencia residual de los desechos de fondo. Pero debe evitarse el tratamiento excesivo con el contra colorante porque puede rebajar la intensidad fluorescente de los bacilos coloreados.

9. Lavar con agua destilada.

10. Secar al aire y observar con el microscopio de fluorescencia.

El agudo contraste entre las micobacterias coloreadas brillantemente y el fondo oscuro ofrece las grandes ventajas de una fácil, rápida y completa observación. Puede usarse un objetivo de 25X (100X en la tinción de Ziehl-Neelsen y similares), para observar el frotis, lo que permite la inspección de un área extensa en poco tiempo. Otras ventajas son el mejor contraste, el mínimo esfuerzo visual y la relativa falta de Importancia de la agudeza para el color del observador.

Comparación entre los tiempos requeridos para observar extendidos negativos coloreados con una coloración convencional y Auramina-Rodamina

CONDICION AURAMINA-RODAMINA

FUSCHINA

AUMENTO 400X 1000X

MAXIMO DE CAMPOS

OBSERVADOS

30 300

TIEMPO TOTAL PARA OBSERVAR UN EXTENDIDO

3 Minutos

S:96.5%

E: 98%

15 Minutos

COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN

BACILOSCOPIA Y TINCIONES ACIDORRESISTENTES

TIPO DE TINCION

UNA MUESTRA

DOS MUESTRAS

TRES MUESTRAS

Fluorescencia 83% 83% 92%

Ziehl-Neelsen 61% 66% 80%

COLORACIÓN A AURAMINA-RODAMINA