tecnicas histológicas ordinarias y especiales
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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
PARA PREPARAR MUESTRAS PARA SU
OBSERVACION
VITALES Se realizan directamente en el individuo vivo.
SUPRAVITALES Se estudian tejidos vivos separados del individuo.
Emplea: Técnicas de Cultivos Celulares y
Tisulares.
POSTVITALES Se efectúa sobre
muestras de tejido muerto fijados o no
fijados
TÉCNICAS EN MICROSCOPÍA
ÓPTICA
TEJIDOS BLANDOS
TÉCNICA HISTOLÓGICA
BÁSICA
ETAPAS:
FIJACIÓN
INCLUSIÓN
CORTE
COLORACIÓN
MONTAJE
TÉCNICA HISTOQUÍMICA
TEJIDOS DUROS
TÉCNICAS EN MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA ANALÍTICA
Fijación
Interrumpe los procesos del metabolismo
celular
Conserva de manera fidedigna
•Estructuras Celulares y Tisulares
Procedimientos Físicos
(Congelación) o Químicos (el más usado)
Se debe iniciar lo más pronto posible para
evitar la autolisis
Dura desde unas horas hasta varios días
dependiendo del tamaño de la
muestra
INCLUSIÓN
Obtiene una lámina
delgada de la Muestra, 5
Micras
Las Muestras adquieren
dureza para poder ser cortados.
La más utilizada es la Inclusión en Parafina.
Para realizar la inclusión:
•Deshidratar las muestras (alcohol etílico)
•Aclarar la Muestra (Benceno, xileno, tolueno, entre otros).
Corte
Micrótomo
Manual
Motorizado
Micrótomo Minot o de
rotación
Cuchilla de acero asegurada
fuertemente y permanece fija con un ángulo de inclinación
adecuado
Sistema de fijación del Bloque de
Parafina
Desplazamiento Vertical para el corte
Una Vez realizado el corte se extiende por
flotación en agua a 37°C
Se recoge el corte en un porta objetos y se
deja secar en una estufa a 37°C
CO
LOR
AC
IÓN
Utiliza colorantes
Mayormente Soluciones Acuosas
Hematoxilina Resalta estructuras basófilas
Eosina Resalta Eosinofilas o
ácidofilas
Eliminación de la Parafina Solventes orgánicos tipo
xileno
Hidratación del Corte en soluciones decrecientes de
etanol
Se termina de Hidratar el corte
Agua destilada
Se sumerge la muestra en una cubeta con colorante
Se elimina el exceso de colorante
Se sumerge en agua destilada
Montaje
Lavado del Corte Agua Destilada
Deshidratación Soluciones
crecientes de etanol
Aclaración de la Muestra
Xileno
Cubrir el objeto
Se colocan gotas de medio de
montaje
Se coloca un cubreobjetos
Técnica Histoquímica
Reacciones químicas y/o bioquímicas
Localiza substancias o actividad de enzimas en muestras
histológicas.
Cromógenos
La enzima adquiere una coloración observable con el
microscopio óptico.
Técnicas InmunoHistoquímicas
Utilizan antisueros o anticuerpos
específicos contra componentes
tisulares o celulares a identificar.
Reacciones Anti Cuerpo (Ac) / Antígeno (Ag)
Resaltar inmunoglobinas
uniéndolas a moléculas
fluorescentes o enzimas
mediante el uso de cromógenos
Tejidos Duros Técnica de
Descalcificación
Se descalcifican y ablandan los tejidos
después de la fijación.
Soluciones de ácidos fuertes
Ácidos débiles
Quelantes químicos
Se realiza la inclusión en parafina.
Para piezas dentarias se recomienda una
inclusión en celoidina
Se cortan y tiñen
Tejidos Duros
Técnica de Inclusión del
tejido duro fijado sin descalcificar
Se utiliza Metil-metacrilato
Cualquier Metacrilato que
alcance gran dureza
Micrótomo motorizado con una cuchilla de
carburo de tungsteno
Las Secciones pueden
observarse con luz común, luz polarizada o
fluorescencia sin colorear.
Tejidos Duros Técnica de Desgaste
Se toman láminas gruesas de la
muestra.
Frotación contra piedra de Arkansas de Grano Grueso.
Frotación contra piedra de Arkansas
de Grano Fino.
Se obtiene una muestra de 30
Micras.
Microscopía Electrónica
de Transmisión
Ultra micrótomo para muestras de 30
a120 nm de grosor
Deshidratación con Etanol o
acetona
Postfijación con Tetróxido de
Osmio
Contraste con citrato de
uranilo y/o citrato de
plomo
Para el estudio de tejidos duros
se utilizan técnicas de microscopía
analítica
Microscopía Electrónica
Analítica
Técnica no destructiva
•Permite conocer <In Situ> y en segundos la morfología y composición química de la muestra
Microanálisis por energía dispersiva de Rayos X
•Inducción de electrones con rayos X para identificar los elementos químicos de la muestra
•Se registran los espectros en picos Gaussianos
Es necesario realizar una criofijación de las
muestras a bajas temperaturas.
Microscopía Electrónica de Barrido
Interacción de un haz de
electrones sobre la superficie del
espécimen
Origina electrones
secundarios captados por un
detector.
El detector amplifica la
señal eléctrica y la transmite a un
monitor
Preparación de
Muestras:
Fijación en Glutaraldehído
PostFijación con tetróxido
de osmio
Deshidratación de las muestras postfijadas en soluciones de
acetona o etanol
Desecación mediante técnica de punto crítico (Sustitución del
líquido en la muestra por CO2 Líquido el cual se
vuelve gas y se elimina
lentamente)
Montaje de las muestras en
porta muestras de aluminio
usando como adherente y
Conductor Plata coloidal.
Metalización con oro para asegurar la
conductividad eléctrica
Para Tejidos duros solo es
necesario montar y
recubrir las muestras
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