tecnicas de biologÍa molecular ies joaquÍn turina sevilla
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TECNICAS DE BIOLOGÍA TECNICAS DE BIOLOGÍA MOLECULARMOLECULAR
IES JOAQUÍN TURINAIES JOAQUÍN TURINASEVILLASEVILLA
ENDONUCLEASASENDONUCLEASASO ENZIMAS DE RESTRICCIÓNO ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Generan cortes internos en la molécula de Generan cortes internos en la molécula de ADNADN
Pueden generar extremos romos o Pueden generar extremos romos o cohesivoscohesivos
Enzimas de Restricción
Extremos cohesivosExtremos cohesivos
Extremos romosExtremos romos
Clonación y uso de enzimasClonación y uso de enzimas
Separación de fragmentosSeparación de fragmentos
Geles de AgarosaGeles de Agarosa
Geles de Geles de poliacrilamidapoliacrilamida
CLONACIÓNCLONACIÓN
PCR (PCR (reacción en cadena de reacción en cadena de polimerasa) Componentes de la polimerasa) Componentes de la
reacciónreacción PolimerasaPolimerasa PrimersPrimers dNTP’sdNTP’s Cloruro de magnesioCloruro de magnesio AguaAgua Buffer Buffer
SOUTHERN BLOTSOUTHERN BLOT
1) Blood sample. 2) DNA is extracted from blood cells. 3) DNA is cut into fragments by a restriction enzyme. 4) The DNA fragments are separated into bands during electrophoresis in an agarose gel. 5) The DNA band pattern in the gel is transferred to a nylon membrane. 6) Radioactive DNA probe, designed to recognise specific DNA sequences, is prepared. 7) Probe DNA binds to the specific DNA sequences on the membrane. 8) Excess DNA is washed off, but the DNA pattern is invisible at this stage. 9) X-ray film is placed next to the membrane & exposed to the radioactive DNA. 10) The developed X-ray shows the pattern of DNA bands
SECUENCIACIÓNSECUENCIACIÓN
VNTR
DNA fingerprinting
CLONACIÓN EN ANIMALESCLONACIÓN EN ANIMALES
COPY-CAT (EE.UU 2002) COPY-CAT (EE.UU 2002)
PAMPA (Argentina 2002)PAMPA (Argentina 2002)
PROMETEA (Italia 2003)PROMETEA (Italia 2003)
Ian Wilmut and Dolly. In 1996, British embryologist Professor Ian Wilmut created, the world's first sheep cloned from an adult sheep cell. The research was conducted at the Roslin Institute in Edinburgh, Scotland.
Marcadores molecularesMarcadores molecularesY sus aplicacionesY sus aplicaciones
Tipos de MarcadoresTipos de Marcadores
Directos o sea dentro del gen Directos o sea dentro del gen (intragénicos)(intragénicos)
Indirectos usando a otro gen o marcador Indirectos usando a otro gen o marcador cercano en el cromosoma para poder cercano en el cromosoma para poder identificar sus diferencias entre individuosidentificar sus diferencias entre individuos
RFLP’sRFLP’s
Pueden hacerse por Southern blotPueden hacerse por Southern blot Pueden hacerse por PCRPueden hacerse por PCR
UtilidadUtilidad
Detección de individuos portadores de un Detección de individuos portadores de un gen recesivo.gen recesivo.
Test de paternidad o trazabilidad.Test de paternidad o trazabilidad. Selección asistida por marcadores, Selección asistida por marcadores, Salud publica, Salud publica, Virología, etcVirología, etc
Por Southern blot
Por PCR y luego restricción
VNTRs o microsatélitesVNTRs o microsatélites
Pueden hacerse por Southern blotPueden hacerse por Southern blot Por PCR y geles de poliacrilamida o Por PCR y geles de poliacrilamida o
agarosaagarosa Por SSCPPor SSCP
Cepas diferentes de Salmonellas
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