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ResultadosResultados de la de la semanasemanaanterior (TSB)anterior (TSB)
Título de la gráfica: ______________________________
# tuboTSB
Crecimiento/No crecimiento
Descripción del crecimiento
1-24
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ResultadosResultados de la de la semanasemanaanterior (TSA slant)anterior (TSA slant)
Título de la gráfica: ______________________________
tuboTSA slant
Crecimiento/No crecimiento
Descripción del crecimiento
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Lab #3Técnicas de cultivos purosTécnicas de cultivos puros
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ObjetivosObjetivos
� Diferenciar entre ciertos medios de cultivo� Describir cómo preparar un medio� Diferenciar las distintas técnicas de aislación:
esparcido, estriado y vertido en platoesparcido, estriado y vertido en plato� Llevar a cabo un estriado del tubo de
transferencia de la semana anterior� Hacer una dilución de agua y vertir en platos
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¿Qué contiene un medio?¿Qué contiene un medio?
�� Aquellos requerimientos nutricionales que Aquellos requerimientos nutricionales que los microorganismos necesitan para los microorganismos necesitan para crecer. crecer.
�� Depende del ambiente en donde viven.Depende del ambiente en donde viven.�� Depende del ambiente en donde viven.Depende del ambiente en donde viven.
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Algunos Requerimientos nutricionales:� Carbono (C)� Nitrógeno (N)� Elementos no metálicos :
� azufre (S) y fósforo (P)� azufre (S) y fósforo (P)
� Elementos metálicos:� Ca++, Na++, K+, Cu++, Mg++, Mn++, Fe+2,+3 y trazas
de Zn++
� Vitaminas� H20
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Factores físicos que afectan el crecimiento
� Temperatura� pH
� ** ambas afectan las actividades enzimáticas
� Disponibilidad de oxígeno� oxígeno atmosférico
• Formación de ATP
� fermentación anaerobia
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MEDIOS DE CULTIVO� Clasificación :1. Físicamente
Medio %Agar EjemploLíquido 0 Caldo NutritivoSemisólido 0.5 a 1 Medio MovilidadSólido 1.5 a 2 Agar NutritivoSólido 1.5 a 2 Agar Nutritivo
2. QuímicamenteDefinido: Composición quím. definida (Sales)Complejo: Composición quím. difícil de definir
(Peptona, Extr. levadura, etc).
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3. Usos
� Líquido (caldo)
� Semisólido
� Sólido
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3. Usos (cont)•Líquido (caldo)
•Crecimiento de gran # microorganismos•Estudios fermentación
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3. Usos (cont)•Semisólido:
•Crecimiento anaerobio (fermentación)•Motilidad
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3. Usos (cont)
•Sólido:•Crecimiento superficial•Cultivo puro (transferencia)
Agar slant
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MedioMedio parapara el el crecimientocrecimiento de de unauna bacteria bacteria fastidiosafastidiosa
Ejemplo de los componentes:
Components Amount Function of components
Beef extract 1.5 g Source of vitamins and other growth factors
Yeast extract 3.0 g Source of vitamins and other growth factors
Peptone 6.0 g Source of amino acids, N, S, and P
Glucose 1.0 g C and energy source
Agar 15.0 g Inert solidifying agent
Water 1000 mL
pH 6.6
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ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: :
A. Medio no selectivo
Es un medio en el cual puede crecer una gran variedad de microorganismos; tanto G+ como G-.
Ej.: Plate count Agar, Tryptic Soy Broth, Tryptic Soy Agar
TSA
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B. Medio Selectivo
ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: :
••Ej.: Brain Heart Infusion (BHI) 6.5% NaCl, Ej.: Brain Heart Infusion (BHI) 6.5% NaCl, Crecimiento en SalCrecimiento en SalEnterococcusEnterococcus
•• Lauryl Broth con Antibiotico, Lauryl Broth con Antibiotico, Microorganismos resistentesMicroorganismos resistentes
Seleciona a un grupo de microorganismos
•• Lauryl Broth con Antibiotico, Lauryl Broth con Antibiotico, Microorganismos resistentesMicroorganismos resistentes
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C. Medio Diferencial
ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: :
No limita el crecimiento de microorganismos solo permitediferenciar a los organismos que crecieron. Importante enambiente clínico para diagnostico de patógenos.
Hemolisis Beta, Alfa y Gamma(observar propiedades hemolíticas)
Blood Agar
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ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: : D. Medio Selectivo Diferencial
Ej. :MacConkey AgarSelectivo: Bacilos gram negativoDiferencial: Fermentadores de lactosa/no fermentadoresOrganismos: Escherichia, Salmonella
Ej. :Bile Esculin Agar
Ej. :Mannitol Salt AgarSelectivo: Alto contenido de salDiferencial: Fermentadores de MannitolOrganismos: Staphylococcus
Ej. :Bile Esculin AgarSelectivo: Sales biliaresDiferencial: Hidrolizacion de EsculinaOrganismos: Enterococcus, Streptococcus
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ClasificaciónClasificación de de mediosmedios de de cultivocultivo: :
E. Medio EnriquecidoPosee características nutricionales específicas para estimular la producción de algún componente
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Preparación de Medios� Medios comerciales deshidratados� Recipientes: Tubos y Platos de Petri� Esterilización : Depende de la naturaleza del material y su estado físico!!
� Calor húmedo: • autoclave (121º C 15 lbs. presión 15 min.)• autoclave (121º C 15 lbs. presión 15 min.)
� Calor seco� Luz ultravioleta� Óxido de etileno (gas)� Filtración:
• Filtros bacteriológicos (0.1 a 0.22 µm, 0.45 µm)
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DiluciónDilución
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�� PermitePermite el el aislamientoaislamiento de de coloniascolonias discretasdiscretas quequepuedenpueden ser ser subcultivadassubcultivadas en en cultivoscultivos purospuros..
�� TécnicasTécnicasa. a. EstriadoEstriado en en platoplatob. b. VertidoVertido en en platoplato
Dilución
A.
b. b. VertidoVertido en en platoplatoc. c. EsparcidoEsparcido en en platoplato
B.
C .
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ESTRIADO EN PLATO
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Estriado en plato (Resultado)
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Esparcido en platoEsparcido en plato
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Dilusiones En SerieDilusiones En Serie
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Vertido en PlatoVertido en Plato
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� Recuento de BacteriasUnidades Formadoras de Colonias (UFC)
UFC/ml = # de colonias x 1/ factor de dilución
Consideraciones:Contar platos con 25 a 250 coloniasPlatos con 250 reportar como TNTC
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Parte ExperimentalParte Experimental
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A. A. EstriadoEstriado en en PlacasPlacas
�� Con Con unauna agujaaguja de de inocularinocular “loop” tome “loop” tome unaunamuestramuestra del del tubotubo de la bacteria de la bacteria quequetransfiriótransfirió la la semanasemana pasadapasada (TSA slant) y (TSA slant) y transfieratransfiera al al platoplato de TSA de TSA provistoprovisto..transfieratransfiera al al platoplato de TSA de TSA provistoprovisto..
�� RepitaRepita esteeste procedimientoprocedimiento con el con el tubotubo del del desconocidodesconocido..
�� Solo Solo tomarátomará la la muestramuestra del del tubotubo al al inicioiniciodel del estriadoestriado
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Recuerde utilizar las técnicas Recuerde utilizar las técnicas acépticas necesarias para que acépticas necesarias para que
evite contaminación de la muestra.evite contaminación de la muestra.1
4
1
4
Desconocido!!!
Esterilice la aguja antes de tocar la muestra y después de pasarla por el medio
2
3
4
2
3
4
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B. Esparcido en PlatoB. Esparcido en Plato
�� La mitad del grupo se lavará las manos La mitad del grupo se lavará las manos con agua y jabón la otra mitad con agua y jabón la otra mitad nono ..
�� Todos los estudiantes se enjuagarán las Todos los estudiantes se enjuagarán las manos en los envases previamente manos en los envases previamente manos en los envases previamente manos en los envases previamente identificados (los que tienen las manos identificados (los que tienen las manos lavadas en uno y la otra mitad del grupo lavadas en uno y la otra mitad del grupo en el otro)en el otro)
�� Se hará una dilución en serie utlizando Se hará una dilución en serie utlizando esa agua.esa agua.
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Esparcido en platoEsparcido en platoGrupo con manos lavadas
Grupo con manos sin lavar
Envase con Agua Envase con Agua
1 ml1 ml
0.1 ml
10-1
10-2 10-3
1 ml1 ml
0.1 ml0.1 ml
1 ml
0.1 ml
10-1
10-2 10-3
1 ml
0.1 ml 0.1 ml
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�� ¿Dónde crees que vas a ver más ¿Dónde crees que vas a ver más crecimiento de bacterias?crecimiento de bacterias?
�� ¿Porqué?¿Porqué?
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RecapitulaciónRecapitulación
�� ¿Cómo se clasifican los medios?¿Cómo se clasifican los medios?�� ¿Cuáles son los tipos de medio?¿Cuáles son los tipos de medio?�� ¿Cuáles son los métodos de esterilización ¿Cuáles son los métodos de esterilización
más comunes?más comunes?más comunes?más comunes?�� ¿Cuáles son las técnicas de dilusión en ¿Cuáles son las técnicas de dilusión en
serie?serie?
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PreguntasPreguntas
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