reporte de practica de identificacion de proteinas
Post on 14-Apr-2017
189 Views
Preview:
TRANSCRIPT
REPORTE DE PRACTICA DE IDENTIFICACION DE
PROTEINAS.
Bioquímica.
Integrantes:
Camacho Luna Vanessa.
Cornejo López Karla Geraldine.
Esquivel Fonseca Jennifer
Esmeralda Hernandez Rudy Alejandro
Gonzales López Marisol.
OBJETIVO:
Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la configuración y la
identificación por el reactivo BIURET.
Identificar la presencia de proteínas en diversos alimentos por medio de la
reacción de Biuret, observando la desnaturalización de una proteína
Adquirir información acerca de las propiedades físicas y químicas de las proteínas
Comprobar la solubilidad de las proteínas en diferentes solventes
INTRODUCCIÓN:
Las proteínas son elementos vitales para los organismos, encontrándose en
plantas y animales en una proporción elevada. Hay una gran variedad de
proteínas y cada una desempeña una función biológica específica que puede ser
de reserva, de sostén, transporte, estructural, etc. Químicamente las proteínas
están constituidas por combinaciones complejas de carbono, hidrogeno, oxigeno,
nitrógeno y otros elementos en menor proporción como son azufre cobre y fosforo.
Cuando la estructura de la proteína se desorganiza, se dice que se encuentra
desnaturalizada y esto trae como consecuencia la perdida de la actividad
biológica. La desnaturalización puede lograrse por medios físicos como el calor o
químicos como una variación de pH, observándose una disminución en la
solubilidad y la formación de un coagulo. Este método es utilizado para demostrar
la presencia de proteínas. También se puede identificar proteínas mediante el uso
de sustancias que al ponerse en contacto con ellas, producen una coloración
específica, tal es el caso de la Reacción de Biuret.
La reacción debe su nombre al Biuret, una molécula formada a partir de dos de
urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta reacción
la presencia de proteínas. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución
acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de una
compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación
entre iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que
forman parte de los enlaces peptídicos presentando un máximo de absorción a
540nm.
MARCO TEORICO:
Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por
aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones
vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta
inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes
principales de las células y que suponen más del 50% del peso seco de los
animales. El termino proteína deriva del griego proteico, que significa primero.
El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las
proteínas plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibrinógenos; b) globulinas;
c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a
su solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separación simple o burda
mediante precipitación salina de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes.
La precipitación salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en
muchas técnicas de aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2
tipos de lograr esta etapa de purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio
sólido, o bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el
primer caso, existe ventaja de mantener en un mínimo el aumento de volumen; en
cambio la solución saturada presenta la ventaja de una manipulación más
cómoda.
Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido
conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar
la membrana celular y desencadenar reacciones metabólicas. Tienen un peso
molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de sus
órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de
las que solo un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo
para construir y mantener las células, aunque su descomposición química también
proporciona energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo, similar al de
los hidratos de carbono.
Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás
hormonas, los anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina.
REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)
MATERIAL
1 gradilla
pescado, espinaca, levadura,
Tubos de ensaye
Albúmina, grenetina y caseína
REACTIVOS
NaOH al 10%
Sulfato cúprico al 1% en gotero
PROCEDIMIENTO
1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).
2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.
3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la aparición de
un color rosa o violeta (máximo 10 gotas).
4. Reportar a que gota aparece el color.
REACCION XANTOPROTEICA
MATERIAL REACTIVOS
Tubos de ensaye proteínas
Gradilla NaOH concentrado (gotero)
Baño maría HNO3 concentrado
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.
2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él
vire de color. Observar y reportar resultados.
Resultados:
Espinacas 10 gotas
Levadura 7 gotas
Grenetina 10 gotas
Pescado 4 gotas
Leche 4 gotas
Huevo 4 gotas
REACCION XANTOPROTEICA
MATERIAL REACTIVOS
Tubos de ensaye proteínas
Gradilla NaOH concentrado (gotero)
Baño maría HNO3 concentrado
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.
2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él
vire de color. Observar y reportar resultados.
Mis proteínas
Resultado
Proteínas Cantidad de
gotas
Color
Espinaca 10 No cambio
Levadura 8 Anaranjado
Leche 10 Cambio a un
poco anaranjado
Pescado 7 Anaranjado
Greatinina 9 Cambio muy
poco anaranjado
muy bajo
COAGULACIÓN POR CALOR
MATERIALES: 16 tubos de ensaye Acido acético al 1%
Gradilla Acetona
Baño maría Éter Tetracloruro de carbono
Butanol Proteínas
NaOH concentrado con gotero
PROCEDIMIENTO:
1. Calentar o hervir 5ml de solución de proteínas
2. añadir 2 gotas de ácisdo acético al 1%
3. colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente manera. Tubo 1= 1 ml de acetona
Tubo 2= 1 ml de éter Tubo 3= 1 ml de butanol Tubo 4= 1 ml de tolueno
4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla. 5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH
concentrado y agitar. 6. Observar y anotar diferencias.
RESULTADOS:
Espinacas Levadura Grenetina Pescado Clara de huevo
Acetona Si Si Si Si No
Éter Si Si Si Si No
Butanol No Si No Si No
Tolueno No Si No Si No
DESPUÉS DE AÑADIR EL NaOH:
Espinacas Levadura Grenetina Pescado Clara de huevo
Acetona No
Éter Si
Butanol No No No
Tolueno No No No
OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE
MATERIAL REACTIVOS
2 vasos de precipitados de 250ml leche entera
1 probeta de 100ml HCl 0.2N
1 embudo acetona
2 papel filtro éter
PROCEDIMIENTO
1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado
2. Agregar 100ml de agua destilada
3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8
4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.
5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.
6. Repetir este lavado 4 veces.
7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la
proteína.
8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar
y filtrar. Repetir 4 veces.
9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de
acetona, y filtrar.
10. Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el
polvo 24 horas después.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
.
OBSERVACIONES:
Se observa que con las veces que decantamos la leche, esta se fue haciendo un
poco más clara cada vez, también vimos que se forma un "queso" solo que es un
poco más aguado, es decir no tiene aún la consistencia de tiene un queso.
OBERVACIONES
La práctica es un poco tediosa, por lo cual los alumnos no debemos de perder el
tiempo al momento de realizarla. Para la práctica necesitamos reactivos
peligrosos, por lo cual también debemos de tener mucho cuidado al momento de
utilizar los reactivos para no dañarnos a nosotros ni a quienes tenemos a nuestro
alrededor. Debemos de darle un buen uso al material del t no estar jugando
dentro del laboratorio para evitar accidentes.
Los resultados de nuestra práctica fueron beneficiosos para saber sobre las
reacciones como el reactivo de BIURET en su configuración y la identificación de
las proteínas.
CONCLUCIONES
El objetivo de la práctica fue logrado exitosamente por el equipo. Se logro realizar
las 4 prácticas con resultados satisfactorios. La identificación de las proteínas por
las reacciones y observar sus fue también logrado ya que, lo alumnos pudimos
determinar las proteínas y el motivo de aquellos resultados logrados.
Pudimos observar como en el caso de la segunda práctica como es que
reaccionan las proteínas (algunas) como es provocan un cambio de color gracias
a la reacción de NaOH concentrado (gotero) y HNO3 concentrado.
Mencionado nada mas como un ejemplo de las cuatro prácticas realizadas sobre
la identificación de las proteínas.
CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?
Se observa que sus características, y pueden cambiar de coloración, o
precipitarse, o coagularse, o volverse solubles en agua, o insolubles, o volverse
rígidas, o volverse blandas.
2. Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?
NHO3 , NaHO,
3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
Realizando la prueba de biuret,así sabremos si es una proteína o no
4. Que coloración da la reacción del Biuret?
Morado,y hay de diferentes tonos hasta llegar al lila.
5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
Si,el reactivo reacciona con cualquier PROTEINA ya sea solida o liquida.
6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es
positiva o negativa? ¿Por qué? Será negativa porque si analizamos un solo
aminoácido, no hay ningún enlace peptídico puesto que este enlace se da entre
dos aminoácidos, y la reacción de Biuret va a dar positivo cuando exista enlace
peptídico (CO-NH) coordinándose con él el Cu en medio alcalino
7. Explica la reacción Xantoproteíca.
es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas
solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da
resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos
aromáticos, especialmente en presencia de tirosina.
top related