ref : img 122 - imegen · control m-bcr-abl 50 μl de agua/vial tabla 2. volumen de rehidratación...

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

Rev. 1

Cuantificación del reordenamiento m-BCR: BCR-ABL p190 mediante PCR a tiempo real

REF : IMG-122

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

2

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

3

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

4

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

5

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

6

Reactivos Color Viales Conservación

Master-Mix m-BCR Disco morado 2 x 24 reacciones 4ºC

Master-Mix ABL Disco amarillo 2 x 24 reacciones 4ºC

Control m-BCR-ABL Tapa morada 4 viales 4ºC

Tabla 1. Componentes del kit Imegen-m-BCR-ABL

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

7

:

Equipos 1 Termociclador de PCR a tiempo real

2 Micropipetas (10 µL, 20 µL y 200 µL)

3 Vórtex

Materiales 1 Tubos ópticos de 0,2 mL

2 Tapas ópticas para tubos de 0,2 mL

3 Puntas de pipetas con filtro (10 µL, 20 µL y 200 µL)

4 Tubos estériles de 1.5 mL

5 Guantes de látex sin polvo

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

8

Reactivos Rehidratación

Master-Mix m-BCR 130 μL de agua/vial

Master-Mix ABL 130 μL de agua/vial

Control m-BCR-ABL 50 μL de agua/vial

Tabla 2. Volumen de rehidratación de los componentes del kit

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

9

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

5 ll

C+ m-BCR-ABL

25x104

l45 lH20

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

5 ll 5 ll 5 ll

C+ m-BCR-ABL

25x103

C+ m-BCR-ABL

25x102

C+ m-BCR-ABL

25x101

C+ m-BCR-ABL

25

l45 lH20

l45 lH20

l45 lH20

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

5 ll5 ll

C+ m-BCR-ABL

25x104

l45 lH20l45 l

H20

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

VortexSpin

5 ll5 ll 5 ll5 ll 5 ll5 ll

C+ m-BCR-ABL

25x103

C+ m-BCR-ABL

25x102

C+ m-BCR-ABL

25x101

C+ m-BCR-ABL

25

l45 lH20l45 l

H20l45 l

H20l45 l

H20l45 l

H20l45 l

H20

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

10

Reactivos Volumen por

reacción

Máster-Mix m-BCR o

Máster-Mix ABL 5 µL

Máster-Mix PCR 2x 10 µL

Tabla 3. Cantidad de reactivos necesaria por reacción

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

11

Sonda Receptor Emisor o

Quencher m-BCR FAMTM TAMRA

ABL FAMTM TAMRA

Tabla 4. Información de las sondas

Campos Etapa 1

Activación enzimática

Etapa 2

PCR

Nº de Ciclos 1 ciclo inicial 1 ciclo inicial 50 ciclos

Desnaturalización Unión de

oligonucleótidos / Extensión

Temperatura 50ºC 95ºC 95ºC 60ºC

Tiempo 2 minutos 10 minutos 15 segundos 1 minuto*

Tabla 5. Programa de PCR óptimo para el 7500 FAST o StepOne

Instituto de Medicina Genómica SL

Agustín Escardino 9,

Parc Científic de la Universitat de València

46980 Paterna (Valencia, España)

+34 963 212 340 - info@imegen.es

imegen.es

12

NCN= m-BCR-ABLCN

ABLCN