proyecto de geranio
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[ ] FARMACIA Y BIOQUIMICA
PROYECTO DE INVESTIGACION
I. GENERALIDADES:
1. TÍTULO:
Determinación del efecto de aceite esencial de las hojas de
Pelargonium graveolenssobre la bacteria propionibacterium acnés
2. PERSONAL DE INVESTIGACIÓN:
2.1 AUTORES:
Calderon Cerna, Ana
Estudiante del III ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional de Trujillo
N° de matrícula:1021100712
Correo electrónico:kati_capricornio18@hotmail.com
Chavez Ordoñez ,Wuendi
Estudiante del III ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la
Universidad Nacional de Trujillo
N° de matrícula:1051100712
Correo electrónico:teamo_21@hotmail.com
Chavez Saavedra, Kelinda
Estudiante del III ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la
Universidad Nacional de Trujillo
N° de matrícula:1021101512
Correo electrónico:Kelly_amor_sagitario@hotmail.com
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Cordova Rodriguez,Araceli
Estudiante del III ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional de Trujillo
N° de matrícula:1011101812
Correo electrónico:chely_88a@hotmail.com
2.2 ASESOR:
Mg. Soto Vásquez, Marilú Roxana
Docente de la Cátedra de Farmacognosia del Departamento de
Farmacotecnia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional de Trujillo.
Código: 5727
correo:marilu_roxana@hotmail.com
3. TIPO DE INVESTIGACIÓN:
3.1 De acuerdo a la orientación:
Aplicada
3.2 De acuerdo al diseño de investigación:
Experimental
4. AREA DE INVESTIGACION:
Ciencias Naturales
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5. RÉGIMEN DE INVESTIGACIÓN:
Libre
6. DEPARTAMENTOS AL QUE PERTENECE EL PROYECTO
Departamento Académico de Farmacología
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad Nacional de Trujillo
7. LOCALIDAD E INSTITUCIÓN:
6.1. Localidad:
Trujillo-La Libertad
6.2. Institución:
Universidad Nacional de Trujillo
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Escuela de Farmacia y Bioquímica
8. DURACIÓN DEL PROYECTO:
El tiempo de duración será de 3 meses.
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9. FECHAS DE INICIO Y TÉRMINO
Inicio: Supeditado a la aprobación del proyecto
Término: Supeditado a la aprobación del proyecto
10. CRONOGRAMA DE EJECUCIÓN:
ETAPAS DURACION (meses) DEDICACIÓN SEMANAL (horas)
Recolección de datos 01 08
Análisis de datos 01 06
Elaboración de informe 01 07
11. HORAS SEMANALES DEDICADAS AL PROYECTO:
Autor: 10 horas semanales
Asesor: 2 horas semanales
11.1 Personal investigador
Calderon Cerna, Ana
Chavez Ordoñez,Wuendi
Chavez Saavedra,Kelinda
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CordovaRodriguez Araceli
Mg. Soto Vásquez, Marilú Roxana
11.2 Materiales y Equipos :
11.2.1.1 Material Biológico:
Material vegetal: Hojas Pelargoniumgraveolens
“Geraneo” que se recolectarán del distrito de La
Esperanza de la provincia de trujillo, región La
Libertad.
Material microbiológico:Las bacterias
(Propiunibacterium acnes, que serán proporcionadas
por el Hospital Belén de Trujillo.
11.2.1.2 Material de vidrio
Pipetas
Vaso de precipitación
Probetas
Placas petri
Matraces
Laminas y laminillas
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11.2.1.3 Equipos de laboratorio
Balanza analítica
Autoclave
Bomba al vacío
Cocina eléctrica
Equipo de flujo laminar
Estufa
Incubadora Microbiológica
equipo de destilación de arrastre de vapor de agua
Rotavapor
11.2.1.4 Material Quimico:
Alcohol etílico al 96%
11.2.1.5 Medicamentos:
Disco de sensibilidad de tetraciclina 10 µg
11.2.1.6 Medios de cultivo:
Agar
11.2.1.7 Otros:
Asa de platino
Caja de guantes estériles
Hisopos esteriles
Gradilla
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Mechero
Papel filtro
Placas de petri descartables
Puntas estériles
Rollos de algodón
.
11.3 Locales:
Laboratorio de farmacognosia y Farmacognosia, Facultad de Farmacia y
Bioquímica.Universidad Nacional de Trujillo.
12. RECURSOS NO DISPONIBLES Y PRESUPUESTO:
De acuerdo al Clasificador de gastos para el año fiscal 2013.
CODIGO CONCEPTO CANTIDAD UNIDAD COSTO2.3.1.1.1.1 ALIMENTOS Y BEBIDAS
alimentos y bebidas para consumo humano (4)
36 porciones s/.5.00 s/.180.00
2.3.1.5 MATERIALES Y ÚTILES2.3.1.5.1.2 papelería en general, útiles ya materiales de oficina
papel bond a4 1 millar s/.0.018 s/.18.00Lapiceros 4 unid s/.2.00 s/.8.00Tijera 1 unid s/.1.50 s/.1.50folder manila 4 unid s/. 0.50 s/.2.00Marcador 1 unid s/.3.00 s/.3.00
2.3.2.1.2.1 PASAJES Y GASTOS DE TRANSPORTE
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pasajes locales(4)
S/.250 S/1.00 S/.250.00
2.3.2.2.2 SERVICIOS DE TELEFONÍA E INTERNETServicios de telefonía móvil(4)
4 recargas virtuales
s/.5.00 s/.20.00
Servicio de internet(4)
40 horas s/ 1.00 s/.40.00
2.3.2.2.4.4 SERVICIOS DE IMPRESIONES Y EMPASTADOImpresiones(4) 80 unid s/0.10 s/.8.00Fotocopias(4) 80 unid s/0.10 s/.10.00Empastado(4) 1 unid s/20.00 s/.20.00
2.3.18.1 PRODUCTOS FARMACÉUTICOS
2.3.18.12 Tetraciclina 80 mg 1 10.00 10.00
2.3.1 8.2 1 MATERIAL, INSUMOS, INSTRUMENTAL Y ACCESORIOS MÉDICOS, QUIRÚRGICOS, ODONTOLÓGICOS Y DE LA LABORATORIO
Agar Miuller Hinton ¼ KG 95.00 95.00
Guantes quirúrgicos de látex 50 5.00 5.00
Algodón 1 Kg 4.00 4.00
Papel filtro Whatman N° 1 ½ caja 40.00 40.00
Papel Kraft 3 pliegos 1.00 3.00
2.3.1 99.1 2 PRODUCTOS QUÍMICOS
Alcohol de 80° 1 L. 10.00 10.00
2.3.1 99.1 99 OTROS BIENES
Agua destilada 10 L. 1.00 10.00
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13. RESUMEN DEL PROYECTO
CÓDIGO CLASIFICADOR DE SERVICIOS PRECIO
2.3.1 10.12 Material biológico 2.00
2.3.1 1.1 1 Alimentos y bebidas para consumo humano 36.00
2.3.1 5.1 Material y útiles de oficina 69.00
2.3.1 5.3 Aseo, limpieza y tocador 32.50
2.3.18.1 Productos farmacéuticos 10.00
2.3.1 8.2 1Material, insumos, instrumental y accesorios médicos, quirúrgicos, odontológicos y de la laboratorio
393.00
2.3.1 99.1 2 Productos químicos 10.00
2.3.1 99.1 2 Otros bienes 10.00
2.3.2 1.2 1 Pasajes y gastos de transporte 50.00
2.3.2 1.2 99 OTROS GASTOS
2.3.2 2.2 Servicios de telefonía e internet 60.00
2.3.2 2.4Servicio de publicidad, impresiones, difusión e imagen institucional
80.00
2.3.2 4.1 99 De otros bienes y activos 40.00
2.3.2 7.4 3 Soporte técnico 40.00
TOTAL S/.790.50
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14. FINANCIAMIENTO
Los recursos no disponibles serán financiados por la investigadora y los
disponibles por la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional
de Trujillo
II. PLAN DE INVESTIGACION
II.1 REALIDAD PROBLEMÁTICA:
El acné es una enfermedad que por su alta incidencia, es bien conocida en la actualidad;
generalmente suele observarse desde la pubertad, incrementándose su prevalencia en la
adolescencia y persistiendo como un problema en algunos adultos, ya que no sólo
reviste implicaciones estéticas sino también se ha convertido en una causa de baja
autoestima, aislamiento, estrés y depresión, factores que a su vez van creando un círculo
vicioso favoreciendo la persistencia de las lesiones en la piel.1
El acné puede ser definido como el proceso dermatológico producto de una reacción
obstructiva de los conductos excretores de las glándulas sebáceas; éste se ve afectado
por diversos factores como la edad, el sexo, factores endocrinos entre los que se
incluyen el síndrome de ovario poliquísitico y patologías de la glándula suprarenal,
donde además puede estar asociado a obesidad e hirsutismo (presencia de vello grueso
y oscuro en áreas no habituales en la mujer), además pueden intervenir factores
genéticos, variaciones en la dieta, entre otros", aclara la especialista, quien explica que
el acné adulto es diferente al acne juvenil. Debido a esto muchas veces no responde a
los tratamientos comunes que podemos adquirir en las tiendas o incluso a muchos de
los tratamientos clínicos realizados por los dermatólogos. 1
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Clínicamente el acné se puede manifestar en forma de comedones (puntos blancos y puntos
negros), pápulas (lesiones elevadas), pústulas (cuando contienen pus), nódulos quistes
(lesiones de mayor tamaño y profundidad) y manchas y cicatrices residuales; estas lesiones
permiten clasificar al acné en vulgar y conglobata.1
El acné vulgar o vulgaris es la dermatosis más frecuente, en un 60% a 80% en los varones y en un
30% a 50% en las mujeres; es una afección crónica que Se caracteriza por presentar
comedones cerrados no in flamatorios (puntos blancos), comedones abiertos (puntos
negros) o lesiones inflamatorias (pápulas, pústulas, nódulo-quistes, cicatrices);que se
localizan en las áreas de la piel con mayor componente glandular sebáceo: cara, pecho
y región superior del tronco 2,Se presenta en la gran mayoría de los adolescentes y jóvenes
adultos en el mundo; probablemente sea la mayor causa de consulta médica, ya que genera un
gran impacto social y en la calidad de vida. Además, suele involucrar al grupo familiar tanto en su
esfera afectiva como en la económica. El pico de prevalencia se registra entre los 12 y los 24 años
de edad.3
La incidencia es igual en pacientes de todas las etnias; en blancos se observó que el acné
noduloquístico del dorso es más severo que en los negros.4La edad de comienzo varía de 12 a 13
años en las niñas a 13 a 14 años en los varones, lo que es probable que se deba a que el inicio de la
pubertad es más pre-.coz en las primeras. El pico de severidad se registra a los 17 a 18 años en
mujeres y a los 19 a 21 años en varones.5 A veces en algunos niños se observan lesiones
tempranas, del tipo de los comedones cerrados o abiertos, entre los 8 a 9 años.En la mayoría de
los afectados el proceso se resuelve durante la adolescencia; sin embargo, en el 12% de las
mujeres y en el 3% de los hombres puede persistir hasta después de los 44 años de edad.6
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El acné conglobata; Es una afección muy inflamatoria que presenta una mezcla de comedones,
pápulas, pústulas, nódulos, abscesos, cicatrices en la espalda, nalgas, pecho y en menor escala
sobre abdomen, hombros, cuello, cara miembros superiores y músculos.7
Esta enfermedad es causada por diferentes factores: Por la conformación de microorganismos
( Propionibacterium acnés , staphylococus albus y pityrorporum u orbicular)8, siendo estos los
que liberaran sus lipasas para hidrolizar a los triglicéridos del cebo formando lipoperoxidos de los
ácidos grasos , que van a favorecer a la inflamación por el aumento de producción de cebo e
hiperplasia de la glándula sebácea ,descamación anormal de los queratianocitos ,la actividad
hormonal (menstruación en la pubertad), estrés(descarga de las glándulas suprarrenales), los
cambios hormonales que ocurren durante el embarazo (comienzo y fin ) , consumo de píldoras
anticonceptivas , factores hereditarios, ciertos medicamentos y maquillaje grasoso.9
Entre todos los factores causantes del acné hemos decidido estudiar a uno de ellos ,en este caso
es la bacteria propionibacterium acnés que es un bacilo gran positivo de crecimiento
relativamente lento no espatulado ni anaeróbico estricto aunque se cree que posee
aerotolerancia; se halla en la brota normal de la piel y es catalogado como actor secundario en la
infección dérmica puede causar blefaritis crónica y es el principal causante de enoflalmitis post-
quirúrgica crónica .Su genoma ha sido secuenciado poniendo de manifiesto varios genes que
podrían generar las encimas degradantes de la piel y las proteínas inmunogenicas.10
La bacteria es en gran parte comensal y está presente en la piel de las personas alimentándose de
los ácidos grasos del sebo secretado por los poros desde las glándulas sebáceas , también puede
encontrarse en todo el aparato digestivo de los humanos y de muchos otros animales Su nombre
se deriva de la capacidad de la bacteria de generar el acido propanoico cuando un poro de la piel
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se bloquea ; esta bacteria anaeróbica segrega sustancias químicas que rompe la pared del poro
derramando bacterias como el Staphylococus aureus en la piel y originando en la piel una lesión
de acné (foliculitis).10
En la actualidad el tratamiento del acné depende de la extensión e intensidad de la enfermedad ,
de la producción de cicatrices, de factores del paciente con su edad ,estado hormonal y
características de la piel 11; como los Medicamentos tópicos; tratamiento generalmente para
pacientes con acné leve estos medicamentos nos dan una respuesta lenta, por lo cual deben tener
expectativas realistas y mantener la continuidad del tratamiento,se debe aplicar en toda la
extensión de las aéreas afectadas y no solo donde es visible la inflamación. Los principales
antibióticos típicos utilizados son: la clindamicina, eritromicina, peróxido de benzolio y
combinaciones de peróxido de benzolio12 , debido al avance de la ciencia se ha descrito otros
tratamientos como es el caso de láser, pulsadas (azul, verde, roja), terapia dinámica, peeling
químico y microdermoabrasión.13
La ausencia de respuesta, las contraindicaciones y los efectos adversos de los tratamientos ,
han llevado a la necesidad de investigar tratamientos con plantas medicinales como es el
caso del geraneo.
El Pelargonium graveolens(geranio) conocida como hierba aguja o hierba de san Roberto usada,
es muy común en lugares con grandes concentraciones de cal tal es el caso del norte de áfrica,
América, aunque también en zonas europeas y asiáticas además crece en lugares apartados desde
el nivel del mar alcanzando aproximadamente 1900 metros del nivel del mar.
Esta planta alcanza una altura de 60 cm de altura su raíz es en forma de nabo sus hojas de
Margen dentado miden de 4 a 9 cm y poseen lóbulos bastantes marcados y profundos ,su
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Flor es color rosado, rojo y blanco aproximadamente unos 8 mm de de longitud la cual
Posee una simetría radiada al pedúnculo.Pertenece a la familia de las geraniáceas existen como
500 especies de geranios pero el aceite esencial se extrae de unas pocas variedades.
Principalmente del pelargonium graveolens que es una planta perenne pero a menudo crece
como anual. Las hojas son más aromáticas que las flores ,el aroma de su aceite esencial es como
rosa de tierra, suave, seca y dulce ,el aceite de geranio es tónico, astringente, hemostático,
antiséptico, antibacteriano, antidiabético, cicatrizante, analgésico, equilibrante, hormonal, sobre
todo para enfermedades dermatológicas (acné).Contiene citronelol (20-40%), geraniol (7-18%)
también tiene citronellol, felantreno, pineno, alcohol amílico, linalol, mentol.
El aceite esencial del geranio cobra importancia en el mercado mundial ya que se Encuentra
dentro de los 10 aceites más importantes en cuanto a su producción y valor comercial. El aceite
esencial citronelol es un aceite con mayor demanda en la industria perfumista y farmacéutica
debido a su nota floral muy similar a la escencia de rosas.
Existen numerosas investigaciones relacionadas con el aceite esencial que contienen las
hojas de geranio como es el caso del estudio realizado por Rudy Janet flores Álvarez y
Hermes Osvaldo López arenales en el año 2006 departamento de Quindío capital
armenia Colombia trabajo titulado “plan de negocio para el cultivo, producción y
comercialización de aceites esenciales crudos derivados de plantas aromáticas para la
unidad productiva ubicadas en Quindío “
Trabajando con la muestra de hojas de geranio llegan a la conclusión de que en las hojas
es en donde más se encuentra el aceite esencial muy usado en varices, infecciones de la
piel como el acné
JUSTIFICACIÓN:
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[ ] FARMACIA Y BIOQUIMICA
Dado que en la actualidad en el Perú se ha incrementado el porcentaje de resistencias bacterianas a
los antibióticos, y considerando lo anteriormente expuesto, sobre el probable efecto antibacteriano,
se considera que es necesaria la realización del presente trabajo de investigación orientado a
determinar el efecto del aceite esencial de las hojas de Pelargonium graveolens “Geranio” sobre
la bacteria propiunibacterium acnés.
La finalidad de esta investigación es la de poder proporcionar una base científica para la medicina
tradicional y dar una solución al alcance de la población, ya que en muchas ocasiones no se cuenta
con los recursos económicos suficientes para poder llevar un tratamiento farmacológico, laser, etc.
Es por ello que hemos tomado como parte de utilidad a las plantas medicinales que son de bajo
costo y de alcance accesible.
PROBLEMA:
¿Cuál es el efecto delaceite escencial presente en las hojas de Pelargonium graveolens
Sobre la bacteria propionibacterium acnés?.
HIPOTESIS:
El aceite esencial presente en las hojas de pelargonium graveolens presenta efecto
Bactericida frente al propionibacterium acnés.
OBJETIVOS:
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[ ] FARMACIA Y BIOQUIMICA
OBJETIVO GENERAL:
Evaluar el efecto del aceite esencial de las hojas de pelagonium graveolens sobre
la bacteria propionibacterium acnés.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Determinar el efecto del aceite esencial a las concentraciones de 5%,
25%,50%,100% sobre la bacteria propionibacterium acnés .
Determinar el porcentaje de inhibición de las concentraciones de los aceites
esenciales al 5%,25%,50%,100% sobre la bacteria propionibacterium acnés
VARIABLES:
VARIABLE INDEPENDIENTE: Extracion del aceite escencial del pelargonium
graveolens “geranio”.
VARABLE DEPENDIENTE: Efecto antibacteriano del aceite escencial del
pelargonium graveolens “geranio”.
II.2 METODOLOGIA
II.2.1 TIPO DE DISEÑO
Diseño de investigación de estímulo creciente
GC E
GP1 T1 GP1’
T2 GP2’
GC’
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GC: grupo control
E: etanol 80%gl
GC’: evaluación del grupo control
T1: aceite esencial de pelargonium graveolens al 5%
T2: aceite esencial de pelargonium graveolens al 25%
T3: aceite esencial de pelargonium graveolens al 50%
T4: Disco de sensibilidad de tetraciclina 10 µg
GP1: evaluación en grupos problema luego de 24 horas
GP1’: evaluación del efecto del aceite esencial al 5%
GP2’: evaluación del efecto del aceite esencial al 25%
GP3’: evaluación del efecto del aceite esencial al 50%
GP4’: Evaluacion de la sensibilidad de tetraciclina 10 µg
GP2
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2.2.2 DEFINICIÓN DE LA POBLACIÓN OBJETIVO Y MUESTRA DE
ESTUDIO
POBLACIÓN
MUESTRA:
1 Kg de hojas de Pelargonium graveolens “Geranio” que se
recolectarán en el jardín botánico “Rosa Elena de Ríos
Martínez” de la facultad de farmacia y bioquímica de la
universidad nacional de Trujillo de la provincia de Trujillo,
región La Libertad.
3 cepas de bacterias (Propiunibacterium acnes, que serán
proporcionadas por el Hospital Belén de Trujillo-La libertad.
2.2.2.1 CRITERIOS DE EXCLUSIÓN
Serán excluidos las hojas amarillas
Hojas atacadas por hongos bacterias e insectos
Hojas recogidas luego de un día lluvioso
2.2.2.2 CRITERIOS DE INCLUSION
Hojas verde de color uniforme de pelargonim
graveolens
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[ ] FARMACIA Y BIOQUIMICA
Recoger hojas de pelargonium graveolens antes de la
floración
2.2.3 METODO
2.2.3.1 IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN TAXÓMICA
DE LA ESPECIE
Se llevará un ejemplar de la planta al HerbariumTruxillenxis
(HUT) para su identificación y posterior verificación taxonómica
según el sistema filogenético de la especie.
2.2.3.2 RECOLECCION DE LA MUESTRA
La especie de Pelargonium graveolnes “que se recolectarán en el
jardín botánico “Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la
facultad de farmacia y bioquímica de la universidad nacional
de Trujillo de la provincia de Trujillo, región La Libertad.
La recolección de la especie se realizará por el método convencional
o clásico de herborización, seleccionando el material en el campo y
verificando que esté en buenas condiciones, de preferencia en las
mañanas.
2.2.3.3 OBTENCION DE LA MUESTRA
Selección
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[ ] FARMACIA Y BIOQUIMICA
Se realizara el proceso de selección de las hojas de pelargonium
graveolens “geranio”, que será transportado al laboratorio de
Farmacognosia y Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y
Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, en donde se
eliminará las sustancias extrañas presentes en el material
vegetal.
Limpieza y Lavado
Para eliminar los residuos de tierra, restos de contaminantes del
cultivo, etc. se procederá a limpiar las hojas de pelargonium
graveolens con algodón suavemente y, si es necesario lavar el
material con agua destilada ligeramente.
2.2.3.4 EXTRACTO DEL ACEITE ESCENCIAL DE LAS HOJAS
DE Pelargonium graveolens
los aceites esenciales se obtienen por el siguiente metodo:
1. Destilación por arrastre de vapor
Procedimiento:
Se pesara 1k de hojas frescas de pelrgonium graveolens
previamente lavadas se procederá a cortar en trosos
pequeños y se colocan en el equipo de destilación de
arrastre de vapor de agua
El método utilizado para la extracción del aceite esencial
de geranio es el tradicional arrastre por vapor, el cual
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[ ] FARMACIA Y BIOQUIMICA
consiste en hacer evaporar agua en una cámara especial y
conducir el vapor hacia la zona donde se encuentran las
hojas frescas y cortadas de geranio, de tal manera que el
vapor caliente ingrese al interior de las hojas arrastrando el
aceite contenido en ellas para luego ser conducido a un
sistema de refrigeración y de esta manera retornar al esta-
do líquido, en donde por diferencia de densidades el aceite
y el agua se separan. Y se coloca mezcla Na2SO4 anhidro
en un enbase previa decantación para absorver del aceite
el agua.
1.1. Diseño Experimental:
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Las placas de experimentación serán divididas en 6 grupos, a
diferentes concentraciones
GRUPO I: concentración basal
GRUPO II: concentración al 5%
GRUPO III :concentración al 25%
GRUPO IV: concentración al 50%
GRUPO V: Disco de sensibilidad de tetraciclina 10 µg .
GRUPO VI : grupo problema
Grupo I: la concentración basal se la realiza la muestra de agar agar se determina mediante el
sembrado tipo estrías de la propionibacterium
Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de la tetraciclina
Preparación del inóculo
Para poder obtener el inóculo del microrganismo en la fase de crecimiento adecuada se
sembró la cepa bacteriana en placas TSA y se incubó a 37°C durante 72 horas en
condiciones anaerobias, debido a las características particulares de crecimiento de
Propionibacterium acnes. Alícuotas de esta población se trasladaron a tubos TSB
(Trypticase Soy Agar), que incubados a 37°C durante 72 horas en anaerobiosis
proporcionaron una suspensión aproximada de 107UFC adecuada para el ensayo.
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Método del ensayo
La determinación de la CMI (1) de la tetraciclina se realizó en medio Mueller-Hinton. Se
partió de una concentración del 1% (solución madre), ya que el producto es soluble en agua
destilada a esta concentración. La solución madre se filtró a través de un filtro de 0,22 μm y
se realizaron una serie de diluciones a fin de obtener placas Mueller-Hinton con las
siguientes concentraciones: 0,5 mg/ml; 0,25 mg/ml; 0,125 mg/ml; 0,062 mg/ml; 0,031
mg/ml; 0,015 mg/ml; 0,007 mg/ml y 0,0035 mg/ml. Estas placas se sembraron en estrías
con el cultivo de 72 horas de Propionibacterium acnes y se incubaron 72 horas en
condiciones anaeróbicas. Asimismo, se sembraron placas control de Mueller-Hinton sin
ciclopiroxolamina. Independientemente, se llevó a cabo un análisis previo consistente en la
determinación de la CMI mediante el procedimiento estándar de microtitulación en placa
utilizando caldo Mueller- Hinton. Sin embargo, este procedimiento se desechó debido a la
interacción del producto ensayado (ciclopiroxolamina) y el medio de cultivo, que
ocasionaba un precipitado que impedía la visualización de los resultados. Por ello, se
empleó un procedimiento alternativo consistente en el ensayo en medio sólido.
Determinación del poder inhibitorio del gel formulado con tetraciclina 1%
Preparación del inóculo
Para obtener el inóculo del microrganismo en la fase de crecimiento adecuada, se sembró la cepa
en placas TSA y se incubaron a 37°C durante 72 horas en condiciones anaeróbicas. Tras la
incubación, alícuotas de esta población se trasladaron a tubos TSB, que incubados a 37°C durante
72 horas en anaerobiosis proporcionaron una suspensión aproximada de 107 UFC adecuada para el
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[ ] FARMACIA Y BIOQUIMICA
ensayo. A continuación, se realizó una dilución 1/100 en 9,9 ml de Ringer 1/4, obteniéndose así
una suspensión de aproximadamente 105 UFC/ml.
Preparación del producto
El gel de ciclopiroxolamina 1% fue ensayado en condiciones normales de uso, en forma de
un gel limpiador facial formulado con tetraciclina 1%.
Método del ensayo
Mediante un hisopo estéril se sembró en crecimiento confluente la suspensión de 105
UFC/ml de Propionibacterium acnes sobre placas de TSA y Agar-Sangre. Seguidamente se
colocó en el centro de las placas un disco de antibiograma tipo Whatmann de 6,5 mm de
diámetro embebido en el gel de ciclopiroxolamina 1%. La siembra se efectuó por
duplicado.
Una vez colocado el disco, se incubaron las placas a 37°C durante 72 horas en condiciones
de anaerobiosis. Tras el período de incubación, se procedió a la lectura de los resultados.
Análisis de resultados obtenidos
Los resultados obtenidos serán analizados y sometidos a análisis estadísticos
utilizando el test de ANOVA, para comparar el efecto bactericida de la destilación
de corriente de vapor de hojas de pelargonium graveolens los cuales serán
expresados en graficas.
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Referencias bibliográficas
1http://hospmolinasierra.espacioblog.com/post/2010/09/09/el-acne-respeta-edades
2.PLEWIG G,FULTON JE,KLIGMAN AM.Cellular dynamics of comedo formation in acne vulgaris.Arch Dermatol Forschung. 1971;242:12 –29.
3. White GM. Recent findings in the epidemiologic evidence,classification, and subtypes of acne vulgaris.JAm Acad Dermatol.1998 Aug;39(2 Pt 3):S34-7.4. Pochi PE. The pathogenesis and treatment of acne.Annu Rev Med. 1990;41:187-98.5. Cunliffe WJ, Gollnick HPM. Acne. En Diagnosis and Management.49-67. Martin Dunitz Ltd London, 20016. Goulden V, Stables GI, Cunliffe WJ. Prevalence offacial acne in adults. J Am Acad Dermatol. 1999Oct;41(4):577-80
Ames N. Bruce. Detection of carcinogens as mutagens in the salmonella/microsoma test. Acad. SCI (USA), 1986.
Carnesecchi, S. y col. Journal of Pharmacacology and experimental therapeutics. Strasburg, France, 2002.
cotillo, P; Rojas, L. Métodos farmacológicos en investigación de productos vegetales. Primera edición, Universidad Cayetano Heredia,Perú, 1999.
Kirschenbauerer, A. Grasas y aceites, Ed. la educación, 2002.
Kosel, C. Por la senda de la salud. Ed. Andina
Aspurth, E. Las cremas al orden del día. Barcelona, España.
http://www.monografias.com/
7
8
9
10http://es.wikipedia.org/wiki/Propionibacterium_acnes
Página 25
[ ] FARMACIA Y BIOQUIMICA
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13 articulo medico
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