objetivo: estudiar la estabilidad de proteínas 4) para conocer g, imprescindible conocer mecanismo...
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Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas
4) Para conocer G, imprescindible conocer mecanismo
Para reacción D N KP = [N]/[D]
2D N2 KP = [N2]/[D]2
D ↔ I1 ↔ I2… ↔ In ↔ N KP = Ki
Caracterización de estabilidad de proteínas
Calorimetría de barrido diferencial (DSC)
1)Permite determinar mecanismo de desplegamiento/plegamiento
2) Medición de H, S y Cp para cada etapa
Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas
Calorimetría de barrido diferencial (DSC)
Calorimetría de barrido diferencial (DSC)
Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas
0 20 40 60 80 100-0.0002
-0.0001
0.0000
0.0001
0.0002
0.0003
0.0004
0.0005
amortiguador vs amortiguador
Cp
(ca
l/o C)
Temperature (oC)
280 300 320 340 360 380
0
1000
2000
3000
4000
2H = 60 kcal/mol
H = 30 kcal/mol
H = 60 kcal/mol
C exc
(kc
al/m
ol)
Temperatura (K)
Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC
Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas
lnKeq / (1/T) = - HvH / R
280 300 320 340 360 380
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
H = 30 kcal/molfrac
ció
n d
esn
atu
raliz
ado
Temperatura (K)
H = 60 kcal/mol
280 300 320 340 360 380
0
1000
2000
3000
4000
H = 30 kcal/mol
H = 60 kcal/mol
C exc
(kc
al/m
ol)
Temperatura (K)
Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC
Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas
lnKeq / (1/T) = - HvH / R
cal
excvH H
CRTH
2/1,2
2/12/1, 4
Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC
Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas
cal
excvH H
CRTH
2/1,2
2/12/1, 4
# unidades cooperativas
HvH Hcal / HvH
1 1
2 1.5
3 2
cal
exc
H
CRT
2/1,2
2/14
cal
exc
H
CRT
2/1,2
2/16
cal
exc
H
CRT
2/1,2
2/18
Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC
Objetivo: Estudiar la estabilidad de proteínas
Herramienta de “desconvolución”
Caso ejemplar:
Plasminógeno ~700 a.a.
dpHdTm
RTmTmH
23.2)(
Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC:
Número de protones () intercambiados en la reacción
65 70 75 80 85260
280
300
320
340
360
Hca
l (k
J m
ol -1)
Temperature (o C)
1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
65
70
75
80
85 a b
pH
Tm
(o C
)
Extrayendo mecanismo y energética mediante DSC:
Número de protones () intercambiados en la reacción
= 1.05
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