la replicación del dna y el ciclo celular. otra pregunta con respuesta abierta: ¿cómo se regula...

La replicación del DNA y el ciclo celular

Otra pregunta con respuesta abierta:

¿Cómo se regula la actividad de los

orígenes de replicación de modo de

obtener una sóla replicación por ciclo

celular?

“Once, and only once”

Experimentos de fusión celular

•Entender la naturaleza del estado competente (G1)

•Cual es la naturaleza del activador de S

•Caracterizar el estado de incompetencia (G2)

•Caracterizar el desbloqueo y regreso a la competencia

Sperm DNA

Extractos Xenopus

(+) o (-) cicloheximida

Incubación 5 horas

Observación microscopio

+CH

-CH

Hoechts contraste

Sperm DNA + ATPP32 + BrdU + extracto Xenopus

(+) o (-) cicloheximida

Incubación 5 horas

Extracción DNA

Gradiente CsCl

Análisis 32P en fracciones

Sperm DNA + ATPP32 + BrdUTP + extracto Xenopus

(+) CH (-)CH

Núcleos replicaban Núcleos replicaban

Separación de núcleos a distintos tiempos post-extracto (1, 2, 3, 4, 5 h)

Núcleos + ATP-3H + BrdU + extracto Xenopus fresco

(+)CH (-)CH (+)CH (-)CH

Incubación durante 4 horas

Miden si hay segunda ronda de replicación por extracción del DNA, gradiente de CsCl y análisis de 3H

Teoría del licenciamiento de la replicación

Letters to NatureNature 430, 913-917 (19 August 2004) | doi: 10.1038/nature02813

Structural basis for inhibition of the replication licensing factor Cdt1 by geminin

Changwook Lee1, BumSoo Hong1,5, Jung Min Choi1,5, Yugene Kim1, Saori Watanabe2, Yukio Ishimi3, Takemi Enomoto2, Shusuke Tada2, Youngchang Kim4 and Yunje Cho1