inmunologia

Frotis de Sangre tinción de giemsa

Neutrófilos Monocitos Linfocitos

Eosinófilos

Neutrófilo

Linfocito

EosinófiloMonocito

Basófilo

Composición leucocitaria de la sangre

Protocolo de tinción para citometría de flujo de células de la sangre

1. Preparación de la muestra1. Centrifugar y resuspender las células en buffer de lisis de eritrocitos.

Incubar 3’.2. Lavar con PBS, centrifugar y resuspender las células en el buffer de tinción

(SB: Staining buffer).3. Contar las células y preparar una suspensión de 107 células/ml.4. Colocar 100μl de la suspensión por tubo.

2. Tinción de las células1. Bloquear con suero fetal bovino 10% en SB2. Agregar 10 μl de la dilución de anticuerpo monoclonal correspondiente a

cada tubo.3. Incubar aprox. 30’, lavar con 1ml de SB, centrifugar y resuspender las

células en:• SB (muestras que no pueden ser fijadas, tinciones con anticuerpo

primario y secundario)• Fijador (formaldehido 2 o 4%)

3. Análisis de las células en el citómetro de flujo.