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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE YUCATÁN

FACULTAD DE QUÍMICA

ANÁLISIS DE DROGAS Y MEDICAMENTOS

Práctica 6

“Identificación y cuantificación de Naproxeno por

cromatografía de líquidos”

Equipo 4:

Manzanilla Rivas Raúl

Mijangos Ramos Iván Felipe

Rangel Méndez Jorge Aarón

Sánchez Yama Jorge

Fecha de entrega:

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16-Abril-2010

6to. Semestre Salón 7

INTRODUCCIÓN

El naproxeno es antiinflamatorio no esteroidal derivado del ácido fenilpropiónico

que presenta actividad analgésica así como antipirética. Tiene apariencia de

polvo blanco cristalino, carece de olor característico y es prácticamente

insoluble en agua. Es ampliamente empleado en la farmacología y administrado

generalmente por vía oral. Por esta vía es absorbido a nivel de las membranas

del tracto gastrointestinal para pasar a la circulación sanguínea y

posteriormente se dirige al sitio blanco para ejercer su acción farmacológica 1.

Su uso se asocia a una menor incidencia de alteraciones gastrointestinales que

la del AAS por lo que se le da un uso muy amplio en el área de la farmacología.

Como es el caso de cualquier medicamento de uso generalizado la industria

farmacéutica requiere de herramientas y métodos para el monitoreo de lacantidad de principio activo en este tipo de formas farmacéuticas y encuentra en

la Cromatografía Líquida de Alta Resolución (CLAR) una poderosa herramienta.

La CLAR es una técnica de separación constituida por una fase estacionaria

sólida y una fase móvil líquida. Las separaciones se logran por partición,

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adsorción o procesos de intercambio iónico, según el tipo de fase estacionaria

empleada. Los compuestos a analizar se disuelven en un líquido orgánico y la

mayoría de las separaciones tienen lugar a temperatura ambiente. Por lo tanto,

la mayoría de las drogas, sean compuestos no volátiles o térmicamenteinestables, pueden analizarse mediante esta técnica sin riesgo de

descomposición. El tiempo de elusión de un compuesto puede ser descrito por 

su factor de capacidad, ya que depende de la naturaleza química del

compuesto analizado, la composición y la velocidad de flujo de la fase móvil y la

composición y el área superficial de la fase estacionaria. La longitud de la

columna es un parámetro determinante de la resolución. Sólo los compuestos

que tienen diferentes factores de capacidad pueden ser separados por CLAR2

.Se estima que entre el 80 y el 90 % de las separaciones analíticas son

realizadas en la modalidad de fase inversa. Prácticamente todas las

separaciones en fase inversa son llevadas a cabo con fases estacionarias con

superficies hidrofóbicas químicamente modificadas. Pequeñas variaciones en

la superficie química y geométrica puede conducir a notables diferencias en la

interacción con la superficie, y como resultado de esto, diferencias en la

selectividad cromatográfica. La fase móvil por mucho es la mayor herramienta

para el control de la retención del analito en el análisis mediante CLAR en fase

inversa. Variaciones en la composición del disolvente, tipo de modificador 

orgánico, pH, y concentración del buffer proveen al cromatógrafo de un valioso

conjunto de variables para el desarrollo con éxito de un método de separación 3.

El detector de absorbancia de UV/Vis monitorea la absorción de luz ultravioleta

o visible en el efluente de CLAR. Son los detectores más comunes ya que la

mayoría de los analitos de interés para el área farmacéutica presentan

absorbancia UV. El detector de arreglo de fotodiodos, proporciona espectros UVmientras que funciona como un detector de absorbancia multifrecuencia UV/Vis.

Facilita la identificación de los picos y es por esto el detector preferido en la

elaboración de métodos analíticos. La validación del método analítico es parte

integral del sistema de control de calidad, puesto que confiere fiabilidad a los

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resultados analíticos obtenidos en un análisis, a fin de asegurar que un

medicamento cumpla los parámetros de calidad establecidos. La validación del

método es un proceso dinámico y no debe ser considerado una situación de

una sola ocasión. El diseño y validación del método debe ser tal forma que

asegure robustez a lo largo de la vida del método. La precisión de los datos es

afectada por las variaciones en el proceso de preparación, la preparación de la

muestra y el rendimiento del instrumento. Cuando los métodos validados son

confiables se generan datos que resultan dignos de confianza.4

OBJETIVO

El alumno aprenderá a usar el cromatógrafo de líquidos para cuantificar una

muestra problema de Naproxeno, empleando el método de calibración absoluta.

METODOLOGÍA

Condiciones de cromatógrafo:

Preparación de la fase móvil.

Se prepararon 30 mL de una mezcla de metanol (grado HPLC) y agua en

proporción 50:50.

4

Factor Descripción

COLUMNA Octadecil silano unido químicamente a poros

de gel sílice o micropartículas de cerámica

(water CL-18)DIMENSIONES 4.6 mm x 15 cmPRESIÓN MÁXIMA 248 bar  FASE MÓVIL Acetonitrilo-agua (50:50)FLUJO 1.0 mL/minDETECTOR UV-VIS 254 nm

Se recomienda separar condoble espacio los párrafosde la introducción

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Preparación de la mezcla de disolvente.

Se prepararon 20 mL de una mezcla de metanol (grado HPLC) y agua en

proporción 90:10.

Preparación de la solución de referencia.

Se preparó una solución de la sustancia de referencia en mezcla de disolvente

con una concentración de 2.5 mg/mL de naproxeno; para lo cual, se pesó 25

mg de naproxeno  y se mezcló con la solución de mezcla de disolvente en un

matraz volumétrico de 10 mL y se llevó hasta línea de aforo. Posteriormente se

prepararon 10 mL de una dilución de 25 µg/mL de de naproxeno en fase móvil;

para lo cual, se utilizó 0.1 mL de alícuota de la solución anterior, se adicionó enun matraz volumétrico y se llevó al aforo de 10 mL con fase móvil.

Preparación de la solución de la muestra.

Se pesaron 5 tabletas de medicamento naproxeno marca GI. Se trituraron las

tabletas en un mortero hasta polvo fino y se trasfirió en un vaso de precipitados

31.7 mg (cantidad equivalente a 25 mg de naproxeno); se añadió 1 mL de agua

destilada y se agitó vigorosamente hasta completa dispersión. Después se filtró

la mezcla directamente a un matraz volumétrico de 10 mL; se llevó a línea de

aforo con metanol (grado HPLC), se mezcló y transfirió una alícuota de 0.1 mL

en un matraz volumétrico de 10 mL. Posteriormente se aforó con fase móvil y

se mezcló perfectamente.

Cuantificación de la muestra problema.

La cuantificación del naproxeno se llevó a cabo mediante Cromatografía de

Líquidos de Alta Eficiencia (CLAE o HPLC por sus siglas en inglés). Se utilizó el

equipo Agilent Technologies 1200 series, se ajustaron los parámetros y seinyectó volúmenes iguales de 20 µL de la preparación de referencia y de la

muestra problema. Se registraron los cromatogramas y se midieron los tiempos

de retención de los picos principales. Se halló el área bajo los picos e informó la

cantidad de C14H14O3 que había en la muestra tomada.

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DIAGRAMA DE FLUJO

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Figura 1. Preparación de la fase móvil y la mezcla de disolvente.

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Figura 2. Metodología empleada en la determinación de naproxeno por CLAE.

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RESULTADOS

Se pesaron las cinco pastillas de naproxeno requeridas para la determinación.Los pesos se aprecian en la tabla 1.

Tabla 1. Peso de las pastillas de naproxeno.

Número de astilla Peso (mg)

1. 319.3

2. 316.0

3. 316.3

4. 319.3

5. 317.2

Total 1588.1

El marbete de las pastillas indicaba que contenían 250 mg de naproxeno, por 

tanto, la cantidad pesada de las cinco pastillas trituradas equivalente a 25 mg

de naproxeno fue de 31.76 mg.

Se procedió con la determinación empleando el cromatógrafo de líquidos. Los

cromatogramas obtenidos para la solución de referencia y para la muestra

problema se aprecian en las figuras 3 y 4 respectivamente.

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Figura 3. Cromatograma de la solución de referencia.

Figura 4. Cromatograma de la muestra problema.

La información más relevante de cada cromatograma se resume en la tabla 2.

Cabe señalar, que el pico de importancia en cada caso es el que aparece a

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2.29 minutos correspondiente al naproxeno y por tanto se proporciona la

información sólo de este pico.

Tabla 2. Parámetros obtenidos de los cromatogramas de la solución de

referencia y de la muestra problema.

Parámetros Solución de referencia Muestra problema

Tiempo 2.293 minutos 2.293

Ancho del tiempo 0.0815 minutos 0.0858

Área 492.74280 mAU*s 498.33398 mAU*sAltura 90.55084 mAU 88.36023 mAU

Área (%) 93.3743 95.0201

Por último se calculó la cantidad de naproxeno en mg presentes en los 31.76

mg pesados originalmente para la determinación de la siguiente manera:

1. Se empleó la fórmula:

DC (Rmp / Rref )

D = Factor de dilución de la muestra problema.

C = Cantidad de naproxeno en referencia

Rmp / Rref  = Áreas de los picos obtenidos

2. Sustituyendo la fórmula:

(100) (0.025 mg/mL) (498.33/492.74) = 2.52 mg/mL

(2.52 mg/mL) (10 mL) = 25.28 mg de naproxeno

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3. Las cinco pastillas debieron tener 1250 mg de naproxeno teóricamente

ya que cada una contenía 250 mg de naproxeno. Sin embargo

experimentalmente se obtuvo que:

31.76 mg ------------------------------------ 25.28 mg de naproxeno

1588.1 mg ----------------------------------- X

X = 1264.07 mg de naproxeno.

DISCUSIONES

Con base en los resultados obtenidos en el análisis de naproxeno para su

identificación y cuantificación por CLAE se tiene que:

El porcentaje de principio activo presente en las cinco pastillas utilizadas en

este análisis está dentro del margen indicado por la FEUM, ya que esta

establece un rango de 90-110 % de principio activo y la muestra analizada

presentó un porcentaje de 101.12 %. Este valor es muy importante ya que

garantiza que el fármaco desarrolle de manera satisfactoria su actividadfarmacológica en el organismo.

Con respecto a la identificación de naproxeno:

Se puede observar que, debido al tempo de retención y al carácter polar del

naproxeno, este tuvo una elución relativamente rápida. Esto era de esperarse

ya que en este análisis por CLAE de fase inversa los analitos mas polares

eluyen de manera más rápida.

Se puede apreciar una gran similitud entre los cromatogramas, ya que los picos

pertenecientes al naproxeno presentan tiempos de retención idénticos, 2.293

para la referencia y la muestra; en cuanto al área, los valores son similares

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492.74 y 498.33 mAU*s para la referencia y muestra respectivamente. Es en

estos datos donde se puede observar una variación poco significativa la cual

ocasionó el aumento en el porcentaje de principio activo, que sin embargo está

dentro del rango permitido por la FEUM.

Los primeros dos picos que se aprecian en cada uno de los cromatogramas

pueden deberse a impurezas presentes en los disolventes y que no son

retenidas por la columna. Absorbieron luz Uv a la misma longitud de onda del

naproxeno y se puede decir que son especies con una considerable polaridad

debido a que sus tiempos de retención son muy bajos y por lo tanto eluyeron

con bastante rapidez.

CONCLUSIONES

Se cumplió con el objetivo de la práctica de aprender a cuantificar por CLAE

una muestra problema empleando el método de calibración absoluta.

De acuerdo a la cuantificación de las tabletas de naproxeno de 250 mg

realizada por CLAE se obtuvo un porcentaje de principio activo de 101.12 % el

cual está dentro del rango establecido por la FEUM.

El método utilizado posee una gran eficacia en la separación de los compuestos

que conforman una muestra problema en un tiempo bastante corto y con

resultados satisfactorios.

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Es de gran importancia que los disolventes utilizados sean de grado HPLC para

evitar cualquier dato erróneo en el análisis producido por alguna impureza

contenida en el disolvente.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. P.A. Insel, Analgésicos-Antipiréticos y Antiinflamatorios, y Fármacos

Antigotosos, En: “Goodman & Gilman. Las bases Farmacológicas de la

Terapéutica”,8a edición, Editado por, J.G. Hardman, L.E. Limbird, P.B.

Molinoff, R.W. Ruddon y A.G. Gilman, McGraw-Hill Interamericana

Editores, S.A., México, 1996, pp. 661-686.

2. Meyer, V; Practical High Performance Liquid Cromatography; 4a edición,

John Wiley & Sons. Inc; St. Gallen,Switzerland; 2004; pp.261-265

3. Dong,M; Modern HPLC for Practicing Scientists; 4ª edición; John Wiley& Sons, Inc; Hoboken, New Jersey ;2006; pp.136-143 , 195-201.

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