curso análisis de semen según los criterios de la oms-2010 (2ª parte)

Curso análisis de semen según los criterios de la OMS-

2010 (2ª parte)

Mariam Cortés Tormo

R2 Análisis clínicos

Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica

Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH

¿ Qué hacemos con la muestra recogida?

Identificar la muestra

Introducirla en estufa 37ºC

Si es posible someter a rotación con un agitador orbital

Iniciar la observación preferiblemente a los 30 min

Nunca después de 1 h.

Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica

Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH

La licuefacción se ensaya visualizando la muestraUna muestra normal es una muestra licuada y homogéneaTras la eyaculación el semen es una muestra semisólida coaguladaA los pocos minutos comienza a licuarse y a homogeneizarse

¿Qué pasa sí encontramos hilos de moco y cuerpos gelatinosos?

Sin importancia clínicaDificultan el análisisIntentar eliminarlos a la hora de manipular la muestra para las diferentes pruebas

Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica

Licuefacción Ocurre, normalmente, dentro de los primeros 15min. a Tª

ambiente Si en 60min. no ha licuado hay que reseñarlo Si hay dudas sobre la licuefacción, se puede observar al

microscopio

Típica imagen de una muestra no licuada

Manchas que recuerdan acúmulos de grasa

Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica

Licuefacción¿ Qué ocurre si no licua a los 60 min.? Hay que licuarla

Evitar la formación de burbujas para no alterar la muestra

Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica

Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH

Ensayo de la viscosidad:Con pipeta pasteur, dejando caer la muestra gota a gotaIntroduciendo varilla de vidrio en la muestra

Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica

ViscosidadUna muestra con viscosidad es homogénea. No

confundir con licuefacciónAlta viscosidad interfiere con las determinaciones

de movilidad, concentración, anticuerpos antiespermatozoide y bioquímica

Se elimina igual que en el caso de no licuefacción

Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica

Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH

Un semen normal debería ser homogéneo, gris opalescente

Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica

Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH

Mediante pesada:

Densidad = 1

Masa= Volumen

Pesar el recipiente (con etiqueta)= A

Pesar el recipiente con el semen = B

(B – A) = nº gramos = nº ml

Recipientes de recogida graduados:

Medida directa del volumen

No medir el volumen mediante transferencia a pipetas, jeringas o probetas, etc

La transferencia da lugar a mayores errores que con métodos anteriores

Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica

Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH

Refleja el balance entre las diferentes secreciones, principalmente entre el pH alcalino de las vesículas seminales y el ácido de la próstata

Usar tiras 6.0-10

Chequear el color antes de 30 sg

Chequear las tiras reactivas con soluciones patrón de pH

Límite inferior de referencia = 7.2

pH < 7.0 + oligo/azoospermia + volumen bajo

Sugiere agenesia u obstrucción de vesículas seminales y/o conductos deferentes

Análisis de semenEvaluación inicial microscópica

Microscopio de contraste de fases (se aconseja atemperado a 37 ºC

Observación a 100x (10x10)

Agregaciones

Aglutinaciones

Células no espermáticas

Observación a 200x-400x (10x20; 10x40)

Estimación de la dilución para calcular la concentración espermática

Movilidad espermática

Análisis de semenEvaluación inicial microscópica

Análisis de semenEvaluación inicial microscópica

Muestra a 37º C

Homogeneizar bien la muestra:

Ideal utilizar agitador orbital

Aspirar la muestra 10 veces con pipeta de plástico de 1,5 mm diámetro

Una falta de homogeneización provocará:

Análisis de semenEvaluación inicial microscópica

Agregaciones Adherencia de espermatozoides (inmóviles o móviles) a

células no espermáticas o detritos Son no específicas. Ninguna significación clínica

Análisis de semenEvaluación inicial microscópica

AglutinacionesEspermatozoides móviles unidos a otros spz. Móviles

Son específicas. Pueden tener significación clínica

No son evidencia suficiente para deducir presencia de Ac antiespermatozoides, pero sí nos sugieren investigar su presencia

Análisis de semenEvaluación inicial microscópica

Células no espermáticas

Análisis de semenMovilidad

Clasificación

PR: espermatozoides con movimiento progresivo, bien lineal o círculos amplios , independientemente de la velocidad

Análisis de semenMovilidad

Protocolo

Contar al menos 5 campos/porta

Contar al menos 200 spz/portaHacer doble contaje

Análisis de semenMovilidad

Evaluación de resultados

Se utiliza la gráfica del intervalo de confianza del 95% para diferencias entre dos porcentajes

Es el máximo error esperado entre dos contajes en el 95% de los casos cuando el único error es atribuible al contaje

Sí es >, preparar y contar 2 nuevas preparaciones de la muestra

Análisis de semenMovilidad

Evaluación de resultadosEjemplo:

Muestra (x2) en porta 400x

IM : 1º =38 ; 2º =50

Supera la diferencia máxima admisible que está alrededor de 9

Análisis de semenMovilidad

Evaluación de resultados

Análisis de semenConcentración

Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración

Análisis de semenConcentración

Observación previa

Análisis de semenConcentración

Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración

Material necesario:

Pipetas de desplazamiento directo

Pipetas automáticas normales, de desplazamiento por aire

Medio de dilución Weigman

Análisis de semenConcentración

Dilución según observación

Análisis de semenConcentración

Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración

Cámaras de recuento recomendadas:

Hemocitómetro (100 μm de profundidad)

Muestras fijadas

Cámaras de recuento NO recomendadas:

Cámaras de pequeño volumen= pocos spz

Cámaras llenadas por capilaridad= llenado desigual

Muestras no fijadas= spz móviles

Análisis de semenConcentración

Contaje en cámara por duplicado

Análisis de semenConcentración

Contaje en cámara por duplicado

Empezar a contar en la rejilla 5 hasta 200 spzContar filas completasSi en una fila no llegamos a 200 spz seguir por la otra filaSi en mitad de una fila llegamos a 200 spz hay que seguir contando hasta acabar la filaSi con la 5 no completamos los 200 spz seguimos por la 4 y luego por la 6Cuando se hace la dilución ½ hay que contar todas las rejillas

Análisis de semenConcentración

Contaje en cámara por duplicado

Análisis de semenConcentración

Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración

Si la diferencia entre los dos contajes supera el límite permitido habrá que empezar desde el principio, preparar dos nuevas diluciones y realizar de nuevo el doble contaje

Análisis de semenConcentración

Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración

Análisis de semenConcentración

Valores límite y su IC 95%

Análisis de semenConcentración

Cámara Makler Fácil de usar

Se carga con 10μl de semen

Se cuenta toda la cuadrícula el resultado divido entre 10 es la concentración en millón/ml

Se evalúa a la vez concentración y movilidad

¿Por qué la OMS no aconseja su uso?

Volumen bajo (profundidad 10 μm) Mayor dificultad movimiento spz

Menos exacto en concentración

Dificultad para fijar el cubre Mayor riesgo de error

EstandarizaciónControl de calidad

Análisis de semenMorfología

Protocolo Muestras por duplicado Limpiar vigorosamente los portas con papel e identificar

Análisis de semenMorfología

Protocolo

Análisis de semenMorfología

ProtocoloTinciones

Análisis de semenMorfología

Protocolo Tinción Diff-Quik

Observación en 100x (inmersión)Contar al menos 200spzMuestras por duplicado

Análisis de semenMorfología

Clasificación

Análisis de semenMorfología

Clasificación

v

No se cuentan ni los flagelos ni las cabezas sueltas

Análisis de semenMorfología

Evaluación de resultados

Si el error es mayor, no es necesario volvera repetir las preparaciones pero sí el contaje

El límite inferior de referencia en este nuevo manual es del 4%, a diferencia del 15 % del manual anterior

Análisis de semenVitalidad

FundamentoEs una medida indirecta del estado de la membrana

plasmática

Espermatozoide intacto = membrana intacta

Espermatozoide muerto = membrana dañada

Debe realizarse rutinariamente en todas las muestras

Es importante cuando la movilidad progresiva es < 40%

Análisis de semenVitalidad

Fundamento

No existe un alto grado de correlación entre Test colorantes y Test hipoosmóticos ya que miden efectos característicos distintos de la membrana plasmática

Análisis de semenVitalidad

Fundamento colorantes

Análisis de semenVitalidad

Eosina

Análisis de semenVitalidad

Eosina/NigrosinaMejor contraste de la imagen Permite guardar y reevaluar la muestra

Análisis de semenVitalidad

Imágenes de la coloración

Si sólo se tiñe la zona del cuello o la cabeza tiene una ligera coloración rosa se considerará el spz como vivo

Análisis de semenVitalidad

Fundamento hipoosmótico

Análisis de semenVitalidad

Asociación de las dos técnicas

Miden el estado estructural de la membrana plasmática

Miden estado funcional de la membrana plasmática

Análisis de semenVitalidad

Evaluación de resultados

El límite inferior de referencia en este nuevo manual es de 58% a diferencia del 75% del manual anterior

Análisis de semenVitalidad

Utilidad evaluación resultados movilidad

descartar problemas recogida muestra

sdme kartagener

Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide

Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide

El nuevo manual de la OMS: Sigue manteniendo la obligatoriedad de realizar el estudio de AAE en

todos los seminogramas

Es importante su realización en movilidad baja o presencia de aglutinaciones

No siempre que hay aglutinaciones hay AAE

Se considera que existe un factor inmunológico cuando más del 50% de los spz móviles de un eyaculado presentan AAE

En casos positivos se estudiará: Isotipos presentes

Intensidad de la respuesta

Localización Ac

Encontrar Ac no implica necesariamente facto inmunológico. Realizar pruebas funcionales

Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide

Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide

MAR test directo

Emplea semen completo Test rápido, fácil y sensible Menor información que IBT Muestras de menos movilidad que IBT Permite detectar IgG e IgA de origen

secretor

Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide

MAR test directo

Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide

IB test directo

Matriz poliacrilamida Emplea semen lavado Detecta IgG como IgA tanto

de origen secretor como no secretor

Más información al no interferir el líquido seminal

Análisis de semenOtras células

Un número alto de estas células puede ser debido a:

Procesos inflamatorios

Alguna patología o alteración testicular

Análisis de semenOtras células

Análisis de semenOtras células

Células espermatogénesis inmaduras

Fin segunda parte