contribución de los tapones de corcho al aroma del vino
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Contribución de los tapones de corcho al aroma del vino Compuestos positivos
Objetivo
Determinar los compuestos aromáticos, presentes en el tapón de corcho, capaces de tener un impacto positivo sobre la calidad sensorial de los vinos. • Análisis químico del perfil sensorial del tapón de
corcho
Materiales
Se han analizado tapones de corcho natural terminados • Clase visual: Extra • Dimensiones: 44x24 • Tratamiento de superficie: Silicona • Origen:
-Portugal (Valle del Tajo, Alentejo, Algarbe) -España (Extremadura, Catalunya, Valencia) -Italia (Toscana, Cerdeña) -Marruecos (Maâmora)
Materiales
Materiales y métodos
Extracción de aromas SPME
GC-MS
GC-MS
Maceración en solución hidroalcohólica
10 días
Extracción de aromas SPE
Análisis químico: Similar al análisis de aromas del vino
25g corcho granulado/l
Resultados
Vainillina y derivados
Fenoles volátiles
Aldehídos
Acetonas
Acetonas aromáticas
Alcoholes
Terpenoles
Furanos
Ácidos aromáticos
Esteres etílicos
Ácidos grasos
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
μg
/ g
corc
ho
Resultados Aldehídos, acetonas y alcoholes
Resultados
Resultados
Terpenoles
Resultados μ
g /
g co
rch
o
Resultados Ésteres etílicos Ácidos grasos
Resultados
Resultados
Furanos Acetonas aromáticas Ácidos aromáticos
Resultados μ
g /
g co
rch
o
Resultados
Resultados
Resultados
Resultados
Aldehídos
Acetonas, Acetonas aromáticas
y alcoholes
Résultats
Fenoles volátiles
Aldehídos Vainilla
Terpenoles Furanos
Ácidos aromáticos Ésteres etílicos
Acetonas aromáticas Acetonas Alcoholes
Ácidos grasos
Conclusiones
El corcho presenta compuestos aromáticos capaces de tener un impacto positivo sobre la calidad sensorial de los vinos. Existe una gran diversidad entre la composición aromática de los diferentes tapones de corcho. Puede resultar interesante estudiar la relación entre zona de origen del corcho y su perfil sensorial.
Contribución de los tapones de corcho al aroma del vino Evitar el gusto a tapón
Objectivo
Reducción del TCA del corcho para evitar el gusto a tapón en el vino. Métodos para reducir el TCA: • La industria ha desarrollado métodos curativos con
resultados muy interesantes. • Métodos de prevención del TCA. Conocer el origen.
Determinar el origen del TCA del corcho a partir del estudio de los organoclorados que aparecen simultáneamente con el TCA. Caracterizar a nivel químico la mancha amarilla del corcho como un modelo de degradación del corcho y de producción de compuestos organoclorados.
Introduccion
El gusto a tapón implica la presencia de diferentes compuestos: chloroanisoles, guayacol, geosmina y pirazinas.
El 2,4,6- tricloroanisole (TCA) es el principal resposable a causa de su bajo umbral de detección sensorial
Introducción
La mancha amarilla del corcho es un defecto causante de aromas indeseables en el corcho. La industria corchera rechaza los corchos que muestran este defecto. Se origina en el alcornoque. La propagación empieza en la espalda y avanza hacia el interior.
Materiales
Corcho con mancha amarilla.
Muestras recogidas en el árbol sin ningún tratamiento.
Materiales y métodos
Corcho triturado
Diámetro < 0,5mm
SPME espacio de
cabeza del corcho
Maceración en solución
hidroalcohólica
10 diías
Extracción SPE
Extracción SBSE
Extractabilidad muy
diversa
Resultados
Composés Éschatillons
TJA - Ѵ - - Ѵ Ѵ - - -
TJC - - - - Ѵ Ѵ - - -
TJD Ѵ - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ Ѵ -
TJF - - Ѵ - - Ѵ - Ѵ Ѵ
TJG - - - - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ
TJH Ѵ - - Ѵ - Ѵ - Ѵ -
SA - - - - - - - - -
SB - - - - - - - - -
SC - - - - - - - - -
El análisis de muestras de corcho con mancha amarilla ha permitido identificar nueve compuestos clorados
diferentes:1 fenol, 3 anisoles y 5 dimetoxibenzenos
Resultados
Composés Éschatillons
TJA - Ѵ - - Ѵ Ѵ - - -
TJC - - - - Ѵ Ѵ - - -
TJD Ѵ - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ Ѵ -
TJF - - Ѵ - - Ѵ - Ѵ Ѵ
TJG - - - - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ
TJH Ѵ - - Ѵ - Ѵ - Ѵ -
SA - - - - - - - - -
SB - - - - - - - - -
SC - - - - - - - - -
Resultados
Composés Éschatillons
TJA - Ѵ - - Ѵ Ѵ - - -
TJC - - - - Ѵ Ѵ - - -
TJD Ѵ - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ Ѵ -
TJF - - Ѵ - - Ѵ - Ѵ Ѵ
TJG - - - - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ
TJH Ѵ - - Ѵ - Ѵ - Ѵ -
SA - - - - - - - - -
SB - - - - - - - - -
SC - - - - - - - - -
El único fenol clorado que hemos podido
encontrar
Veratrol clorado
Resultados
Composés Éschatillons
TJA - Ѵ - - Ѵ Ѵ - - -
TJC - - - - Ѵ Ѵ - - -
TJD Ѵ - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ Ѵ -
TJF - - Ѵ - - Ѵ - Ѵ Ѵ
TJG - - - - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ
TJH Ѵ - - Ѵ - Ѵ - Ѵ -
SA - - - - - - - - -
SB - - - - - - - - -
SC - - - - - - - - -
Veratrol chlorado Presente en todas las muestras
Resultados
Composés Éschatillons
TJA - Ѵ - - Ѵ Ѵ - - -
TJC - - - - Ѵ Ѵ - - -
TJD Ѵ - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ Ѵ -
TJF - - Ѵ - - Ѵ - Ѵ Ѵ
TJG - - - - Ѵ Ѵ - Ѵ Ѵ
TJH Ѵ - - Ѵ - Ѵ - Ѵ -
SA - - - - - - - - -
SB - - - - - - - - -
SC - - - - - - - - -
Veratrol chlorado
Resultados
-Perdidas de 35 m/z
-Distribución isotópica característica, al entorno de determinadas m/z
Análisis mediante GC-qTOF/MS
Hemos encontrado 7 compuestos clorados no identificados
correctamente.
Resultados
Masa Fórmula Fragmento Pérdida
262.01 C11H12Cl2O3
246.99 CH3
218.99 OCHCH2
212.02 Cl+CH3
203.97 OCHCH2
+ CH3
197.00 Cl+CH3+
CH3
Cl
Cl
OCH3
O
CH2
CH3
H3CO
Resultados
Masa Fórmula Fragmento Pérdida
262.01 C11H12Cl2O3
246.99 CH3
218.99 OCHCH2
212.02 Cl+CH3
203.97 OCHCH2
+ CH3
197.00 Cl+CH3+
CH3
Cl
Cl
OCH3
O
CH2
CH3
H3CO
-Puede proponerse una estructura para cada compuesto
-No tenemos ninguna información sobre la distribución
de los sustituyentes en el anillo benzénico
Resultados
Masa Fórmula Fragmento
(m/z) Pérdida
278.01 C11H12Cl2O4
262.98 CH3
243.04 Cl
234.99 OCHCH2
Cl
Cl
OCH3
H3CO
H3CO
O
CH2
Resultados
Masa Fórmula Fragmento
(m/z) Pérdida
260.00 C11H10Cl2O3
244.97 CH3
216.98 OCHCH2
201.95 OCHCH2+
CH3
Resultados
Masa Fórmula Fragmento
(m/z) Pérdida
278.01 C11H12Cl2O4
262.98 CH3
248.97 CH2CH3
233.96 CO2
Cl
ClCH3
OCH3
O
CH2
HOOC
Resultados
Masa Fórmula Fragmento
(m/z) Pérdida
248.00 C10H10Cl2O3
230.03 H2O
213.03 Cl
206.99 OCCH
198.00 Cl+CH3
Cl
Cl
CH3
OH
H3CO O
CH
Resultados
Masa Fórmula Fragmento
(m/z) Pérdida
248.00 C10H10Cl2O3
230.03 H2O
213.03 Cl
206.99 OCCH
198.00 Cl+CH3
Resultados
Masa Fórmula Fragmento
(m/z) Pérdida
248.00 C10H10Cl2O3
229.99 H2O
213.03 Cl
206.99 OCCH
188.98 H2O+OCCH
Cl
Cl
O
CH
OH
CH3
H3CO
Cl
Cl
OH
O
CH
O
CH3
Resultados
Masse Formule Fragment
(m/z) Perte
248.00 C10H10Cl2O3
229.99 H2O
213.03 Cl
206.99 OCCH
188.98 H2O+OCCH
Cl
Cl
O
CH
OH
CH3
H3CO
Cl
Cl
OH
O
CH
O
CH3
No hemos podido resolver el problema
Resultados
Cl
Cl
Cl
OCH3OCH3
Cl
O
Cl
Cl
OCH3
Cl
Cl
OH
Cl
OCH3
OCH3
Cl
OCH3
Cl
OCH3
Cl
OCH3
Cl
OCH3
ClCl
Cl
OCH3
OCH3
Cl
Cl
Cl
OCH3
Cl
OCH3
ClCl
Cl
Cl
Cl
CH3
OH
H3CO O
CH
Cl
Cl
O
CH2
OCH3
O
CH2
Cl
Cl
OCH3
O
CH2
CH3
H3CO
Cl
Cl
OCH3
H3CO
H3CO
O
CH2
Cl
ClCH3
OCH3
O
CH2
HOOC
Cl
Cl
OH
O
CH
O
CH3
Cl
Cl
O
CH
OH
CH3
H3CO
Discusión
Origen del TCA – Hipótesis actuales
Fusarium , Trichoderma
•Síntesis química: Formación de TCP a partir de niveles bajos de cloro y de fenoles presentes en el medioambiente. El corcho puede acumularlo.
•Pesticidas en el bosque que contengan TCP.
•Deshalogenación del PCP antropogénico presente en el medioambiente por acción de microorganismos.
•Utilización de cloro en el proceso de fabricación.
•Biosíntesis de novo de compuestos organoclorados
Discusión
Origen del TCA– Síntesis química
Cloro + +
Hipótesis incompatible con la aparición de compuestos meta-
sustituidos y de compuestos con más de tres átomos de cloro.
Cl
Cl
OH
Cl
Cl
Cl
OCH3
Discusión
No conocemos la distribución de los sustituyentes en el ciclo
aromático. No podemos determinar si la cloración química es
posible.
¿Cuál es el origen de los reactivos no clorado?
Cl
Cl
CH3
OH
H3CO O
CH
Cl
Cl
O
CH2
OCH3
O
CH2
Cl
Cl
OCH3
O
CH2
CH3
H3CO
Cl
Cl
OCH3
H3CO
H3CO
O
CH2
Cl
ClCH3
OCH3
O
CH2
HOOC
Origen del TCA– Síntesis química
Discusión
Origen del TCA– Utilización de cloro en el proceso de fabricación del tapón
Muestras de corcho recogidas en el bosque
Discusión
Origen del TCA – La utilización de biocidas en base a PCP en el bosque que contienen TeCP y TCP como elementos minoritarios.
Hipótesis incompatile con los compuestos organolcorados
que encontramos simultaniamente con el TCA
Biometilación
Discusión
Origen del TCA – La utilización de biocidas en base a PCP en el bosque que contienen TeCP y TCP como elementos minoritarios.
Hipótesis incompatile con los compuestos organolcorados
que encontramos simultaniamente con el TCA
Biometilación
Cl
Cl
CH3
OH
H3CO O
CH
Cl
Cl
O
CH2
OCH3
O
CH2
Cl
Cl
OCH3
O
CH2
CH3
H3CO
Cl
Cl
OCH3
H3CO
H3CO
O
CH2
Cl
ClCH3
OCH3
O
CH2
HOOC
Discusión
Origen del TCA – La degradación de PCP antropogénico por los microorganismos
Bacterias anaerobias
Bacterias aerobias
Basidomicetos
Conjunto complejo de cloroanisoles y
clorofenoles
No encontramos estos compuestos
en la mancha amarilla
Discusión
Origen del TCA – La degradación de PCP antropogénico por los microorganismos
Bacterias anaerobias
Bacterias aerobias
Basidomicetos
Conjunto complejo de cloroanisoles y
clorofenoles
Cl
Cl
CH3
OH
H3CO O
CHCl
Cl
O
CH2
OCH3
O
CH2 Cl
Cl
OCH3
O
CH2
CH3
H3CO
Cl
Cl
OCH3
H3CO
H3CO
O
CH2
Cl
ClCH3
OCH3
O
CH2
HOOC
Discusión
•Bordas, M.F. (1904) “Sur la maladie de la tache jaune des chênes–liège”. Comptes rendus hebdomadaires des séances de l’Académie des sciences 138 (15), 928-929.
Origen del TCA – La degradación de TCP antropogénico por los microorganismos
Discusión
•Bordas, M.F. (1904) “Sur la maladie de la tache jaune des chênes–liège”. Comptes rendus hebdomadaires des séances de l’Académie des sciences 138 (15), 928-929.
Origen del TCA – La degradación de TCP antropogénico por los microorganismos
Discusión
Origen del TCA – Biosíntesis de novo de compuestos organoclorados
Muchos hongos son capaces de producir organoclorados
aromáticos de novo.
Cerca de 80 compuestos aromáticos clorados, producidos por
distintos géneros de hongos, han sido identificados.
Productos esperados: Mezcla compleja de compuestos clorados.
Tres de los compuestos encontrados en mancha amarilla figuran en las listas publicadas.
3
3
33
3
3
3
3
Mycena sp Bjerkandera
adusta Psathyrella subatrata
Lepista nuda
Discusión
Origen del TCA – Biosíntesis de novo de compuestos organoclorados
Cl
Cl
CH3
OH
H3CO O
CH
Cl
Cl
O
CH2
OCH3
O
CH2
Cl
Cl
OCH3
O
CH2
CH3
H3CO
Cl
Cl
OCH3
H3CO
H3CO
O
CH2
Cl
ClCH3
OCH3
O
CH2
HOOC
-Biosíntesis de estos compuestos clorados por microorganismos. -¿Productos de degradación de lignina o suberina? Cloración posterior.
Conclusiones
El origen del TCA en la mancha amarilla del corcho no puede explicarse por: • La síntesis química del TCP. • La biosíntesis a partir de compuestos clorados de origen
antropogénico. • La utilización de compuestos clorados en el proceso de
fabricación del tapón.
La hipótesis compatible con los resultados obtenidos es: • La biosíntesis de novo de compuestos organoclorados.
Conclusiones
El origen del TCA en la mancha amarilla del corcho no puede explicarse por: • La síntesis química del TCP. • La biosíntesis a partir de compuestos clorados de origen
antropogénico. • La utilización de compuestos clorados en el proceso de
fabricación del tapón.
La hipótesis compatible con los resultados obtenidos es: • La biosíntesis de novo de compuestos organoclorados.
Materiales y métodos
Aislado de
microorganismos
Identificación de
microorganismos
Amplificación ITS - 5,8 S rDNA
con los primers ITS4 et ITS5
Secuenciación
Resultados
Penicillium spinulosum
Penicillium glabrum
Penicillium pancosmium
Penicillium rugulosum
Odiodendron griseum
Cladosporium bruhnei
Aureobasidium pullulans
Corcho sano
Resultados Trichoderma harzianium
Trichoderma aureoviridi
Trichoderma tomentosum
Lecanicillium lecanii
Verticillium spp.
Fusarium solani
Gibberella spp.
Nuerospora spp.
Biscogniauxia mediterranea
Cladosporium sphaeros
Cladosporium brunhei
Davidiella tasiana
Corcho con
mancha amarilla(I)
Résultats
Umbellopsis isabellina
Mucor plumbeus
Mucor racemosus
Alternaria alternata
Pyrenochaeta ungis-hominis
Penicillium brevicompactum.
Penicillium swiecickii
Penicillium citreonigrum
Penicillium spinulosum.
Aspergilus flavus
Penicillium glabrum
Tremella fuciformis
Aureobasidium pullulans
Corcho con
mancha amarilla(II)
Conclusiones
-La diversidad microbiana es mayor en el corcho con
mancha amarilla que en el corcho sano.
-En los dos tipos de corcho se ha encontrado Penicillium
spp., Cladosporium spp., Tremella spp. y Aureobasidium
pullulans.
- Umbelopsis isabelina, Muchor spp. y Trichoderma spp se
han encontrado solamente en corcho con mancha amarilla.
MUCHAS GRACIAS
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