clase 18 - tejido nervioso
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TEJIDO
NERVIOSO UV 2012
El tejido nervioso es un tejido de origen ectodérmico, formado por
corpúsculos bien diferenciados,
de naturaleza estrellada con numerosas prolongaciones,
una mas larga que las demás, y tienen por objeto
establecer relación dinámica con otros elementos
de su misma naturaleza o de tejidos subordinados. (Cajal).
Tipos de muestra
Biopsia cerebral o medular de carácter
diagnóstico
Fragmentos tumorales de resección
neuroquirúrgica
Material de necropsia (cerebro y medula
espinal)
Resecciones transesfenoidales de lesiones
hipofisiarias (sistema neuroendocrino)
•Debe ser retirado lo mas rápido posible
•Colocar en abundante fijador
•Cubrir con gasa para manipular
•Hacer cortes con cuchillo muy afilado
FIJADORES
Formol buffer
Formol salino (NaCl)
Formol-bromuro de amonio
Liquido de Müller (liquido de Orth)
Acido osmico
Fijadores a base de hipnóticos:
Hidrato de cloral
Veronal
MÉTODOS
Cortes en parafina
Cortes por congelación previa fijación
Tinción en bloque
Técnicas Histológicas
para SN
SNC ENCEFALITIS Y MENINGITIS TUBERCULOSA:
ZIEHL-NEELSEN
AMILOIDE: ROJO CONGO
MEORRAGIAS ANTIGUAS: HEMOSIDERINA MEDIANTE REACCION DE PERLS
DEPOSITO DE CALCIO CONSECUENCIA DE CUADORS INFECCIOSOS VIRALES: VON KOSSA
ENFERMEDADES DESMIELINIZANTES: ESCLEROSIS MULTIPLE: TECNICAS PARA LA MIELINA
SNC
ENFERMEDADES DESMIELINIZANTES:
ESCLEROSIS MULTIPLE: TECNICAS PARA LA
MIELINA
SNP
DEGENERACION WALLERIANA DEL AXON:
KLUVER-BARRERA
IDENTIFICACION
COLORACION
1. Coloración para neuronas y cuerpos de
Nissl
2. Coloración para glías
3. Coloración para vainas de mielina
IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA
Corteza cerebelo H - E
1.- Técnica de Nissl
Para neuronas y cuerpos de Nissl: se debe
usar colorantes básicos de anilina que se
unen a los ácidos nucleicos, se precisa un
pH acido, se diferencia con alcohol
etílico se fija la coloración con molibdato
de amonio
Corteza cerebelosa con técnica de Nissl
1.- Técnica del azul de
toluidina
Tanto para el cuerpo neuronal como
para la identificación de sustancia de
Nissl, dan buenos resultados: azul de
metileno, azul de toluidina, tionina, violeta
de cresilo y galocianina
Se deben usar en soluciones tamponadas
Corteza cerebelo
Células piramidales
Azul de metileno
Tejido nervioso en corte semi-fino para M-E, teñido con azul de toluidina
(Profesor Eduardo Couve
Microscopía electrónica
Universidad de Valparaíso)
2.- Glías
PAGF: IHQ (astrocitos fibrosos)
Se conservan: Técnica de Holzer derivado de la parafucsina)
Utiliza violeta de cristal como colorante
Mordentar con acido fosfomolíbdico
Diferenciar con aceite de anilina
Entrega excelentes resultados en solución alcohol-cloroformo
Impregnaciones argénticas
3.- Vaina de mielina: método
de Kluver-Barrera 1º.- Desparafinar e hidratar hasta alcohol de 96ºC.. 2º.- Solución de azul luxol en estufa (37ºC o 60ºC) de 12 a 20 horas.
3º.- Extraer el exceso de colorante con alcohol de 96ºC, 5-10 seg. 4º.- Diferenciar con solución de carbonato de litio, 5-10 seg. 5º.- Pasar varias veces por alcohol de 70ºC bajo control microscópico
hasta que se diferencien bien sustancia blanca y sustancia gris. 6º.- Lavar en AD 7º.- Teñir con solución de violeta de Cresilo 6 minutos como mínimo.
(Nota: antes de usar esta solución se le añaden 15 gotas de acacético,
se filtra y se calienta a 60ºC. 8º.- Diferenciar en alcohol de 96ºC. 9º.- Deshidratar aclarar y montar.
RESULTADOS
Núcleos y grumos de Nissl color rojo-violeta. Vainas de mielina azul oscuro
MÉTODO DE KLUVER-BARRERA PARA
NÚCLEOS, GRUMOS DE NISSL Y
VAINAS DE MIELINA
Depto. Ciencias Biológicas y Reproductivas
Universidad de Valparaíso
IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA
Aplicadas al sistema nervioso tienen un
fundamento empírico, con gran numero
de modificaciones
Dependen del órgano del SN que se
quiera identificar
Preferentemente incluir en celoidina
Cortes entre 10 y 14 µm.
Método de Bielschowsky Impregna células
nerviosas y sus prolongaciones
Utiliza: Nitrato de plata
Nitrato de plata amoniacal (tonalidad marrón)
Formol Agua destilada -
cloruro de Au- Tiosulfato de sodio
NEURONAS
Golgi
Tiene dos métodos:
Impregnación negra: (ML/MR)
Fija con liquido de Müller (sublimado)
Impregnar con nitrato de plata
Coloración gris:
Bicloruro de mercurio
NEURONAS
Golgi 1º.- Piezas muy frescas de menos dc 3 mm. dc espesor.
Se fijan en 250ml. de la Solución de Kopsch-formol-bicromato por 24 horas. 2º.- Pasar las piezas a la Solución de bicromato de potasa al 3,5% por 2-6 días. 3º.- Pasar las piezas a un baño con Solución de nitrato de plata,
se forma un precipitado rojizo inmediatamente,
y se pasa a otro baño de la misma, donde permanecerá de 24 a 36 horas. 4º.- Corte por congelación 75-100 micras. 5º.- Deshidratación prolongada: alcohol de 96% - 15 min.
Alcohol absoluto 3 pases de 10 min. cada uno. 6º.- Aclarar con carboxilol-creosota 2 veces de 15 min.
xilol 3 veces de 10 min. cada una y montar con abundante bálsamo.
RISULTADOS
Somas neuronales, dendritas, espinas dendríticas,
vasos y ocasional mente elementos gliales, en negro sobre fondo amarillo
NEURONAS
Técnica de plata de Golgi
NEURONAS
Nitrato de plata de Cajal 1º.- Fijación de bloques de 2 mm. de espesor
( médula o cerebro de animal adulto en formol al 10%, de 3 a 15 días. 2º.- Retallar los bloques y sumergirlos en la solución de piridina,------ 2 días. 3º,- Lavar en agua corriente ----------------------------------------------------12 horas. 4º.- Inmersión en formol al 10% ------------------------------------------------hasta su corte. 5º.- Corte por congelación (20-30 micras). 6º.- Lavar en agua destilada (AD). 7º.- Introducir en solución de nitrato de plata, más unas gotas de piridina hasta
que los cortes tomen color amarillo.
En frío (2-4 horas). En caliente (unos minutos). 8º.- Reducción en la solución formol-hidroquinona--------------------------3 min 9º.- Lavar en abundante AD 10º.- Deshidratas, aclarar y montar.
Las terminaciones axónicas se tiñen en negro sobre fondo claro.
NEURONAS
MÉTODO DE NITRATO DE PLATA DE CAJAL,
PARA TERMINACIONES NERVIOSAS
NEURONAS
Sublimado de oro de Cajal
para astrocitos Piezas frescas de cerebro de mamífero se fijan de 2 a 15 días
en Solución de formol-bromuro. Corte por congelación . 30-40 micras Lavado breve en AD Baño en Solución de cloruro de oro en una placa de Petri .
Sumergir en ella 4-6 cortes, extendidos en el fondo y sin contactar unos con otros.
La temperatura debe ser 24-26ºC, el tiempo 4-6 horas y en la oscuridad.
Lavado rápido en AD Fijación en Solución Fijadora.-------5-10 min.
Lavado en alcohol de 70ºC. Extensión sobre el porta y secado con papel de filtro. Deshidratar, aclarar con esencia de orégano y xilol, y montar. RESULTADOS Astrocitos de color rojo púrpura. Neuronas en rosa pálido o
violeta.
NEUROGLÍAS
NEUROGLÍAS
MÉTODO DEL CARBONATO DE PLATA DE RÍO-HORTEGA
PARA MICROGLÍA
NEUROGLÍAS
MÉTODO DE GOLGI-HORTEGA,
PARA OLIGODENDROGLIA
NEUROGLÍAS
Neuronas y neuroglia con impregnación argéntica
Nervios periféricos Los nervios
periféricos son haces de fibras nerviosas (axones) rodeados por varias hojas de revestimiento que corresponden a tejido conectivo. Estos haces también se conocen como fascículos
epineuro
Nervios periféricos
NERVIOS PERIFÉRICOS
ENDONEURO
PERINEURO
EPINEURO
Técnica H - E
Nervio
Epineuro
NERVIOS PERIFÉRICOS
Mielina
Se combina con el
tetróxido de osmio
contenida en solución
de acido osmico
Se realiza en cortes por
congelación de 10 a
20µm de grosor
INMUNOFLUORESCENCIA
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