caracteriación química de azafrán por técnicas de hplc · fase móvil b: h2o/ac. fórmico 0,05%...

Bruker Daltonik GmbH

Caracteriación química de azafrán por técnicas de HPLC

Caracteriación química de azafrán por

técnicas de HPLC

Dr. Fernando Lafont. Univesidad Córdoba

Bruker Daltonik GmbH

Introducción

Preparación muestra

Instrumentación analítica

Resultados

HPLC-UV/DAD

UHPLC-QTOF

Bruker Daltonik GmbH

Preparación de muestra

20000 rpm

Dispersar

0,25 g muestra homogeneizada

Transferir muestra a un tubo de 50 mL

Añadir 25 mL 50% H2O/50% MeOH

CentrifugarInyectar HPLC-UV/DAD

Inyectar UHPLC-TOF

Filtrar Transferir 1 mL a vial

0.2 µm

100 µL PI (2-nitroanilina)

+

Bruker Daltonik GmbH

Instrumentación HPLC-UV/DAD

HPLC

Fase móvil A: H2O

Fase móvil B:ACN

Columna: C18, 10 cm × 4,6 mm 2,7 µm

Flujo de la columna: 1 mL min-1

Temperatura: 35ºC

Inyección de muestra: 5 µl

Detector UV/DAD

ʎ1: 440 nm

ʎ2: 250 nm

ʎ3: 310 nm

Tiempo(min)

A(%)

B(%)

6 20 80

29 50 50

30 100 0

34 100 0

Bruker Daltonik GmbH

Instrumentación UHPLC-TOF

HPLC

Fase móvil A: Metanol

Fase móvil B: H2O/Ac. Fórmico 0,05%

Columna: C18, 10 cm × 2,1 mm 1,8 µm

Flujo de la columna: 0,40 mL min-1

Temperatura columna: 40ºC

Inyección de muestra: 5 µl

Fuente

Ionización: Electrospray positivo, 5500 V

Temperatura: 225 ºC

Detector MS: Bruker

Maxis Impact II,

Resolución: 40000

Adquisición de datos:

bbCID (m/z 60-1000)

Tiempo(min)

A(%)

B(%)

0 95 5

0.35 95 5

10 50 100

14 0 100

Bruker Daltonik GmbH

Resultados HPLC-UV/DAD

ʎ3: 310 nm

ʎ1: 440 nm

ʎ2: 250 nm

Bruker Daltonik GmbH

Resultados HPLC-UV/DAD

ʎ1: 440 nm

ʎ2: 250 nm

ʎ3: 310 nm

Longitud de onda(nm)

Compuestoscuantificados

440 Crocín

250 Picocrocín y kaempherol

310 Safranal

Bruker Daltonik GmbH

Resultados HPLC-UV/DAD

Crocín (suma)

Criterios de linealidad

r2 > 0,995

RSD < 10%

Bruker Daltonik GmbH

Resultados HPLC-UV/DAD

Muestras totales: 139

Compuesto Valor medio(mg/g)

RSD(%)

Safranal 1.87 43.5

Crocín 174 26.7

Kaempherol 0.55 25.5

Bruker Daltonik GmbH

Resultados HPLC/UV-DAD

Toledo

Ciudad Real

Albacete

Cuenca

Bruker Daltonik GmbH

Resultados HPLC/QTof

Detección de 368 compuestos diferentes

Gracias!!!