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Buenas prácticas de higiene en la cadena del café
Análisis de la OTA:Un aspecto importante de los
programas de prevención contra la OTA
Módulo 6.2
Diapositiva 2Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Por qué hacer un análisis de la OTA
En apoyo a los programas de vigilancia de la OTA Para generar datos sobre los niveles de distribución y
contaminación
Para permitir la evaluación de las repercusiones de las medidas de prevención y optimizar los programas
Para certificar el cumplimiento de los niveles oficiales de OTA o de los requisitos del comprador
En apoyo a la investigación orientada a entender mejor el problema y probar soluciones
Diapositiva 3Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Planificación del análisis de la OTA
Para realizar los beneficios del análisis de la OTA, los servicios analíticos deben tener La competencia técnica y el equipo necesarios
para llevar a cabo los análisis requeridos con los niveles de sensibilidad y cuantificación pertinentes
La capacidad de llevar a cabo el volumen de análisis necesarios en el plazo requerido
Diapositiva 4Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Inversión en el análisis de la OTA
Instalaciones adecuadas Para reducir al mínimo los peligros
profesionales; asegurar un entorno para que el equipo funcione bien y reciba el mantenimiento necesario t
Equipo y materiales necesarios Para llevar a cabo los estudios y los métodos
oficiales de análisis según se requiera Personal adecuado y calificado
Analistas profesionales y expertos; técnicos para mantener y reparar el equipo; personal de apoyo; capacitación regular en el trabajo
Diapositiva 5Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
¿Son aceptables los costos?
Promueve la confianza en el sector nacional del café Los programas oficiales de vigilancia y análisis
de la OTA, cuya buena cimentación esté comprobada, pueden promover la confianza de los importadores y la posición del país en el comercio internacional
Protege a los consumidores del país Protege contra el riesgo de que café de poca
calidad se destine al consumo local Recuperación de costos de la industria
Es posible recuperar por lo menos una parte de los costos
Diapositiva 6Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Aspectos técnicos de los programas de análisis de la OTA
Los principales aspectos de los programas de análisis de la OTA son Los planes de muestreo Métodos de análisis validados Un sistema para garantizar la calidad
Diapositiva 7Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Planes de muestreo para investigar la presencia de OTA en el café
La distribución heterogénea de OTA en los lotes de café hace necesario tomar muestras representativas
Los planes de muestreo se deben diseñar en relación con el objetivo de la toma de muestras Para tener una unidad representativa a fin de estimar el
“todo” Para caracterizar un determinado sector de la población
La formulación de planes oficiales de muestreo tiene como objetivo proporcionar métodos internacionales para evitar dificultades surgidas de diferencias jurídicas y técnicas relacionadas con la toma de muestras en el comercio (Codex Alimentarius)
Diapositiva 8Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Establecimiento de métodos de muestreo
Los métodos de muestreo para los programas de vigilancia y análisis de la OTA deben especificar Procedimientos para la toma y la
manipulación de las muestras El tamaño y el número de incrementos para
obtener una muestra representativa Criterios estadísticos para la aceptación y el
rechazo de un lote, a partir de la muestra
Diapositiva 9Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
El tamaño de la muestra y el número de muestras significan
El porcentaje de lotes aceptados a concentraciones inferiores al límite reglamentado (lotes buenos)
El porcentaje de lotes rechazados a concentraciones superiores al límite reglamentado (lotes malos)
Incertidumbre asociada con el procedimiento de análisis de la OTA
Riesgos de los compradores
Riesgos de los vendedores
Aspectos decisivos del muestreo para el análisis oficial de la OTA
Diapositiva 10Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Requisitos para los métodos oficiales de análisis
Validación Precisión Posibilidad de repetir los resultados
(en y entre laboratorios)
En el margen de criterios de desempeño mínimo establecidos
Diapositiva 11Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Características principales de los métodos oficiales de análisis
1. Exactitud
2. Aplicabilidad
3. Límites de detección y determinación
4. Linealidad
5. Precisión
6. Recuperación
7. Selectividad
8. Sensibilidad
Diapositiva 12Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
¿Quién decide en los métodos oficiales de análisis?
Los métodos validados pueden adoptarse como métodos oficiales
por
El Codex Alimentarius AOAC International Normas nacionales e internacionales
Diapositiva 13Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Selección de métodos cuando no hay métodos oficiales o no son aplicables
Validación interna, de acuerdo a las Recomendaciones armonizadas de la IUPAC para la validación de métodos de análisis en un solo laboratorio
Método comprendido en la norma ISO/IEC 17025:1999 o principios de buenas prácticas de laboratorio
Diapositiva 14Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Métodos oficiales
Métodos internacionalmente validados en colaboración mediante protocolos
internacionales armonizados
Café tostado, Entwisle et al. 2001; AOAC 2000.09; CEN EN 14132:2003
Café verde, Vargas et al. 2005; AOAC 2004.10
En el sitio web de la AOAC no se ha anunciado algún método oficial de análisis de la ocratoxina A
Diapositiva 15Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Diagrama de circulación del análisis de la OTA
Diagrama de los pasos generales de la toma de muestras, preparación
de las muestras y análisis de la presencia de micotoxinas en los productos agrícolas
Preparación de la muestra
MUESTREO
Muestra de prueba
Lote
Extracción
Separación y cuantificación
PurificaciónAnálisis para determinar la
presencia de OTA
MOLIDO Y HOMOGENEIZACI
ÓN
Toma de muestras secundarias
Resultado de la prueba de micotoxinas
Garantía de
calidad analítica
Diapositiva 16Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Evaluación de los métodos de análisis de la OTA
Hay criterios funcionales importantes Exactitud y posibilidad de repetición
Hay consideraciones prácticas significativas Velocidad del análisis Cualitativo o cuantitativo Preparación necesaria para hacer el ensayo Costos iniciales y recurrentes
Diapositiva 17Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Pasos del análisis de la OTA: preparación de las muestras
Es un paso de primera importancia en el procedimiento analítico
Requiere tiempo
Molido
Homogeneización
Preparación de la pasta
Diapositiva 18Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Pasos del análisis de la OTA: la extracción
El solvente específico depende de la matriz o de los pasos de purificación y cuantificación
Diapositiva 19Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Pasos del análisis de la OTA: la extracción
Recuperación de la verdadera concentración de las micotoxinas es un punto crítico
Solvente orgánico en presencia de ácido o un solvente de extracción que contenga
bicarbonato de sodio acuoso
Batidora o mezcladora de alta velocidad
Diapositiva 20Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Pasos del análisis de la OTA: purificación
Supone en esencia Separar la micotoxina de las sustancias que
se extrajeron con ella Paso inicial de la concentración
Métodos de purificación Los procedimientos comunes requieren
tiempo y son laboriosos Inmunoafinidad con sorbentes para
extracción de fase sólida (EFS)• Un importante método• Proporciona métodos muy selectivos
Diapositiva 21Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Pasos del análisis de la OTA: purificación
Columna de inmunoafinidad en la purificación del café verde
Diapositiva 22Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Pasos del análisis de la OTA: separación, detección y cuantificación
Los métodos disponibles son Cromatografía de líquidos con detector de
fluorescencia (CL/fluoresencia) Cromatografía en capas delgadas (CCD) Prueba de inmunosorción enzimática (ELISA) Fluorimetría Dispositivos de flujo lateral Inmunoensayo de polarización de
fluorescencia (FPIA)
Diapositiva 23Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Pasos del análisis de la OTA: separación, detección y cuantificación
Nuevos enfoques analíticos
Métodos de análisis rápidos y económicos Basados en biosensores
Kits de tiras reactivas
Cromatografía de líquidos aunada a Espectrometría de masas por ionización de haz de
electrones (MS)
Espectrometría de masas en tandem o secuencias (MS/MS)
Diapositiva 24Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
La cromatografía de líquidos en el análisis de la OTA
Principales ventajas Posibilidad de automatización Poder de separación Selectividad Límites más bajos de detección (0,12-0,2
g/kg)
Principales desventajas Método costoso Requiere analistas y técnicos calificados
Diapositiva 25Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
La cromatografía de líquidos en el análisis de la OTA
Detección y cuantificación
Cromatograma de una solución normal de OTA a una concentración de 0,0218
µg/ml. Fase inversa 250x4,6 mm – 0,5µm. Detector de fluorescencia. Fase móvil:
acetonitrilo: metanol: agua: ácido acético (35+35+29+1). Caudal: 0,8mL/min.
Procesador automático de muestras
Diapositiva 26Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
La cromatografía en capas delgadas en el
análisis de la OTATécnica robusta, sencilla, veloz, económica
Principales ventajas
Relativamente económicaconsiderable competencia y experiencia en los países en desarrollo
utilizada en aplicaciones de rutina
Columna de inmunoafinidad
Extractos de muestras libres de interferencias mayores de la matriz
adecuada para el análisis dimensional de CCDmejora: la sensibilidad, separación, resolución y visualización
Diapositiva 27Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
La cromatografía en capas delgadas en el
análisis de la OTA
Confirmación de la presencia de OTA a través de la CCD
Rociar las láminas de ccd con cloruro de aluminio y bicarbonato de sodio
Exponer las placas a vapor de amonio
Se ha confirmado la CCD en FI como método para la detección de OTA en el café
Diapositiva 28Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
La cromatografía en capas delgadas en el
análisis de la OTA
Principales desventajas de la CCD
Costo elevado de los fluorodensitómetros comerciales
La cuantificación sigue siendo una limitación Habilidad de los analistas para cuantificar
visualmente la toxina Falta de resolución Poca sensibilidad
Diapositiva 29Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
La cromatografía en capas delgadas en el
análisis de la OTA
Muestras normal y naturalmente contaminadas por OTA, disueltas con tolueno ácido acético
(99:1, v/v) y detección en placa normal de CCD
Diapositiva 30Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Métodos de detección para el análisis de la OTA
Principales ventajas
Métodos rápidos de prueba Fáciles de usar El análisis se puede llevar a cabo sobre el
terreno
Diapositiva 31Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Métodos de detección para el análisis de la OTA
Limitaciones Respuesta cualitativa: sí o no hay contaminación Resultados negativos falsos Necesidad de confirmación de los resultados
positivos
Desventajas Elevado costo recurrente Falta de atención respecto a la condición de la
extracción de las muestras Tendencia a no tener en cuenta los requisitos de
las muestras
Diapositiva 32Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Métodos de detección para el análisis de la OTA
Kits de análisis para detección en el caféCompuesto Empresa Producto Reconocimient
oMatrices primarias
ocratoxina r-Biopharm GmbH
RIDASCREEN OTA Column - Granos de café
ocratoxina VICAM OchraTest - Granos de café
OTA TECNA S.r.l. Immunoscreen OCHRA -
Cereales, piensos, vino, café verde y cacao
ocratoxina Tepnel BioSytems Ltd.
BioKits OTA Assay - Cereales, fruta seca, café verde, y vino blanco
OTA y B Romer Labs AgraQuant OTAssay (2-40ppb) -
Cebada, trigo, café verde, maíz, soya y trigo
OTA y B Romer Labs AgraQuantR Ochratoxin (2-40
ppb) ELISA Test Kit -
Trigo, maíz, cebada, café verde
Diapositiva 33Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
El método ELISA en el análisis de la OTA
Ventajas del sistema ELISA Sencillez Número de muestras que se pueden
analizar al mismo tiempo
Popular y útil instrumento de detección gracias a la disponibilidad de anticueros
policlonales y monoclonales contra la OTA
Diapositiva 34Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
El método ELISA en el análisis de la OTA
Desventajas del sistema ELISA Menos exacto y sensible Se encontraron muy pocas correlaciones
(tradicionales) Resultados positivos o negativos falsos No se debe usar como método cuantitativo Sólo se debe usar con alimentos en los que se
ha experimentado ampliamente y cuya eficacia se ha demostrado
En cada prueba deben utilizarse suficientes controles
Diapositiva 35Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Métodos de espectrofluorimetría para el análisis de la OTA
Suponen Utilizar columnas de inmunoafinidad con
fluorómetro
Principales desventajas Tasas mayores de resultados positivos y
negativos falsos
Diapositiva 36Módulo 6.2 - Análisis de la OTA:
Un aspecto importante de los programas de prevención contra la OTA
Garantía de calidad del análisis de la OTA
Garantía de calidad analítica Son esenciales programas para
garantizar resultados fidedignos Donde se requiere aceptabilidad
internacional, es importante la acreditación
Se proporciona orientación detallada sobre garantía de calidad analítica para el análisis de la OTA en la sección de documentación de apoyo del módulo 5.2 de este CD-Rom
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