análisis cualitativo de carbohidratos

Análisis cualitativo de CarbohidratosHarold Andrés Salamanca Ortíz 20101150054

Andrea Catalina Rodríguez Murcia 20101150049

Carbohidratos• Moléculas con CHO (hidratos de carbono.

• Son aldehídos o cetonas con múltiples grupos hidroxilo.

• Almacenamiento de energía, síntesis de moléculas más complejas.

Ensayo General

Fundamento• Los polisacáridos, disacáridos o trisacáridos se hidrolizan y forman

monosacáridos (calentamiento con ácido mineral concentrado):

Fundamento• Estos monosacáridos se convierten en furfural o 5-hidroxi metil furfural

(calentamiento y ácido sulfúrico o fosfórico):

Fundamento

• Los furfurales formados son volatilizados con vapor y reaccionan con p-toluidina o anilina para formar bases de Shiff coloreadas:

Procedimiento

5-10 mg del compuesto

O unas gotas de solución

del compuesto a sequedad

Gotas de ácido fosfórico

Cubrir con un papel filtro mojado con 2 gotas de reactivo (sln 10%

de toluidina en HAc al 10%)

Ensayo de Molish

Fundamento • Identifica monosacáridos (pentosa o hexosa)

• Convierte el monosacárido en furfural (o sus derivados), el cual reacciona con alfa naftol formando un compuesto de coloración púrpura – violeta:

•

Procedimiento

20 mg del compuesto

1 mL de agua

2 gotas reactivo de

Molish Ácido sulfúrico

Por las

paredes del

tubo

Procedimiento

Consideraciones

• Algunos carbohidratos complejos pueden dar ensayos negativos, especialmente los insolubles en agua. Algunos

polialcoholes como las hexitas pueden dar ensayo positivo.

Diferenciación entre azúcares reductores-no reductores

Ensayo de Fehling

Fundamento• Identifica azúcares reductores de no reductores.

• Los carbohidratos reductores se oxidan a sales de ácidos aldónicos cuando el Cu 2+ del reactivo de fehling se reduce a Cu 1+.

Procedimiento

10 mg de compuesto

1 mL de sln A

1 mL de sln B

Debido a la formación de

óxido de cobre

Ensayo de Benedict

Fundamento• Tiene el mismo fundamento del ensayo de Fehling:

Procedimiento

10 mg de compuesto

2 mL de reactivo

benedict

Debido a la formación de

óxido de cobreCalentamiento a baño María

durante 3 minutos

Diferenciación entre monosacárido-disacárido

Ensayo de Barfoed

Fundamento• Los monosacáridos se oxidan más fácilmente que los disacáridos.

• El acetato de cobre cristalizado oxida al monosacárido reduciendo al Cu 2+ a Cu 1+. El precipitado se forma en 2 minutos. En disacáridos se forma en más tiempo:

Procedimiento

En 2 minutos

10 mg del compuesto

2 mL del reactivo

Diferenciación entre monosacáridos

Ensayo de Seliwanoff

Fundamento• Identificación de cetohexosas, diferenciándolas de las aldohexosas.

El calentamiento a más de 15

minutos produce la isomerización

de la D-Glucosa (aldosa) en D-

Fructosa (cetosa), por lo que la

glucosa da prueba positiva

La sacarosa siendo disacárido da

prueba positiva debido a su

hidrólisis ácida, dando la D-

glucosa y D-Fructosa

Procedimiento

En 2 minutos

1 mL de sln de azúcar al 5%

1 mL del reactivo

A baño María

Ensayos para pentosas

Ensayo de Bial

Fundamento• El HCl del reactivo de Bial convierte a la pentosa en furfural, la cual reacciona

con orcinol para formar un complejo de color verde

Procedimiento

Solución

carbohidrato al 5%

1 mL reactivo bial

Ensayo de Tollens

Fundamento• La pentosa se convierte en furfural con calentamiento en HCl, y se hace

reaccionar con un fenol (floroglucinol) para formar un complejo rojo:

Procedimiento

10 mg del compuesto + 5mL de HCl 6N

10 mg de fluoroglucinol

Calentar a baño María x 1 minuto

Coloración roja

Prueba de la Bencidina de Tauber

Fundamento Característico para identificación de pentosas.

Trabaja de forma similar que en la prueba de Tollens, pero en este caso, el ácido es acético y el compuesto con el que se condensa el furfural es una bencidina.

Procedimiento• 1 mL de sln de bencidina + 2 gotas de solución de carbohidrato

• Calentar a ebullición

• Enfriar rápidamente

Color violeta

Caracterización de azúcares por formación de osazonas

Fundamento

Fundamento• Las osazonas de diferentes azúcares tienen punto de fusión y características

diferentes:

• Hidrazona

• Color blancoManosa

• Al formarse se separa al principio como un aceiteArabinosa

• Se separa de forma cristalina

• No precipita en calienteLactosa

Procedimiento

En un tubo de ensayo

0,2 g de carbohidrato

0,4g de clorhidrato de fenilhidracina

puro

0,6g de acetato de sodio

cristalizado

4 mL de agua

Tapar con un corcho sin

ajustar

Baño maría a 100°C

Agitar el tubo ocasionalmente

sin retirar del baño

Anotar el tiempo de formación de

la osazona

Procedimiento alternativo

0,5 g de carbohidrato + 2mL de agua

1 mL HAc glacial + 3 mL agua + 1 mL fenilhidracina

pura

Agitar hasta obtener una sln

clara

Agregar la 2sln a sln de azúcar

Agitar cuidadosamente

Colocar el tubo en baño maría

Anotar el tiempo de formación de

la osazona

En cada tubo

por separado

ResultadosAzúcar Osazona

t de formación (min) Pto de fusión (°C)

Manosa 0,5 205

Fructosa 2 205

Glucosa 4 205

Xilosa 7 164

Ramnosa 9 185

Arabinosa 9 166

Galactosa 15-19 196

Sacarosa 30 205

Lactosa - 200

Maltosa - 208