02. identificación de fluidos

María José Farfán Espunymariajose.farfan@justicia.es

Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias ForensesDepartamento de Madrid. Servicio de Biología

Identificación de fluidosEjercicio de intercomparación “Estudio de

polimorfismos de ADN en manchas de sangre y otras muestras biológicas” 2014

Quito (Ecuador), 11/09/2014

2014/ Módulo Forense - Nivel básicoEstudio práctico forense

M4: ítem forense para identificación de fluidos y análisis genético.

¿Podría el ítem forense M4 corresponderse con una mezcla de fluidos? Establezca la naturaleza del componente o de los posibles componentes del mismo.

2014/ Módulo Forense - Nivel avanzadoEstudio práctico forense

M6: ítem forense para identificación de fluidos y análisis genético

M7: ítem forense para identificación de fluidos y análisis genético

M8: ítem forense para identificación de fluidos y análisis genético

Indique la naturaleza de los componentes y el número mínimo de contribuyentes detectados en los ítems M6, M7 y M8.

M450 µL de mezcla de sangre M3 +

saliva en servilleta de papel

M64 µL de sangre en hebra

de hilo dental

M724 µL de mezcla de sangre de vacabrava + saliva en hisopo de nailon

M850 µL de mezcla de semen M1 + saliva en fragmento de camiseta

M458/72 (81 %)

M642/52 (81 %)

M742/52 (81 %)

M842/52 (81 %)

Sangre+semen+saliva 40 26 26 25

Sangre+semen 14 12 11 9

Sangre+saliva 0 0 1 1

Semen+saliva 0 0 0 2

Sólo sangre 2 4 4 0

Sólo semen 1 0 0 5

Sólo saliva 1 0 0 0

Fluidos investigados

2005 (M5)24/56 (43 %)

2014 (M4)58/72 (81 %)

Sangre+semen+saliva 4 40

Sangre+semen 6 14

Sólo sangre 14 2

Sólo semen 0 1

Sólo saliva 0 1

Mezcla de sangre + saliva

M4

Vestigioinvestigado

Sangre Semen Saliva

Nº labs 56 55 41

Resultados POSITIVO

(6 solo perox)

NEGATIVO

(10 solo AcP)

37 POSITIVO4 NEGATIVO

[3 Phadebas, 1 Seratec*]

* 3706 Este lab informa un perfil individual para M4 diferente del consenso

Labs 3717, 3718, 3751 3706*

mezcla de sangre M3 + saliva en servilleta de papel

ISO/IEC 17025: “Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y calibración”

VALIDACIÓN

� Identifica aspectos de un procedimiento que son críticos y deben ser cuidadosamente monitorizados y controlados.

9

10

http://www.enfsi.eu/sites/default/files/documents/dna_contamination_prevention_guidelines_for_the_file_contamantion_prevention_final_-_v2010_0.pdf

11

Método Nº labs Técnica N

Inmunocromatografía 47 Hexagon OBTI TEST 26

RSID Blood 9

Seratec HemDirect 2

RapidSignal Occult Blood 5

ABACard HemaTrace 1

HemCheck 6

Peroxidasa 29 Adler/Bencidina 13

Kastle Meyer/Fenolftaleína 10

Peroxtesmo 4

BlueStar 1

Piramidon/Thevenon-Roland 2

Cristalografía 6 Cristales de Teichman 6

Otros 3 Abon Biopharm 1

ELEKTROFOR 1

Widy 1

INVESTIGACIÓN DE SANGRE EN M4 56 labs

12

Método Nº labs Técnica N

Fosfatasa ácida 20 α-naftil fosfato 12

Phosphatesmo 5

Otros (2 Roche , 1 ?) 3

PSA(Antígeno específico de próstata)

35 Seratec PSA Semiquant 12

Hexagon PSA 1

RapidSignal PSA 3

ABACardPSA 4

PSA Rapid 6

PSA-Check-1 7

Otros (OneStep Inlab , PSA Roche) 2

Semenogelina 13 RSID Semen 13

Observaciónespermatozoides(microscopía)

13 Árbol de Navidad 10

Hematoxilina/eosina 1

Otros (Korim Stockis , Eritrosina) 2

INVESTIGACIÓN DE SEMEN EN M4 55 labs

13

Método Nº labs Técnica N

Amilasa 41 RSID Saliva 22

Phadebas 13*

SALIgAE 2

Seratec Amylase 3**

Otros (2 Roche, Analisa, IodyneTest, Amilokit-Wiener)

5

Observación célulasepiteliales(microscopía)

1 Hematoxilina/eosina 1

INVESTIGACIÓN DE SALIVA EN M4 41 labs

* 3 falsos negativos** 1 “falso negativo”

3706 Saliva NEGATIVO (Seratec)

3.3 Observaciones a los ítems M4 y M5.

3706

En la muestra M4 no hay evidencias de mezcla de perfiles genéticos, no obstante, no podemos descartar una mezcla de fluidos (sangre) en proporción que no sea detectable.

Para M4 informa un perfil individual de varón (21 STR) diferente al consenso

3717 Saliva NEGATIVO (Phadebas)

3.3 Observaciones a los ítems M4 y M5.

3717M4 constitui uma mistura na qual pode estar presente M3 e um indivíduo do sexo masculino...

Para M4 informa un perfil mezcla (23 STR) similar a consenso salvo por 3 drop-outs (1 en FGA y 2 en D12)

3718 Saliva NEGATIVO (Phadebas)

3.3 Observaciones a los ítems M4 y M5.

3718El ítem M4 es una mezcla de haplotipos de ADN mitocondrial por lo que no se envian los resultados.

Para M4 informa un perfil mezcla (23 STR) similar a consenso salvo por 1 drop-in (stutter) en D10

3751 Saliva NEGATIVO (Phadebas)

3.3 Observaciones a los ítems M4 y M5.

3751

Las pruebas preliminares determinaron la presencia de sangre humana en la M-4, los ensayos utilizados para la determinación de otros fluidos disponibles en este laboratorio dieron resultado negativo a la presencia de esperma o saliva, por lo que no se procedió a la extracción diferencial.

Para M4 informa un perfil mezcla (21 STR) igual al consenso

M6

Vestigioinvestigado

Sangre Semen Saliva

Nº labs 42 38 26

Resultados POSITIVO

(4 solo perox)

NEGATIVO

(5 solo AcP)

NEGATIVO

1 lab (3954) no realiza pruebas pero informa SANGRE

Sangre en hebrade hilo dental

“Los caracteres macroscópicos de las manchas de sangre son

insuficientes para diferenciarlas de falsas manchas que tienen la

misma apariencia [...]. Es, pues, necesario someterlas a reacciones

de identificación [...]”

C. Simonin en “Medicina Legal Judicial” (1955)

“As stated, all red or brownish stains are not blood. The first task

of the laboratory is to verify or exclude the hematologic origin of

the stain, and a number of highly sensitive presumptive tests exist

than can detect minute traces.”

G.T. Duncan y M.L. Tracey en “Introduction to Forensic Sciences”, Ed. W.G.Eckert (1980)

“A menudo, el aspecto de una mancha es muy demostrativo de

que está formada por sangre; otras veces la apariencia es menos

clara. Tanto en un caso como en otro, la prueba de convicción

debe ser confirmada en su naturaleza para que tenga valor.”

E. Villanueva en “Medicina Legal y Toxicología”, Gisbert Calabuig (2004)

18

Método Nº labs Técnica N

Inmunocromatografía 37 Hexagon OBTI TEST 21

RSID Blood 8

Seratec HemDirect 1

RapidSignal Occult Blood 4

HemCheck 4

Peroxidasa 22 Adler/Bencidina 8

Kastle Meyer/Fenolftaleína 7

Peroxtesmo 3

BlueStar 1

Piramidon/Thevenon-Roland 2

FecalOccultBlood 1

Cristalografía 4 Cristales de Teichman 4

Otros 1 Abon Biopharm 1

INVESTIGACIÓN DE SANGRE EN M6 42 labs

19

Método Nº labs Técnica N

Fosfatasa ácida 12 α-naftil fosfato 8

Phosphatesmo 3

Otros (?) 1

PSA(Antígeno específico de próstata)

27 Seratec PSA Semiquant 9

Hexagon PSA 1

RapidSignal PSA 3

ABACardPSA 3

PSA Rapid 5

PSA-Check-1 5

PSA-HYB 1

Semenogelina 9 RSID Semen 9

Observaciónespermatozoides(microscopía)

10 Árbol de Navidad 8

Hematoxilina/eosina 1

Eritrosina 1

INVESTIGACIÓN DE SEMEN EN M6 38 labs

20

Método Nº labs Técnica N

Amilasa 26 RSID Saliva 18

Phadebas 8

SALIgAE 1

Amilokit-Wiener 1

INVESTIGACIÓN DE SALIVA EN M6 26 labs

M7Vestigio

investigadoSangre Semen Saliva

Nº labs 42 37 27

Resultados 37 INMUNOCR31 NEG4 POS*2 INC**

NEGATIVO

(5 solo AcP)

24 POSITIVO3 NEGATIVO[2 Phadebas

1 Amilokit-Wiener]

1 lab (3954) no realiza pruebas pero informa SANGRE

3707, 3751, 3945

** 3907 [Adler +, OBTI+ muy débil]** 3715 [RSID]

* 3711 [OBTI+]* 3743 [Seratec HemDirect + muy débil]* 3759 [OBTI+]* 3923 [RSID]

Mezcla de sangre de vaca brava + saliva en hisopo de nailon

22

M7

Test de Adler: positivoHexagon OBTI: inconcluyente (banda muy débil)Microscopía: se han observado polimorfos nucleares.

“[…] podría ser una reacción cruzada con sangre animal que se une inespecíficamente o una muy baja cantidad de sangre humana presente en la saliva del donador o sangre humana degradada.”

3907

23

Método Nº labs Técnica N

Inmunocromatografía 37 Hexagon OBTI TEST 21 (2+, 1?)

RSID Blood 9 (1+, 1?)

Seratec HemDirect 2 (1+)

RapidSignal Occult Blood 4

HemCheck 4

Peroxidasa 24 Adler/Bencidina 10

Kastle Meyer/Fenolftaleína 7

Peroxtesmo 3

Piramidon/Thevenon-Roland 2

FecalOccultBlood 1

Aminofenazona 1

Cristalografía 1 Cristales de Teichman 1

Otros 3 Combur test 1

Inmunodifusión en gel 1

LC-MS (subunidad alfa de la hemoglobina bovina)

1

INVESTIGACIÓN DE SANGRE EN M7 42 labs

24

Método Nº labs Técnica N

Fosfatasa ácida 13 α-naftil fosfato 9

Phosphatesmo 3

Otros (?) 1

PSA(Antígeno específico de próstata)

27 Seratec PSA Semiquant 9

Hexagon PSA 1

RapidSignal PSA 3

ABACardPSA 3

PSA Rapid 5

PSA-Check-1 5

PSA-HYB 1

Semenogelina 8 RSID Semen 8

Observaciónespermatozoides(microscopía)

10 Árbol de Navidad 8

Hematoxilina/eosina 1

Eritrosina 1

INVESTIGACIÓN DE SEMEN EN M7 37 labs

25

Método Nº labs Técnica N

Amilasa 27 RSID Saliva 18

Phadebas 8

SALIgAE 1

Seratec 1

Amilokit-Wiener 1

INVESTIGACIÓN DE SALIVA EN M7 27 labs

M8

Vestigioinvestigado

Sangre Semen Saliva

Nº labs 34 42 28

Resultados NEGATIVO

(5 solo perox)

POSITIVO

(5 solo AcP)

26 POSITIVO1 NEGATIVO*

[Phadebas]

1 INCONCLUY** [Phadebas]

* 1 falso negativo (3718)** 1 Inconcluyente (3921)

Mezcla de semen M1 + saliva en fragmento de camiseta

27

Método Nº labs Técnica N

Inmunocromatografía 29 Hexagon OBTI TEST 15

RSID Blood 7

Seratec HemDirect 1

RapidSignal Occult Blood 4

HemCheck 4

Peroxidasa 13 Adler/Bencidina 7

Kastle Meyer/Fenolftaleína 3

Peroxtesmo 1

Piramidon/Thevenon-Roland 2

FecalOccultBlood 1

Bluestar 1

Cristalografía 1 Cristales de Teichman 1

INVESTIGACIÓN DE SANGRE EN M8 34 labs

28

Método Nº labs Técnica N

Fosfatasa ácida 14 α-naftil fosfato 8

Phosphatesmo 5

Otros (?) 1

PSA(Antígeno específico de próstata)

28 Seratec PSA Semiquant 10

Hexagon PSA 1

RapidSignal PSA 3

ABACardPSA 3

PSA Rapid 5

PSA-Check-1 5

PSA-HYB 1

Semenogelina 11 RSID Semen 11

Observaciónespermatozoides(microscopía)

18 Árbol de Navidad 10

Hematoxilina/eosina 4

Eritrosina 3

Korin-Stockis 1

INVESTIGACIÓN DE SEMEN EN M8 42 labs

29

Método Nº labs Técnica N

Amilasa 28 RSID Saliva 19

Phadebas 8*

SALIgAE 1

Seratec 1

Amilokit-Wiener 1

INVESTIGACIÓN DE SALIVA EN M8 28 labs

¡Muchas gracias!