-genotipado de proteínas lácteas -sexaje de embriones aplicaciÓn de la pcr a la tipificaciÓn de...

-Genotipado de proteínas lácteas

-Sexaje de embriones

APLICACIÓN DE LA PCR A LA TIPIFICACIÓN DE GENES DE INTERÉS EN PRODUCCIÓN ANIMAL

Universidad de Zaragoza

PRODUCCIÓN LÁCTEA:

- Existían grandes desequilibrios en la producción.

- Incapacidad de absorber los excedentes.

- Necesidad de derivar la producción hacia derivados lácteos.

Universidad de Zaragoza

- Genotipado de proteínas lácteas con influenciaen producción (calidad y cantidad) láctea.

- Elección del sexo en embriones antes de transferencia.

-Tipado de sexo y proteínas lácteas en embriones.

- Detección de hembras Free-Martin

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS

BB Kappa Casein

Universidad de Zaragoza

P.C.R.P.C.R.

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS

PROTEÍNAS DEL CUAJO

- CASK

- CASB

-CASA1

-CASA2

PROTEÍNAS DEL LACTOSUERO

- LGBB- LAA

Universidad de Zaragoza

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS (CASK)

Amplificación por PCR Alelo Específico (A.S.O.)

Universidad de Zaragoza

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2)

Exón VIIIIntrón VIIIIntrón VII

Oli 31 Oli 32

Ser Ser Glu CASA2A TGT ACT GAG GTAAG

CASA2D TGT ACT GAT GTAAG

Mnl-1

Universidad de Zaragoza

396 bpPCR

396 bpCASA2A

396 bpCASA2B

Mnl-I

272 bp 124 bp

Ser Ser Glu CASA2A TGT ACT GAG GTAAG

CASA2D TGT ACT GAT GTAAG

Mnl-1

-

+

DD AA AD

CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEAS (CASA2)Universidad

de Zaragoza

CASKB/CASBB/LGBB

1 . CARACTERIZACIÓN GENÉTICA DEPROTEÍNAS LÁCTEASUniversidad

de Zaragoza

DETECCIÓN DE PROTEÍNASLÁCTEAS

SEXAJE DE EMBRIONES

PROGRAMAS DE TRANSFERENCIA EMBRIONARIA

ELECCIÓN DELSEXO

DETECCIÓN DE GENES DE INTERÉS

TIPIFICACION DE EMBRIONESUniversidad de Zaragoza

““Sistema XY”Sistema XY”XX -XX - XY - XY -

““Sistema ZW”Sistema ZW”

ZW -ZW - ZZ -ZZ -

X - X - ““Sistema X: A”Sistema X: A”XX -XX -

Universidad de Zaragoza

SELECCIÓN ARTIFICIAL DEL SEXO

Sexaje de embriones antes de la implantación.

- Citómetro de flujo

- Cromatografía

Separación de espermatozoides X e Y

- Métodos No invasivos- Enzimas ligadas al cromosma X (Toxicidad)- Detección Ag HY (Falsos positivos)

- Métodos invasivos: Biopsia embrionaria

(basado en la diferente masa, movilidad, contenido DNA, carga y antígenos de superficie)

Separación de espermatozoides X e Y

- Por diferencias de masa: el cromosoma Y tiene un peso menor en un 4,2% que el cromosoma X en bovino por lo que tienen distinta velocidad de sedimentación

- Por diferencias de movimiento: los espermatozoides Y se mueven a mayor velocidad que los espermatozoides X

- Por diferencias en el contenido de DNA mediante citometría de flujo. Se tiñe el DNA del espermatozoide con fluorocromos

- Por diferencias en antígenos de superficie: se basa en la detección del Antígeno Y de histocompatibilidad. Solo lo tienen los espermatozoides Y

Manipulación de embriones

Métodos invasivos : - obtención de una biopsia en estado de blastocisto (en bovino a los 7 días).- la cantidad de DNA obtenido a partir de una biopsia equivale a aproximadamente a 10 células (aprox. 100 pg)

Análisis de cariotipoAnálisis de regiones de DNAdel cromosoma Y

XY

XX

ZONAS DE COPIA ÚNICA

ZONAS REPETIDAS

+ -

SEXAJE DE EMBRIONES(Análisis de zonas de DNA del Cr Y)

AMPLIFICADOEN Y

MENOR SENSIBILIDAD

SÓLO AMPLIFICADO

EN

MAYOR SENSIBILIDAD

Universidad de Zaragoza

ZONAS DE COPIA ÚNICA

ZONAS REPETIDAS

+ -

2. SEXAJE DE EMBRIONES

ZFX/ZFY

BRY4a

Universidad de Zaragoza

SEXAJE DE EMBRIONES

ZFX

ZFXZFXZFY

ZONAS DE COPIA ÚNICA

100%

75%

50%

25%

250 ng 250 pg 80 pg 20 pg

Pst-1

Universidad de Zaragoza

Universidad de Zaragoza

Sexaje y genotipado de proteínas lácteas en el

embrión

SEXO/CASK

ABAA BB

AA

TIPAJE DE EMBRIONES(Zona BRY 4a)

SEXO/CASB

ABAA AA AA

Universidad de Zaragoza

DETECCIÓN DE ANIMALES FREE-MARTIN

FREEMARTINISMO: Originado por la fusión de loscoriones de dos embriones (macho y hembra) que lleva consigo un quimerismo XX/XY y afecta negativamentea las caracteristicas reproductivas de las hembras.

ZFY/ZFXZFY/ZFX

BRY4a/CASKBRY4a/CASK

Diluciones detectadas

l / 20

l / 50

Universidad de Zaragoza