METODO DE CUENTA TOTAL DE MOHOS Y LEVADURAS EN

ALIMENTOS

Conocer las tcnicas ms comunes para la cuenta de mohos y levaduras en alimentos, se observaran adems las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas de los mohos que

comnmente contaminan a los alimentos.

HONGOS

LEVADURAS: Hongos unicelulares esfricos u ovoides.

MOHOS: Hongos pluricelulares filamentosos.

- Eucariotas - hetertrofos - Algunos son dimrficos - Ausencia de movilidad - Reproduccin sexual y asexual - Importantes en la industria y la medicina - La mayora son Aerobios - Muchos son Anaerobios facultativos (Levaduras) Condiciones optimas: - acidez, [sales y azucares] - Temperaturas, [nutrientes]

LEVADURAS - La mayora de las levaduras crecen en humedad

- Temperaturas de 25 30 C

- pH acido

- En pH bsico pueden adaptarse y crecer lentamente en condiciones aerobias

- Las levaduras fermentadoras crecen lentamente en condiciones anaerobias

- Azucares como fuente de energa, algunas utilizan cidos orgnicos y alcohol

Saccharomyces cerevisiae

MOHOS - La mayora son aerobios (algunos son anaerobios facultativos)

- Temperaturas de 20 30 C (algunos crecen a bajas temperaturas)

- Crecen en altos porcentajes de humedad (pueden adaptarse)

- pH < 7

HIFAS MICELIO VEGETATIVO

MICELIO AEREO ESPORAS

Aspecto aterciopelado

MEDIOS DE CULTIVO - Selectivos para hongos

- Agar-Papa, Agar-Harina de Maz, mezclas de vegetales, sust. nat., etc.

- Picadura (Normalmente)

- Identificar el hongo a simple vista

-AGAR PAPA DEXTROSA:

Utilizado para el cultivo y recuento colonial de hongos y levaduras.

Altamente nutritivo

Permite la esporulacin y la produccin de pigmentos en algunos dermatofitos

Infusin de Papa 4.0 g/L

Dextrosa 20.0 g/L

Agar Bacteriolgico 15.0 g/L

pH 5.6 0.2

-Acido tartrico al 10%:

Adicionado al medio para inhibir el crecimiento bacteriano

-Solucin diluyente (NaCl 0.09%):

Para no daar las clulas

MEDIOS DE CULTIVO - Azul de metileno:

Utilizado para la tincin

-MEDIO WICKERHAM:

Es utilizado para el aislamiento de levaduras, puede ser adicionado con agentes selectivos

Agar bacteriolgico 15 g/L Fuente de N y a.a.

Extracto de levadura 3 g/L Fuente de Vitaminas

Extracto de malta 3 g/L C, Protenas y Nutrientes

Dextrosa 10 g/L Fuente de energa

Agar 20 g/L Agente solidificante

Peptona 5 g/L Nutrientes para rpido crecimiento

- Rafinosa:

La rafinosa es selectiva para una genero de levaduras

- Malta:

Deteccin y aislamiento de levaduras

PROCEDIMIENTO CUENTA DE MOHOS Y LEVADURAS

Inicio

Preparar las soluciones decimales de la muestra

Sembrar sobre superficie (con varilla doblada) 0.1 ml de cada dilucin (5x2) en placas de PDA.

Incubar las placas entre 25-30 C durante 2 a 5 Das

Sacar las cajas de incubacin y contar las colonias caractersticas de mohos y levaduras.

Fin

PROCEDIMIENTO OBSERVACIONES DE LAS CARACTERISTICAS DE MOHOS

Inicio

Cortar cada colonia caractersticas de mohos con un bistur.

Separar el agar con la colonia procurando no daarla.

Colocar estos fragmentos en portaobjetos limpios.

Observar morfologa miceliar area en microscopio de diseccin.

Transferir parte del micelio a otro portaobjeto y observarlo en microscopio ptico

Dibujar las estructuras observadas y compararlas con bibliografa

Fin

PROCEDIMIENTO OBSERVACIONES DE LAS CARACTERISTICAS DE LEVADURAS

Preparar frotis de las colonias de levaduras, teirlas con azul de metileno al 0.5 % durante 1 min y lavar con agua destilada.

Inicio

Observar al microscopio su morfologa.

L. grandes, valos aislados o apiculares aislados

Sembrar en tubos

(16x150mm) con medio

Wickerham y campana de Durham

con dextrosa

Fin

L. ovales, pequeas, agrupadas en micelio ramificado de L. apiculares, aisladas

Sembrar en tubos (16x150mm) con medio

Wickerham y campana de Durham adicionado

con rafinosa

Sembrar en tubos (25x150mm) con 10 mL de

caldo de extracto de malta esteril

Incubar a 25-30C

durante 2 a 8 dias.

Observar gas y turbidez

Observar pelicula superficial