UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA ESPECIALIDAD DE LABORATORIO CLINICO Y ANAT. PATOLOGICA LIC. TRIGOSO AVALOS WILSON E. CTMP 6226

UNIVERSIDAD ALAS PERUANASFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUDESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA ESPECIALIDAD DE LABORATORIO CLINICO Y ANAT. PATOLOGICA

LIC. TRIGOSO AVALOS WILSON E.CTMP 6226AO DE LA INTEGRACION NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA DIVERSIDAD

BIOQUMICA IIConsideraciones Generales.Fundamentos y caractersticas.Interpretacin de la Bioqumica.ADENOSINA DEAMINASA (ADA)ESPERMATOGRAMAADA(ADENOSINA DEAMINASA) Enzima esencial para el desarrollo del Sistema Inmune.ADENOSIN DEAMINASA (ADA)Es una enzima del grupo de las Hidrolasas involucrada en el catabolismo de las bases purnicas.

Cataliza la desaminacin irreversible de adenosina y 2-deoxiadenosina (nuclesidos endgenos) encontrado en cantidades pequeas a travs del cuerpo

A Inosina y Deoxinosina respectivamente liberando amonio (NH3) en el proceso.

La Funcin Fisiolgica PrincipalProliferacin y Diferenciacin LinfocticaMarcador de inmunidad celularSu actividad se encuentra aumentada Enfermedades: Respuesta Inmune esta mediada por clulas

Se encuentra en Linfocitos T activados.Presente en Lquidos Biolgicos de procesos inflamatorios (mediados por inmunidad celular)Micosis TBC

Alta sensibilidad y especificidad en TBC pleural, pericrdica, menngea, articular y peritoneal.ADENOSIN DEAMINASA (ADA)La ADA tiene dos isoenzimasADA 1Ampliamente distribuido (pH ptimo: 7 7.5)Acta por igual sobre los sustratos Regulando la Inmunidad CelularADA 2Menos ubicuo, coexiste con la ADA 1 nicamente en Monocitos y Macrfagos(pH ptimo: 6.5 y tiene afinidad dbil por la 2-deoxiadenosina)

Cuando Monocitos y Macrfagos son infectados por MO (niveles de ADA 2 y 2-deoxiadenosina se incrementan)ADENOSIN DEAMINASA (ADA)La actividad de la ADA en los diferentes Fluidos Una mezcla de ADA 1 y ADA 2

Estimar la cantidad precisa de cada isoenzima es complicada y poco prctica.

ADA 2: esta relacionada a procesos de actividad Linfocitos T y en especial en Tuberculosis menngea y pleural.ADENOSIN DEAMINASA (ADA)Enfermedades que cursan con disminucin de ADA

Inmunodeficiencia congnita combinada severaLeucemia Linfoide Crnica BEnfermedades que cursan con aumento de ADATuberculosisOtras enfermedades infecciosasFiebre tifoideaBrucelosisToxoplasmosisInfeccin VIHHepatitis viralesNeoplasias malignasConectivopatasHepatopatas crnicasEnfermedades hematolgicasTrastornos de la eritropoyesisLeucemias y sndromes proliferativos crnicosSarcoidosisArtropatas inflamatoriasDETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ADENOSIN DEAMINASA (ADA)Mtodo de Referencia: Bruno Galant y Gitiseppe GiustiPunto Final Colorimtrico

Adenosina + H2O + (PO4)2- Inosina + Amoniaco

Iones Amoniaco Quinoneimina + 4 H2O

ADA cataliza la reaccin en un medio tamponado cidoProduce la liberacin de Inosina y amoniaco.Iones de amonio (acido carblico-medio alcalino)Producen una coloracin azul intenso (Quinoneimina)

ADAMedio Tamponado (560 nm)DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD ADENOSIN DEAMINASA (ADA)Mtodo de Referencia: Galanti y Giusti modificadoPunto Final Colorimtrico

Adenosina + H2O Inosina + NH3

Iones Amoniaco Indofenol + H2O

El NH3 reacciona con el Hipoclorito de sodio y fenol a 37C ( con Nitroprusiato de sodio en medio alcalino como catalizador) para formar indofenol de color azul intenso que es medido a 640 nm.

ADAMedio Tamponado (640 nm)Reactivos: Color 1 (Acido carblico); Color 2 (Hipoclorito de sodio); Estndar (solucin de sulfato de amonio: 50U/L); conservar de 2 8 CBuffer 6.5 (Fosfato de sodio); Adenosina (C10H13N504/ NaN3); conservar temperatura ambienteBlancoEstndarBlanco MuestraMuestraMuestra---------10 ulAdenosina------250 ul250 ulBuffer 6.5250 ul250 ul------Estndar---10 ul------Color 1500 ul500 ul500 ul500 ulMuestra------10 ul---Color 2500 ul500 ul500 ul500 ulMezclar, tapar los tubos e incubar a 37 C durante 60 minutos; luego agregar:CLCULO DE LOS RESULTADOSADA (U/L) x Conc. Estndar

Ejemplo: Abs. Muestra: 1.208 Abs. Bl. Muestra: 1.056 Abs. Estndar: 0.259 Conc. Estndar: 50 U/L Abs. Bl. Reactivo: 0.062 (Absorbancia Muestra Absorbancia Blanco muestra)(Absorbancia Estndar Absorbancia Blanco Reactivo)

(1.208 1.056) x 50 = 38.5 U/L (0.259 - 0.062)VALORES DE REFERENCIASuero: 11 22 U/LLquido Cefalorraqudeo: 0 6 U/LLquido Pleural: 0 45 U/LLquido Pericrdico: 0 20 U/LLquido Asctico: 0 40 U/LLquido Articular: 0 40 U/LRelacin Liquido Pleural / Suero: < 1.3UTILIDAD CLNICAEstablecer la actividad de la Tuberculosis Pulmonar (marcador evolutivo de la respuesta al tratamiento convencional de TBC pulmonar)Diagnstico de la Meningitis Tuberculosa y en el diagnstico Diferencial entre pleuresas tuberculosas y neoplasias.ESPERMATOGRAMAEspermogramaSeminograma

GENERALIDADESEstudio de la pareja infrtil Forma integrada y simultnea (siguiendo un protocolo) Descartar los problemas ms frecuentes en el hombre como en la mujer.

ANDROLOGAEstudia la infertilidad masculina y los mecanismos que lo producen

INFERTILIDADIncapacidad de tener hijos despus de haber mantenido 12 meses de relaciones sexuales sin uso de mtodos contraceptivosGENERALIDADESINFERTILIDAD MASCULINA PRIMARIA

Cuando el varn nunca ha logrado fecundar a una mujer (alteracin en la calidad de liquido seminal)INFERTILIDAD MASCULINA SECUNDARIA

Cuando el varn ha tenido un hijo anteriormente, y en la actualidad muestra alguna alteracin en la calidad del lquido seminalInfertilidad no explicada: Cuando los parmetros de evaluacin del lquido seminal no demuestra ninguna anormalidadInfertilidad idioptica:Cuando se detecta una alteracin en el espermatozoide y/o en la calidad del lquido seminal y las alteraciones no pueden ser demostradasESPERMOGRAMAPrueba esencial para el anlisis de la Infertilidad masculinaEstudio de las enfermedades genitales masculinasEl anlisis del semen o Espermograma Evaluacin de los espermatozoides, Lquido seminal y presencia de otras clulas (leucocitos, bacterias)

APORTA INFORMACIN: Proceso de EspermatognesisFuncin de los espermatozoides Funcin de las glndulas sexuales accesoriasCARACTERSTICAS GENERALES DEL SEMENApariencia Volumen N Espermatozoides Motilidad Morfologa Vitalidad y presencia de Leucocitos.

Recuento y motilidad: Determinar si hay suficientes Espermatozoides que puedan alcanzar al ovocito.Morfologa: Capacidad de fertilizacin

Pruebas Complementarias (Funcionales)Correlaciona los resultados con posibles alteraciones de los rganos genitalesESPERMOGRAMAINDICACIONES DEL ESPERMATOGRAMAInfertilidadInfecciones GenitalesVaricocelePrdidas fetales recurrentesVasectomaCriptorquidiaTratamientos mdicos(quimioterapia, sulfasalazina, etc)Lesiones en escrotoOrquitis con paperasExposicin ocupacional a txicosVasovasostoma (reversin de la vasectoma)TOMA DE MUESTRA Recomendaciones de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS)La muestra debe ser coleccionada despus de 3 a 7 das de abstinencia sexual.Dos muestras deben ser colectadas para una evaluacin inicial. Con un intervalo de no menos de siete das ni ms de tres meses.Si los resultados de esos exmenes son marcadamente diferentes, se deben examinar muestras adicionales.Idealmente la muestra debe ser coleccionada en un bao privado cerca al Laboratorio con la alternativa de hacerlo en el domicilio. La muestra debe ser colectada previa higiene personal por procedimiento de masturbacin y eyaculada en un frasco. Muestras incompletas no deben ser analizadas. Las muestras deben estar protegidas de temperaturas extremas.Las muestras deben estar debidamente rotuladas con el nombre del paciente, fecha y hora de coleccin.PARMETROS MACROSCPICOS DEL ESPERMOGRAMAEvaluacin de la aparienciaColor (blanco gris claro- amarilloso), hematospermiaLa licuefaccinCoagulacin inmediata (para licuarse 5 40 minutos): PSA.Determinacin del volumenMayor o igual a 2 ml.La viscosidad o consistenciaFormacin de filamentos no mayor de 2 cm.pHValor normal entre 7.2 7.8ESTANDARIZACION DE LA METODOLOGAEvaluacin de la motilidadLa vitalidadRecuento y morfologa de los espermatozoidesExamen citobacteriolgico Anticuerpos antiespermatozoides (aglutinacin)ANALISIS MICROSCOPICO INICAL SIN DILUIREstimar el N de espermatozoides y decidir la dilucin10 ul semen (100X): filamento de moco y aglutinacin10 ul semen (400X): observar espermatozoides, decidir dilucinTemperatura de evaluacin: 20 y 24 CParmetros microscpicos se deben procesar por duplicado.PARMETROS MICROSCPICOS DEL ESPERMOGRAMAEspermatozoides por campo de 400XDilucin (semen + diluyente)Factores de conversinNumero de cuadrados contados25 10 5< 151:5 (1 + 4)20 8 415 401:10 (1 + 9)10 4 240 2001:20 (1 + 19)

5 2 1> 2001:50 (1 + 49) 2 0.8 0.4MOTILIDADa: Espermatozoides con motilidad progresiva rpida, a una velocidad > 25 um /s a 37Cb: Espermatozoides con motilidad progresiva lenta, a una velocidad entre 5 y 25 um /s a 37Cc: Espermatozoides con motilidad no progresivad: Espermatozoides inmvilesPARMETROS MICROSCPICOS DEL ESPERMOGRAMAFACTORES QUE AFECTAN LA MOTILIDAD DE LOS ESPERMATOZOIDESVaricoceleDesrdenes EndocrinosInfecciones GenitalesAnticuerpos antiespermatozoidesBacteriosperma Defectos en la colaAnormalidades en las secreciones de la prstata o vesculas seminalesHbito del cigarrilloConsumo excesivo del licorDrogasEstrsVITALIDADtil: saber si los espermatozoides inmviles estn vivos o muertos.% espermatozoides VIVOSColoracin con eosina (10 15 ul del semen + 50 ul eosina al 0.5%)Contar 200 espermatozoides (coloreados y no coloreados) a 400x.Los vivos impiden la penetracin del colorante, Los muertos adquieren la coloracin.El resultado se expresa en porcentajePARMETROS MICROSCPICOS DEL ESPERMOGRAMARECUENTOUtilizar la cmara de Neubauer.Cuadrante Central (Recuento de Glbulos rojos)Se diluye el semen, 10 ul de dilucin en ambos lados de la cmara y se procede a contar (200x - 400x)

10 spz. en cuadrante central: contar los 25 cuadrados10 40 spz: contar 10 cuadrados> 40 spz: contar slo 5 cuadrados

Los Resultados se promedian El valor se divide por el Factor de ConversinResultado final: millones de espermatozoides /mL de eyaculadoPARMETROS MICROSCPICOS DEL ESPERMOGRAMAMORFOLOGIAExamen detallado de 200 espermatozoidesPlaca coloreada con PAP o Gram (por duplicado). Utilizar aumento de 1000xSegn la OMS: es normal encontrar30% de los espermatozoides normales en los individuos frtiles20% de morfologa normal

EVALUACION DE LAS ANORMALIDADESDefectos de la cabezaSegmento intermedioColaPresencia de gotas citoplasmticas

PARMETROS MICROSCPICOS DEL ESPERMOGRAMA

AGLUTINACIONSugestiva de presencia de anticuerpos antiespermatozoidesEvaluar al momento de determinar la motilidadSe reporta semicuantitativamente en escala de cruces

ANTICUERPOS ANTIESPERMATOZOIDESPueden inducir la aglutinacin, inmovilizacin o lisis de los espermatozoidesSon del tipo IgA e IgG (rara vez IgM)Tcnica: Inmunoesferas y la reaccin mixta de Antiglobulina (MAR)PARMETROS MICROSCPICOS DEL ESPERMOGRAMAPRUEBAS ESPECIALIZADAS DEL SEMENCultivo del semenAcido ctricoZincFructosaFosfatasa cidaPruebas de hinchazn hipo-osmticaPenetracin en ovocito de hmsterPruebas de unin a la zona pelcidaPruebas de reaccin acrosomalBIOQUIMICA SEMINAL ORIGEN COMPUESTO VESICULA SEMINAL FRUCTUOSA, ACIDO ASCRBICO

PRSTATA ZINC, FOSFATASA ACIDA Y ACIDO CITRICO

EPIDDIMO ALFAGLUCOSIDASA - GLICERILFOSFORILCOLINA

ALFAGLUCOSIDASA Marcador de la Funcin del Epiddimo FRUCTUOSA CORREGIDA y PROLACTINA Marcadores de la Vescula Seminal FOSFATASA ACIDA y ZINC Marcadores de la Funcin ProstticaMTODOS USADOS EN BIOQUIMICA SEMINALALFAGLUCOSIDASA: Mtodo Descrito por Cooper y Col.Valor referencial: Mayor de 80 mU / eyaculado ZINC: Mtodo Descrito por Lampugnani y Col.Valor Referencial: 80 - 250 ug /mlFOSFATASA ACIDA: Mtodo ColorimtricoValor referencial : 400 - 700 U/LFRUCTUOSA : Mtodo ColorimtricoValor Referencial: 1.2 - 4.0 mg /mlFRUCTUOSA CORREGIDA : Mtodo Dr. GonzlezValor Referencial: 2.5 - 2.8 mg/ml/mill. Espermt /mlNOMENCLATURA DE ALGUNAS VARIABLES DEL LQUIDO SEMINALTERMINODESCRIPCIONNORMOZOOSPERMIAOLIGOZOOSPERMIAPOLIZOOSPERMIAASTENOZOOSPERMIA

TERATOZOOSPERMIAOLIGOASTENOTERATOZOOSPERMIAAZOOSPERMIAASPERMIAHIPERESPERMIAHIPOSPERMIANECROZOOSPERMIAEyaculado normal< de 20 millones de spz por mLMs de 250 millones de spz por mL< 50% de spz con motilidad progresiva (a y b) < de 25% de spz con motilidad de categora aMenos de 30% de spz con morfologa normalAlteracin de las tres variablesAusencia de espermatozoides en el eyaculadoAusencia de eyaculadoMs de 6 mL de eyaculadoMenos de 2 mL de eyaculadoMs del 40% de espermatozoides muertosVALORES NORMALES DEL ESPERMOGRAMA (segn la OMS) PARMETRO VALORES NORMALESVOLUMENpHTIEMPO DE LICUEFACCINCONCENTRACIN DE SPZRECUENTO TOTAL DE SPZ MOTILIDADMORFOLOGA LEUCOCITOS FRUCTUOSAFRUCTUOSA CORREGIDAFOSFATASA ACIDAZINCALFAGLUCOSIDASAPROLACTINA SEMINALINMUNOPERLAS > 2 mL 7.2 a 7.8 < de 30 minutos20 A 250 X 106 / mL40 X 106 / mL > 50% (categora a y b ) > 25 % (categora a) > 30% de formas normales < 1 X 106 / mL 1.2 - 4.0 mg / mL 2.5 - 8.0 mg/ml/mill spz/mL400 - 700 u / L80 - 250 ng / mL> 80 mU / eyac.6 - 23 ng /mL< 10 % de spz, adheridas a las perlas.