«Mejoras en el Método analítico de Cromatografía de gases con

detector de Ionización de Flama para el análisis de epoxi-

ácidos grasos»ACTIVIDAD 6

Equipo:Acevedo Coox KarlaBasto Moo Alma GpeGonzález Díaz MónicaSolís Conde Carolina

Fecha: 22 de mayo de 2013

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE YUCATÁNFacultad de Química

«Métodos de separación ópticos, electroquímicos y cromatográficos»

PROF. M. EN C. ALFREDO ARAUJO LEÓN

Resumen

En este estudio se reporta un método mejorado para el análisis de ácidos grasos epoxi. Existen datos sobre

estudios previos del análisis de ácidos grasos polares, pero debido a que un número grande de estos co-eluyen en la fracción polar, los cromatogramas son complejos lo

que compromete la precisión de estos estudios.Una separación de tres pasos de ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME’s) por extracción en fase sólida en una columna de sílica gel que remueve las interferencias de los hidroxi-ácidos grasos es

propuesta.

Se empleo cromatografía de gases con un detector de ionizacion de flama (FID) con una columna polar de CPSil88TM y se cuantificó

con un estándar interno de metil nonadecanoato.

Introducción La oxidación en los lípidos, es

una de las reacciones mas importantes en la comida pues

da como resultado su

deterioro.

Los ácidos grasos polares con uno o

mas grupos oxigenados como

epoxi, ceto o hidroacil pueden

estar presentes en los triacilgliceroles.

Los mayores precursores

de estos ácidos

grasos, son los

insaturados

Generalmente estos ácidos

grasos, tienen un efecto toxico pues producen «protoxinas»

En otros estudios se han

presentado muchos

problemas debido a las condiciones

cromatograficas

Este estudio puede

resolver algunos de

esos problemas

usando columnas

muy polares.La importancia de este estudio radica en que actualmente los estándares

reglamentarios para los alimentos seguros han aumentado y se pide un control determinado para los ácidos

grasos epoxi.

Reactivos: Tertbutil metil éter. 3-Cloroperoxy benzoico Sílica gel (para la columna) Metoxido de sodio Metil Oleato (C18:1) Metil linoleato (c18:2) Metil linolenato (C18:3) Metil nonadecanoato

(C19:0)

Muestras: 37 aceites provenientes de

5 mercados locales de Bélgica

Estándares: Thermoxidados Metil

oleato, linoleato y linolenato y aceito de girasol.

Materiales y métodos

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: Se realizó una transmetilación catalizada por

una base de metóxido de sodio a temperatura ambiente, para ello se centrifugó la muestra con tertbutil metil éter, luego se agregó ácido sulfúrico para prevenir la saponificación. Luego de una serie de pasos se recolectaron los FAME’s con 5 mL de dietiléter-hexano.

Materiales y métodos

PREPARACIÓN DE LA COLUMNA:1. Activación de la sílica gel calentándola en una

mufla por 12 horas y luego enfriar.2. Preparación de la sílica gel eluyendo el cartucho

de la columna con n-hexano-dietil-éter.3. Se optimizó la columna agregando 2 mL de

FAME y posteriormente eluyendo los compuestos polares: primero se eluyeron los ácidos grasos epoxi y posteriormente los hidroxi-ácidos grasos, ambos con n-hexano–dietiléter (98:2, v/v).

Materiales y métodos

SILACIÓN DE LOS FAMES: Los FAMEs fueron silados con 10% de

trimetilclorosilano en trifluoroacetamida. La reacción fue temperatura ambiente por 20 min, los reactivos fueron evaporados con nitrógeno y disueltos en iniso-octano antes de la inyección a GC.

Materiales y métodos

Instrumentación • Cromatógrafo: Agilent 6890N• Columna: CP-Sil88, 60 m x 0.25mm id. Capilar con 2 μm de película.

• Rampa: 50 ºC por 4 min; luego hasta 225◦C a 12◦C x min y mantener por 25 min.

• Gas acarreador: Helio

Condiciones cromatográfi

cas

• Caudal: para hidrógeno, aire y helio makeup) fue 40, 400 y 20 mL min-1 respectivamente.

• Temperatura: 300ºC

Detector FID

• Fue utilizado para la detección cualitativa de los FAMES polares y no polares.

• Equipo: Agilent 7890A GC a coplado a 5975C Mass Spectrometer (Agilent Technologies, Palo Alto,CA).

• Mismas condiciones que en FID-CG-. • Rampa: fue de 53◦C por 0.2 min luego a 200◦C y

despues hasta 700◦C min−1.

Espectómetro de masas

Los picos que identifican a los FAMEs fueron obtenidos después de la transesterificación del aceite de girasol y fueron separados por el método de 2 pasos en polares y no polares. Los resultados son mostrados en la siguiente figura:

Resultados y Discusiones

Resultados obtenidos por el espectrómetro de masas para la identificación de los isómeros cis y trans.:

Resultados y Discusiones

Los resultados mostrados en esta figura demuestran las interferencias observadas luego de dos separaciones de la figura 1; la región de epóxidos se puede remover con el método de separación de 3 pasos en sílica para separar los compuestos hidroxi de otros FAMES polares, lo cual tiene una gran resolución con picos bien separados (figura a).

El método desarrollado fue usado para analizar 37 diferentes muestras de aceite. Los resultados son mostrados en la siguiente tabla, donde solo los ácidos grasos insaturados relevantes en la producción de epoxi ácidos grasos son mostrados:

Conclusiones La innovación de este método son los 3 pasos de la separación de los ácidos

grasos en sílica gel lo que ha provocado mejoras en el análisis de los

epoxi ácidos grasos.

Con estos pasos de separación, en los cuales co-eluyen los hidroxi-ácidos grasos, se pueden ver mejores picos en la columna polar de Sil88 GC. Luego de este paso es

posible determinar los ácidos grasos polares menos oxidados debido al

incremento de sensibilidad, otorgado por el método.

El nuevo enfoque exhibe una excelente rendimiento con unos picos bien resueltos y límites de detección

menores.