acreditación técnica sim (separación inmunomagnética)
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ACREDITACIÓN DE MÉTODO SIM (Separación Inmuno Magnética) EN LABORATORIO: Caso Práctico.
Inma Solís
ACREDITACIÓN DE MÉTODO SIM Magnética) EN
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
Índice
Introducción
Histórico SIM - Legipid®
Legislación aplicable
Validación – AcreditaciónValidación – Acreditación
Trabajos realizados
Legipid®
Legislación aplicable
Acreditación
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
Acreditación
01 Introducción
25 años de experiencia25 años de experiencia
I+D+i
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
01 Introducción
NECESIDAD: satisfacción cliente
Rapidez: agilidad en la toma de decisiones
Fiabilidad: técnica sensible, buena recuperación, informe de validación
Bajo coste: reactivo + tiempo de ensayo + equipamiento + entrenamien
Acreditable: según ISO 17025 por ENACAcreditable: según ISO 17025 por ENAC
NECESIDAD: satisfacción cliente
Fiabilidad: técnica sensible, buena recuperación, informe de validación
Bajo coste: reactivo + tiempo de ensayo + equipamiento + entrenamiento
Acreditable: según ISO 17025 por ENAC
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
Acreditable: según ISO 17025 por ENAC
Adecuado al fin previsto
01 Introducción
NECESIDAD: fin previsto
Objetivo de la técnica
Aislamiento de la bacteria
Identificación de la bacteria aislada
Target de la determinación
Célula
cultivable
Ácidos nucleicos libres o extraídos en células
viables y no viables
Estrategia de
Extraer y AMPLIFICAR bacteria aislada
Detección rápida del nivel en la muestra
ambiental
viables y no viables
Célula intacta libre (potencialmente
infectiva)
Estrategia de detección
Aislar y CRECER la bacteria en cultivo
Extraer y AMPLIFICAR una secuencia génica
Fin previsto
Cumplimiento legislativo
Epidemiológico: Confirmar la sospechauna secuencia génica
Concentrar y CAPTURAR la célula
libre
Confirmar la sospecha
Preventivo: evitar el nivel infectivo
(contención primaria)
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
02 Histórico SIM – Legipid ®
� Año 2009 – Validación Kit
� Año 2010 – Ejercicio Intercolaborativo
� Año 2011 – Certificación AOAC
� Año 2013 – RD piscinas (RD 742/2013)
� Año 2015 – NT 32 ENAC
� Año 2017 – UNE 10030:2017
Legipid ®
Validación Kit
Ejercicio Intercolaborativo
Certificación AOAC
RD piscinas (RD 742/2013)
NT 32 ENAC
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
UNE 10030:2017
02 Histórico SIM – Legipid ®
Evolución muestras Legionella
2000
3000
4000
5000
6000
7000
Nº
mu
est
ras
anal
izad
as
0
1000
2000
Año 2010 Año 2011 Año 2012 Año 2013
L.pneu 704 840 236 385
L.sp 663 1556 1885 3083
Legipid ®
Evolución muestras Legionella
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
Año 2013 Año 2014 Año 2015 Año 2016 Año 2017
754 776 861 2048
4619 5179 5352 4604
02 Histórico SIM – Legipid ®
103 104
102 102
IMS: LEGIPID
Legipid ®
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
03 Legislación aplicable
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
03 Legislación aplicable
Cuantitativo
RecuperaciónReproducibilidad
Cualitativo
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
Límite de detección
03 Legislación aplicable
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
04 Validación – Acreditación
IMS – LEGIPID ®
Certificado AOAC nº 111101
Acreditación
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
04 Validación – Acreditación
IMS – LEGIPID ®
Certificado AOAC nº 111101
Validación inicial: 2 laboratorios ISO 17025
Sensibilidad
Especificidad
Falsos positivosFalsos positivos
Falsos negativos
Eficiencia
Acreditación
17025
95,3 %
88,4 %
11,6 %
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
11,6 %
4,7 %
92,4 %
04 Validación – Acreditación
IMS – LEGIPID ®
Certificado AOAC nº 111101
Validación inicial: 2 laboratorios ISO 17025
Estudio intercolaborativo 12 laboratorios
2 blancos2 muestras valor asignado 2,88 log
95,8 % concordancia100 % concordancia
Acreditación
ISO 17025
laboratorios
3 muestras valor asignado 3,82 log
2 muestras valor asignado 2,23 log
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
91,7 % concordancia 91,7 % concordancia
04 Validación – Acreditación
IMS – LEGIPID ®
Certificado AOAC nº 111101
Validación inicial: 2 laboratorios ISO 17025
Estudio intercolaborativo 12 laboratorios
Estudio inclusividad / exclusividad
64 cepas colección y ambientales Legionellaambientales Legionella
NO pneumophila
Acreditación
ISO 17025
laboratorios
58 cepas detectadas
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
58 cepas detectadas(91 % )
04 Validación – Acreditación
IMS – LEGIPID ®
Acreditación
Recuperación con muestras reales (sin inocular)
1
1,5
2
2,5
3
Ɩ Legipid-Cultivo Ɩ, log CFU
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0
0,5
Natural M1 M2
04 Validación – Acreditación
IMS – LEGIPID ®
Certificado AOAC nº 111101
Validación inicial: 2 laboratorios ISO 17025
Estudio intercolaborativo 12 laboratorios
Estudio inclusividad / exclusividad
Recuperación con muestras reales (sin
Acreditación
ISO 17025
laboratorios
(sin inocular)
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
04 Validación – Acreditación
IMS – LEGIPID ®
Acreditación
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
04 Validación – Acreditación
Cuantitativo
RecuperaciónReproducibilidad
Acreditación
Cualitativo
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
Límite de detección
04 Validación – Acreditación
1 ml 1 ml (1/10)
Legipid: log UFCeq1,……………………………………….…..., log
UFCeq10
9 mlagua destilada
10 x 9 ml L0
Paso 1: Titulación
Acreditación
,……………………………………….…..., log
Calcular
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Calcular
, s
Rango alto
04 Validación – AcreditaciónAcreditación
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05 Trabajos realizados
Estudios en duchas y lavapiesEstudios en duchas y lavapiestemporada de baño.
Estudios aguas utilizadas
Estudios en hospitales,
lavapies de playas antes de empezar la lavapies de playas antes de empezar la
utilizadas en el riego de campos de golf
SIM en la prevención de la Legionelosis. Castellón, 11-Julio-2017
, hoteles y balnearios
05 Trabajos realizados
PARÁMETROS CULTIVO EN PLACAISO 11731
TÉCNICAS MOLECULARES
(PCR y PMA
TIEMPO de RESULTADO
10-15 DÍAS 3-6 HORAS
CUALIFICACIÓN DEL OPERARIO
MEDIA ALTA
ESPECIFICIDAD MEDIA ALTA
AUTOMATIZACIÓN NO SI
INSTRUMENTALESPECÍFICO
NO SÍ
TRAINING MEDIO ALTO
Limite de detección es teórico según volumen sembrado de muestra.
El límite de detección real no proporciona cumplimiento al RD 865/2003.
TRAINING MEDIO ALTO
LOD BAJO / MEDIO(teórico / real)
BAJO (PCR)MEDIO (PMA
ACREDITABLE SI SI (PCR) Difícil (PMA
TÉCNICAS MOLECULARES
(PCR y PMA-PCR)
TÉCNICA FISH
LEGIPID
6 HORAS 4-6 HORAS 60 - 90 MINUTOS
ALTA ALTA BAJA
ALTA ALTA ALTA
NO SI
SI NO
ALTO MEDIO / ALTO BAJO
Limite de detección es teórico según volumen sembrado de muestra.
El límite de detección real no proporciona cumplimiento al RD 865/2003.
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ALTO MEDIO / ALTO BAJO
BAJO (PCR)MEDIO (PMA-PCR)
MEDIO / ALTO(células)
MEDIO – BAJO (UFC equivalentes)
(PCR) Difícil (PMA-PCR)
Difícil SI