PRCTICADE LABORATORIO DE BIOQUMICA IIABSORCIN INTESTINAL Y UTILIZACIN DE RIBOFLAVINA

OBJETIVO:

Determinar la tasa de absorcin de riboflavina en individuos en diferentes estados fisiolgicos. INTRODUCCIN.

La riboflavina, una de las vitaminas del complejo B, es absorbida normalmente en la segunda porcin del intestino delgado y utilizada segn las necesidades del organismo, mientras el excedente es excretado por la orina gracias a su gran solubilidad. Esta vitamina normalmente presenta coloracin amarilla, razn por la cual no requiere ser convertida qumicamente para producir un pigmento coloreado que se pueda determinar colorimtricamente. PROCEDIMIENTO.

La presente prctica incluye 48 horas de preparacin. Dos dias antes de la prctica todos los estudiantes consumirn comida en la que no se incluyan productos lcteos, huevos, snacks(mecatos), bebidas gaseosas, jugos envasados, frutas amarillas o verduras. Al da siguiente antes de consumir alimento cada estudiante descartar unos pocos mL de su orina y recolectar una muestra 50 mL de orina en un frasco de vidrio color mbar y la conservar en la nevera a 4C hasta su uso en el laboratorio. sta ser utilizada como blanco.

El da anterior a la prctica, DESPUS DE haber recogido su muestra de orina de 50 mL, todos los estudiantes debern recoger la totalidad de la orina producida en 24 horas y anotarn el volumen total obtenido. Uno de los estudiantes del grupo consumir EXACTAMENTE la misma comida que haya tomado el dia anterior, y junto con ella tomar una tableta de complejo B (Gen Far) por cada 12 Kg de peso si es mujer y una tableta por cada 10 kg de peso corporal si es varn, distribuidas en las tres comidas principales, es decir, si el clculo da 8.6 tabletas, se redondea a 9 y se toma 3 con el

desayuno, 3 con el almuerzo y 3 con la cena. El dia de la prctica, antes de desayunar descartar unos pocos mL de su orina (que sern contabilizados) y luego recoger una muestra de aproximadamente unos 50 mL de su orina en frasco de vidrio mbar (M1), la que ser conservada en la nevera a 4C hasta su procesamiento en el laboratorio. Un segundo estudiante consumir solamente yogurt sin sabor o color a frutas ad libitum (todo el que quiera) durante todo el da, y el da de la prctica antes de desayunar descartar unos pocos mL de su orina (que sern contabilizados) y luego recoger una muestra de aproximadamente unos 50 mL de su orina en frasco de vidrio mbar (M2), la que ser conservada en la nevera a 4C hasta su procesamiento en el laboratorio. Un tercer estudiante consumir solamente sales de rehidratacin (sin sabor ni color) durante todo el da y el da de la prctica, antes de desayunar descartar unos pocos mL de su orina (que sern contabilizados) y luego recoger una muestra de aproximadamente unos 50 mL de su orina en frasco de vidrio mbar (M3), la que ser conservada en la nevera a 4C hasta su procesamiento en el laboratorio.

Una vez recogida la muestra de orina del da de la practica todos pueden retomar sus hbitos alimenticios normales y disponerse para la parte experimental del laboratorio con sus dos muestras de orina de 50 mL contenidas en frascos mbar.

NOTA. No deben traer la totalidad de la orina recogida el da anterior, solo el dato del volumen en mL)Si la muestra de orina presenta turbiedad, tome 10 ml de muestra y agrguele 0.5 g de carbn activado, agite y filtre antes de proceder con la determinacin de riboflavina.

Para esta determinacin, disponga una serie de tubos de ensayo debidamente marcados como se ilustra en la siguiente tabla y agregue los componentes que en ella se indicanT1

(mL)T2

(mL)T3

(mL)T4

(mL)T5

(mL)BP

(mL)M1

(mL)M2

(mL)

M3

(mL)BM1

(mL)BM2

(mL)

BM3

(mL)

Patrn de riboflavina*86421-555555

Acido actico 0.02 N2468910555555

Agitar los tubos para que el color se distribuya uniformemente

* Anote la concentracin del patrn utilizado.

Finalmente lea la absorbancia de todos los tubos a una longitud de onda de 450 nm. A partir de la curva de calibracin obtenida con los patrones se calcular la concentracin de riboflavina en su orina y la tasa de depuracin de riboflavina en su grupo.

INFORME (para bitcora)

Sustente debidamente las respuestas a los siguientes interrogantes

A. Anlisis de resultados.

1. Calcule la cantidad de riboflavina absorbida por kg de peso en promedio entre los integrantes de su grupo utilizando la curva de calibracin preparada por ustedes en los tres estados fisiolgicos estudiados

2. Calcule la tasa de depuracin de riboflavina promedio en su grupo para los tres estados fisiolgicos estudiados. (Consultar el concepto)

3. Analice los resultados con base en lo reportado en la literatura cientfica en los tres estados fisiolgicos estudiados.

B. Cuestionario (Responda a las preguntas con la debida sustentacin cientfica)1. Describa el fundamento del mtodo espectrofotomtrico utilizado para la determinacin de riboflavina en la orina.2. Se deben presentar diferencias en la absorcin intestinal de riboflavina en los tres estados fisiolgicos estudiados? Si es ese el caso sustente debidamente las razones.

3. Describa cual es el papel fisiolgico de la riboflavina en el organismo humano4. Qu factores afectan la absorcin intestinal de riboflavina en humanos. 5. Explique cada una de las razones por las cuales en esta prctica se exigi una dieta preparatoria. 6. Para el desarrollo de esta prctica se poda haber administrado vitaminas del complejo B de forma inyectable, pero se prefiri su uso oral. Cules fueron las razones para preferir esta eleccin?