a - 1 2010 - metodos de estudio de celulas y tejidos
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CURSO:
HISTOLOGIA
TEORIA 1:
METODOS DE ESTUDIO DE LAS
CELULAS Y LOS TEJIDOS
UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA
FACULTAD DE ESTOMATOLOGIA
Roberto Beltrn Neira
Departamento Acadmico de Medicina, Ciruga y Patologa Oral
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TIPOS DE CELULAS
EUCARIOTICAS
Ncleo delimitado por doble membrana
Histonas asociadas a DNA
PROCARIOTICAS
Ncleo sin envoltura
No histonas
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TOMA DE MUESTRA
JSL
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PREPARADOS HISTOLOGICOS
FASES:
1 FIJACION
2 INCLUSION
3 CORTE
4 COLORACION
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FIJACION
Evita autodestruccin por enzimas
(autolisis) o por bacterias.
Insolubiliza las proteinas
Endurece el tejido para preservar la
morfologa y la composicin
qumica
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FIJACION
Fijadores:
Formaldehido 10%(Aldehido
Frmico, Formol )
FIJACION DOBLE. ME
Glutaraldehido (Aldehido
Glutrico) 2%- 6%
Tetraxido de Osmio
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INCLUSION
Deshidratacin
Batera de Alcoholes en
grado creciente
70%, 80%, 90% y Alcohol
Absoluto
Formol Deshidratacin Deshidratado
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INCLUSION
Diafanizacion (Aclaramiento)
Lquidos usados: Xilol
Necesidad de un liquido miscible en agua y
parafina
Extrae los lpidos
Tejido se torna Translcido
Deshidratado Aclarado
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INCLUSION
Inclusin Propiamente
Da consistencia firme a los tejidos
(cortes finos y uniformes)
Sustancias: Parafina (MO)
Resinas Epoxi:
Epon.(ME)
Muestra en parafina fundida (60
grados C)
La temperatura evapora el Xilol
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INCLUSION
Inclusin Propiamente
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CORTE
MICROTOMO
ESPESOR: MO => 3 -8 um
ME => 0,02 - 0,1 um
CRIOSTATO
Evita pasos antes de
parafina, la
congelacin no
inactiva las enzimas,
no elimina lpidos
JSL
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COLORACION
FASES
Lamina
porta Objetos Muestra
A.- Extensin agua (45grados C)
JSL
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COLORACION
Desparafinizacin:
Xilol: Disuelve la
parafina.
Hidratacin:
Bateria de Alcholes
de grado decreciente
Coloracin Propiamente
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Coloracin propiamente
El tejido es de por s incoloro
Colorantes: son: - cidos
- bases
Forman sales con los radicales
ionizables
Elementos (organelas,
molculas, etc.)
Basfilo: Elemento que se tie
con colorantes bsicos
Acidfilo: Elemento que se tie
con colorantes cidos
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COLORANTES
Colorantes Elementos
Bsicos: Hematoxilina Nucleoprotenas
cidas
Ribosomas
Azul de Metileno
Azul de Toluidina Glicoproteinas
Acidos: Eosina Protenas
Fucsina Acida Citoplasmticas
Orange G
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TINCIN CON HEMATOXILINA Y EOSINA
La tcnica bsica en el
laboratorio de Histologa
consta de dos etapas de
tincin: pase por
Hematoxilina y pase por
Eosina.
JSL
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ACIDO PERYODICO DE SCHIFF (PAS)
Glicgeno, mucina, y
membranas basalesRojo a purpura
Hongos.Rojo a purpura
Ncleo...Azul
JSL
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TRICROMICA DE MASSON
NUCLEO..NEGRO
MUSCULO, CITOPLASMA Y
QUERATINAROJO
COLAGENO...AZUL O VERDE
JSL
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SUDAN III
Tejido adiposo:
naranja
JSL
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METACROMASIA
Colorantes bsicos de
anilina: Azur A, Azul de
toluidina y Azul de metileno.
Se usan para identificar los
Proteoglucanos.
Presentan metacromasia:
mucina, matriz del cartlago,
y los grnulos de las clulas
cebadas Contenido de los grnulos: - Heparina
- Histamina
Azul de Toluidina
Tie los grnulos de color rojo JSL
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PROCESAMIENTO DE TEJIDOS DUROS
DIENTE
Descalcifica con Acido Nitrico al 10% DESGASTE
JSL
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HUESO
JSL
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Deshidratado de las muestras
A continuacin volvemos a deshidratar los
cortes para preservarlos y hacer
duraderas las muestras
JSL
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Montaje de las muestras
Finalmente, cubrimos los "portas" con una
delgada lmina de vidrio (cubreobjetos) en
la cual colocamos una gota de medio
adhesivo
JSL
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MICROSCOPIO OPTICO
PARTES: - Mecnica y Optica
Optica
Condensador: Proyecta un cono de luz
sobre el objeto
Objetivo: Proyecta imagen aumentada
sobre el ocular
Determina el Lmite de Resolucin
Ocular: Ampla mas
Proyecta la imagen sobre: La
retina, pantalla, placa
fotogrfica
JSL
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MICROSCOPIO OPTICO
Lmite de Resolucin
Mnima distancia que deben existir entre dos puntos
para que aparezcan individualmente, es de 0,2 um
Aumento Total
Aumento del X Aumento del = 1200X
Objetivo Ocular
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MICROSCOPIO ELECTRONICO
Posee una elevada resolucion 1,0 nm
UNIDAD REPRESENTACION VALOR
Micrmetro1um = 0,001mm
Nanmetro1nm = 0,001um
Basado en el principio de usar un haz de
electrones en vez de rayos luminosos. JSL
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Cromatina Indice de Actividad Celular
Ncleo poco teido
DNA poco condensado
> superficie de contacto
Actividad
Ncleo bien teido
DNA muy condensado
< superficie de contacto
< Actividad
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INTERPRETACION DE IMAGENES
JSL